Анализ мазок периферической крови. Мазок периферической крови: нормохромные эритроциты нормальных размеров, шистоцитов, дегмацитов (“надкусанных” клеток) или сфероцитов нет. Анализ осадка мочи
Скорость оседания эритроцитов (СОЭ):
Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) в норме равна для мужчин 4-10 мм/ч, для женщин - 4-15 мм/ч. Она зависит от количества эритроцитов, их диаметра и объема, вязкости крови, содержания в плазме белковых фракций, желчных кислот и пигментов. При снижении температуры помещения, где проводятся исследования (менее 20 °С), СОЭ замедляется, при повышении - увеличивается.Расшифровка СОЭ:
Скорость оседания эритроцитов не является показателем, специфическим для какого-либо определенного заболевания, однако ускорение СОЭ, как правило, указывает на появление патологического процесса в организме инфекционно-воспали-тельного характера (пневмония, абсцесс легкого, перитонит, пиелонефрит и т.п.), инфекционно-аллергического характера (ревматизм, коллагенозы), опухолевого характера (рак, саркома, гемобластозы) и анемического характера.
Особенно выраженное ускорение СОЭ (60-80 мм/ч) характерно для парапротеинемических гемобластозов (миеломная болезнь, болезнь Вальденстрема). Замедление СОЭ наблюдается при полицитемии (увеличении количества эритроцитов) у больных эритремией, хронической пневмонией, язвенной болезнью желудка и луковицы двенадцатиперстной кишки и др. и при значительном сгущении крови. Особенностью детского возраста является снижение СОЭ у детей первой недели жизни.
Расшифровка содержания гемоглобина:
Уменьшение количества гемоглобина в крови является основным лабораторным симптомом анемий различной этиологии.Содержание гемоглобина варьирует в широком диапазоне в зависимости от степени анемии и ее формы. Так, при железо-дефицитной анемии снижение гемоглобина обычно колеблется в пределах 85-110 г/л. Резкое снижение уровня гемоглобина характерно для острой кровопотери, гипопластической анемии, гемолитической анемии в стадии криза (45-80 г/л), увеличение концентрации гемоглобина (180-210 г/л) наблюдается при эритремии (для диагностики которой важно исследование количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, которые при этом заболевании повышаются), легочно-сердечной недостаточности и сгущении крови.
Фракции гемоглобина:
У здорового человека имеется три основных типа гемоглобина: примитивный - Р, фетальный - F, взрослый - А. Тип гемоглобина Р преобладает у плода до трехмесячного возраста, у новорожденного гемоглобин представлен на 20% типом F и соответственно на 80% типом А. У ребенка 4-5 месяцев гемоглобин F составляет 1-2% (как у взрослого человека).Расшифровка:
Повышение значений гемоглобина F является важным диагностическим критерием для В -талассемии, но также имеет место при других гемолитических анемиях, гипопластической анемии, лейкозах.Количество эритроцитов, норма:
Количество эритроцитов в норме у мужчин составляет 4,0-5,0 х 10 12/л, у женщин 3,5-4,5 х 10 12/л, .Расшифровка:
Увеличение количества эритроцитов (эритроцитоз) наблюдается при эритремии (истинной полицитемии Вакеза), у больных с недостаточностью функции внешнего дыхания, например: при хронической пневмонии, пневмосклерозе, синдроме Хамана-Рича и др., а также у людей, проживающих в условиях высокогорного климата.Уменьшение количества эритроцитов (эритроцитопения) чаще всего имеет место при анемиях в результате кровопотери (постгеморрагические анемии), дефицитных анемиях (железодефицитная, витамин В12-фолиево-дефицитная и др.), анемиях вследствие усиленного распада эритроцитов (гемолитические).
Цветовой показатель:
Цветовой показатель отражает среднее содержание гемоглобина в одном эритроците.Расшифровка цветового показателя:
По цветовому показателю судят о том, каким является содержание гемоглобина в эритроцитах - нормальным, пониженным или повышенным, что имеет большое диагностическое значение в установлении характера анемии (нормохромная, гипохромная, гиперхромная). При нормальном насыщении эритроцитов гемоглобином цветовой показатель (ЦП) равен единице. У новорожденного ребенка ЦП в среднем составляет 1,2, на 2-3-й день жизни повышается до 1,3, далее снижается, достигая к третьему месяцу жизни величин, нормальных для взрослого (0,85-1,15).Цветовой показатель менее 0,85 характерен для гипохромных анемий (железодефицитная анемия и др.), для нормохромных анемий составляет от 0,85 до 1,15, а гиперхромные анемии характеризуются ЦП более 1,15 (витамин В12-фолиево-дефицитная анемия, анемия Аддисона-Бирмера).
В диагностике анемии большую роль играет микроскопическое исследование эритроцитов, которое определяет ее характер, и решается на основании изменения величины, формы, окраски эритроцитов и наличия в них различных включений.
Диаметр эритроцитов:
Диаметр эритроцитов в норме составляет в среднем 7,5 мкм.Расшифровка:
Изменение величины отдельных эритроцитов называется анизоцитозом, который является ранним признаком анемии. Однако у новорожденных анизоцитоз встречается в норме в течение первых 2-3 месяцев жизни. Эритроциты диаметром более 9 мкм называются макроцитами, менее б мкм - микроцитами. Макро-цитоз наблюдается при усиленной регенерации крови, дефиците витамина В12 и др., микроцитоз - при хронических кровопотерях, при дефиците железа.Эритроциты:
Эритроциты в норме имеют дискообразную форму.Расшифровка эритроцитов:
Когда эритроциты теряют свою нормальную дискообразную форму и становятся сферовидными, вытянутыми, веретенообразными, то эти изменения формы эритроцитов называют пойкилоцитозом, который указывает на более тяжелое течение заболевания и встречается чаще всего при гемолитических анемиях. При врожденной гемолитической анемии Минковского-Шоффара эритроциты имеют форму маленьких шариков (микросфероциты), при талассемии обнаруживаются эритроциты овальной формы (овалоциты), при серповидноклеточной анемии - серповидные эритроциты (дрепаноциты).Окраска эритроцитов:
Окраска эритроцитов зависит от количества содержащегося в них гемоглобина и от величины красных кровяных клеток.Расшифровка:
Эритроциты с нормальной окраской называются нормохромными, с менее интенсивной окраской - гипохромными, с более интенсивной - гиперхромными. Различие в окраске отдельных эритроцитов называют анизохромией. Гипохромия встречается при железодефицитной, хронической постгеморрагической, гипоапластической и некоторых миелотоксических анемиях. Гиперхромия наблюдается при витамин В12-фолиево-дефицитной анемии, пернициозоподобных и некоторых гемолитических анемиях (например, при микросфероцитарной анемии).Полихроматофилия (появление в мазках крови клеток кроме розово-красных эритроцитов синего, фиолетового и переходных цветов) характерна для различных гемолитических анемий и является показателем регенераторной способности костного мозга в отношении продукции эритроцитов. В норме полихроматофилия встречается только у новорожденных (до 1,5 месяцев жизни). Обнаружение в мазках периферической крови ядерных эритроидных клеток - нормо-бластов - имеет аналогичное диагностическое значение, как полихроматофилия, и характерно для гемолитических анемий, метастазов опухоли в костный мозг. Гигантские ядерные эритроциты - мегалобласты, как и появление базофильной пунктации в эритроцитах связано с патологическим кроветворением.
Резистентность эритроцитов:
Резистентность эритроцитов - стойкость эритроцитов к различным воздействиям. При этом принято определять осмотическую резистентность эритроцитов. У здорового человека начало гемолиза в свежей крови отмечают при концентрации хлорида натрия 0,5-0,45%. А полный гемолиз при 0,4-0,35% раствора хлорида натрия.Расшифровка:
Понижение осмотической резистентности эритроцитов, то есть появление гемолиза эритроцитов при более высокой, чем в норме концентрации раствора натрия хлорида (0,7-0,75%) наблюдается при наследственном микросфероцитозе, также при аутоиммунной гемолитической анемии. Повышение осмотической резистентности эритроцитов характерно для талассемии, гемоглобинопатии.Ферментопатия эритроцитов:
Ферментопатия эритроцитов - исследование активности ферментов в эритроцитах. Наиболее распространенной наследственной ферментопатией эритроцитов является дефицит глюкозо-б-фосфатдегидрогеназы (Г-б-ФД). Для диагностики дефицита Г-б-ФД используют количественное определение активности ферментов в эритроцитах. У здоровых людей имеет место образование в эритроцитах единичных телец красного цвета(тельца Гейнца-Эрлиха).Расшифровка:
В патологических Г-б-ФД эритроцитах появляется большее количество телец (4-6), которые также характерны и для передозировки сульфаниламидов, отравлении анилиновыми красителями, при дефиците других ферментов (глютатион-редуктазы, б-фосфоглюконатдегидрогеназы).Ретикулоциты:
Ретикулоциты являются важным показателем регенераторной способности кроветворной ткани. В норме на 1000 эритроцитов приходится от 2 до 10 ретикулоцитов.Расшифровка:
Увеличение ретикулоцитов в периферической крови наблюдается при гемолитических анемиях, особенно в период криза (количество ретикулоцитов может быть 20-30), острых кровопотерях, лечении железом железодефицитной анемии, витамином В12 и фолиевой кислотой витамин В12-фолиево-дефицитной анемии, при полицитемии, а также у новорожденных. Наличие ретикулоцитоза позволяет заподозрить скрытое кровотечение. Снижение количества ретикулоцитов или их полное отсутствие отмечается при арегенераторных гипо-апластических анемиях, а также при не леченой витамин В12-фолиево-дефицитной анемии.Лейкоцитарная формула:
Лейкоцитарной формулой называют процентное соотношение отдельных форм лейкоцитов, которые считают в окрашенных мазках крови в пересчете на 100 лейкоцитов и выражают в виде процентного содержания каждого вида белых кровяных клеток. Помимо количественной характеристики лейкоцитарной формулы необходимо проводить качественную оценку морфологического состава кровяных клеток, поскольку это позволяет установить факт наличия у больного патологии кроветворной системы, конкретизировать клинический вариант патологического процесса, степень его выраженности, эффективность лечения (в динамике) и прогноз.Лейкоциты:
Лейкоциты периферической крови делятся на гранулоциты (клетки, в протоплазме которых имеется зернистость) - базофилы, эозинофилы, нейтрофилы палочкоядерные и сегментарные и агранулоциты (клетки, в протоплазме которых зернистость отсутствует) - лимфоциты и моноциты.Расшифровка лейкоцитов и норма:
Увеличение или уменьшение количества отдельных видов лейкоцитов может быть абсолютным и относительным. Изменение процентного содержания не всегда соответствует колебанию абсолютных величин, что необходимо принимать во внимание при анализе лейкоцитарной формулы крови.В крови взрослого человека в норме насчитывают от 4 до 8 х 10 9/л лейкоцитов. Уменьшение числа лейкоцитов (лейкопения) встречается при очень тяжелых инфекционных заболеваниях и токсических состояниях: грипп и многие другие вирусные заболевания, брюшной тиф, дистрофия, голодание, анафилаксия, гиперспленизм, при применении некоторых лекарственных препаратов (сульфаниламиды, бутадион, левомицетин, цитостатики, иммунодепресеанты), токсических веществ (бензол, мышьяк), при лучевой болезни. Отчетливо выражена лейкопения при нейтропениях различного генеза, гипо- и апластической анемиях, а также некоторых заболеваниях эндокринной системы: болезнь Аддисона, болезнь Симмондса.
Увеличение количества лейкоцитов более 8 х 10 9/л называют лейкоцитозом, который, в свою очередь, может быть абсолютным и относительным. Относительный лейкоцитоз возникает вследствие поступления лейкоцитов в ток крови из органов, служащих для них депо. Наблюдается это после приема пищи (пищеварительный лейкоцитоз), интенсивной мышечной нагрузки (миогенный лейкоцитоз), горячих и холодных ванн, сильных эмоций (вегетососудистый лейкоцитоз).
Абсолютный лейкоцитоз может быть обусловлен гиперплазией кроветворной ткани, что наблюдается при лейкозах, а также является временной реакцией крови на воспалительный процесс в организме (пневмония, плеврит, воспалительные заболевания со стороны желчного пузыря и протоков, перитонит, гнойный абсцесс, сепсис, рожа, ангины, инфекционные заболевания бактериального происхождения). Кроме этого, лейкоцитоз может возникать вследствие воздействия экзогенных токсических веществ (угарный газ, нитробензол и др.).
Количество базофилов, норма:
Количество базофилов в периферической крови в норме невелико и колеблется от 0 до 1%.Расшифровка:
Увеличение количества базофилов наблюдается при диабете, нефрозе, микседеме, в острой стадии аутоиммунной тромбоцитопении, при хроническом миелолейкозе, миелофиброзе. У большинства больных параллельно с увеличением концентрации базофилов прослеживается высокий уровень гистамина в крови и моче. Снижение количества базофилов отмечается при введении кортикостероидов, адреналина, при гипертиреозе и любой стрессовой ситуации.Количество эозинофилов, норма:
У здоровых взрослых людей в периферической крови содержится от 0 до 5% эозинофилов. У ребенка в норме в крови содержание эозинофилов колеблется от 1 до 4%.Расшифровка:
Увеличение числа эозинофилов (эозинофилия) наблюдается при гельминтозах (аскаридоз, энтеробиоз, анкилостомидоз, трихинеллез), лямблиозе, лимфогранулематозе, хроническом миелолейкозе, эозинофильной гранулеме, аллергических состояниях (бронхиальная астма, крапивница, сенная лихорадка, пищевая и лекарственная аллергия).Снижение количества эозинофилов (эозинопения) или полное отсутствие (анэозинофилия) наблюдается в начальном периоде острых инфекционных и воспалительных процессов, инфаркта миокарда. Появление в этих случаях эозинофилов в крови является хорошим прогностическим признаком «эозинофильная заря выздоровления».
Палочко-ядерные и сегментоядерные нейтрофилы, норма:
В норме в периферической крови обнаруживаются палочко-ядерные и сегментоядерные нейтрофилы. У здоровых людей содержится от 1 до 6% палочкоядерных нейтрофилов и от 45 до 70% сегментоядерных.Расшифровка:
В патологических условиях в периферической крови могут появляться нейтрофилы с круглым ядром, так называемые юные нейтрофилы, либо их предшественники - миелоциты, что обозначается как сдвиг лейкоцитарной формулы влево. Сдвигом лейкоцитарной формулы вправо называется увеличение более зрелых нейтрофилов, то есть сегментоядерных.Моноциты, норма:
У здоровых людей количество моноцитов в периферической крови составляет 2-9%.Расшифровка:
При различных патологических состояниях отмечается также уменьшение или увеличение числа моноцитов. В большинстве случаев моноцитоз свидетельствует развитии патоиммунных реакций в организме. Моноцитоз в сочетании с нейтрофилезом наблюдается при затяжном септическом эндокардите, гнойно-воспалительных процессах в организме, при туберкулезе. Абсолютный моноцитоз развивается как специфическая реакция на вирус Эпштейн-Барра и характерен для инфекционного мононуклеоза. Моноцитопения характерна для тяжелых септических заболеваний и гипертоксических форм инфекционных процессов.Лимфоциты, норма:
Количество лимфоцитов в норме в периферической крови составляет 18-40%.Расшифровка лимфоцитов:
Увеличение количества лимфоцитов (лимфоцитоз) часто встречается при заболеваниях, сопровождающихся нейтропенией, и является относительным. Абсолютный лимфоцитоз встречается при инфекционном мононуклеозе, хроническом лимфолейкозе, туберкулезе и некоторых инфекционных болезнях (корь, краснуха, ветряная оспа, коклюш). Лимфопения нередко встречается у больных с нейтрофилезом, то есть является относительной.Абсолютная лимфоцитопения наблюдается при всех заболеваниях, сопровождающихся замещением лимфоидной ткани другими клеточными элементами (лимфогранулематоз, лимфосаркома, острый и хронический миелоидный лейкоз), а также при уремии, тяжелых септических состояниях, распространенном и прогрессирующем туберкулезе, лучевой болезни, длительном применении гормонов.
Изменения морфологического состава периферической крови:
Помимо количественной оценки лейкоцитарной формулы микроскопическое исследование мазков крови позволяет установить качественные изменения морфологического состава периферической крови.Расшифровка:
Наиболее значительными эти изменения бывают при лейкозах. У больных с острым лейкозом общее количество лейкоцитов может быть сниженным, нормальным или повышенным. Качественный состав периферической крови при этом характеризуется наличием незрелых анаплазированных родоначальных клеток кроветворения - бластов (лимфобластов, монобластов, миелобластов, эритробластов, плазмобластов, мегакариобластов и морфологически не распознаваемых полипотентных и унипотентных клеток-предшественниц.Нередко периферическая кровь на 90-95% состоит из бластных клеток и только на 5-10% из зрелых лейкоцитов. Разрыв в гемограмме между бластными клетками и зрелыми очень характерен для острого лейкоза и обозначается как лейкемическое зияние, лейкемический провал (hiatus leucemicus). В зависимости от преобладания того или иного вида бластных клеток выделяют соответствующие формы лейкоза: лимфобластный, миелобластный, миеломонобластный, плазмобластный, мегакариобластный, эритролейкоз, эритромиелоз.
При остром лейкозе морфологические изменения касаются не только белой крови, выявляются изменения, касающиеся красной крови в виде анемии (происходит угнетение красного ростка кроветворения, нарушение созревания тромбоцитов). При хроническом лейкозе морфологические изменения периферической крови в основном определяются формой лейкоза, стадией развития патологического процесса, его остротой. Наиболее часто встречаются хронический миелолейкоз и лимфолейкозы. Морфологические изменения периферической крови при хроническом миелолейкозе характеризуются увеличением количества Лейкоцитов за счет выраженного сдвига лейкоцитарной формулы влево вплоть до миелоцитов и промиелоцитов. Нередко при этом в периферической крови повышается количество базофилов и эзинофилов различной степени зрелости (базофильно-эозинофильная ассоциация).
Определенную гематологическую характеристику остроты и степени выраженности хронического миелолейкоза дает сопоставление процентного соотношения зрелых и незрелых нейтрофилов. Небольшое количество миелобластов, промиелоцитов, миелоцитов и метамиелоцитов (незрелых форм) в пределах 10-15% может свидетельствовать о доброкачественном течении лейкемического процесса. При обострении хронического миелолейкоза в периферической крови увеличивается количество бластных клеток, что обозначается как бластный криз. Количество тромбоцитов при хроническом миелолейкозе в ранних стадиях заболевания бывает повышенным или нормальным, а в конечной стадии уже сниженным. Анемия не характерна для начальных стадий хронического миелолейкоза, а появляется только в развернутой стадии и прогрессивно нарастает в терминальной.
При хроническом лимфолейкозе морфологические изменения лейкоцитарной формулы представлены в виде лейкоцитоза, главным образом за счет лимфоцитов, количество которых может доходить до 80-90%, причем лимфоциты обычно малого размера. Большинство клеток представлено зрелыми элементами. При относительно доброкачественном течении заболевания количество незрелых лимфоидных клеток (пролимфоцитов, лимфобластов) составляет около 5-10%. Увеличение количества этих клеток указывает на обострение патологического процесса.
Показатели гемограммы при хроническом моноцитарном лейкозе характеризуются увеличением количества моноцитов до 30-40% на фоне выраженного лейкоцитоза до 15000-30 000.
Эритремия (болезнь Вакеза) характеризуется изменениями в гемограмме в виде эритроцитоза, лейкоцитоза, тромбоцитоза, повышением концентрации гемоглобина до 160-200 г/л на фоне уменьшения СОЭ до 1-2 мм/ч.
Тромбоциты, норма:
Количество тромбоцитов в норме колеблется от 180 х 10 9/л до 320х10 9/л.Расшифровка тромбоцитов:
Уменьшение количества тромбоцитов (тромбоцитопения) имеет место при болезни Верльгофа, лейкозах, отравлении бензолом, анилином. Увеличение количества тромбоцитов (тромбоцитоз) отмечается при кровопотерях, после спленэктомии и при некоторых формах злокачественных новообразований.Плазматические клетки:
Плазматические клетки в норме практически не встречаются.Расшифровка:
Увеличение числа плазматических клеток наблюдается при всех заболеваниях, сопровождающихся напряжением лимфоидного аппарата, в частности при инфекционном мононуклеозе. Также имеет место при таких инфекционных заболеваниях, как корь, краснуха, ветряная оспа, скарлатина, серозные менингиты.Волчаночные клетки:
Волчаночные клетки (L Е-клетки) образуются в результате фагоцитоза нейтрофильными лейкоцитами, реже моноцитами ядер клеток, содержащих ДНК. У здоровых людей волчаночные клетки отсутствуют.Расшифровка:
Обнаружение L Е-клеток является специфическим симптомом системной красной волчанки. Однако получение отрицательного результата не исключает данного заболевания, так как это бывает в раннем периоде заболевания. WBC (white blood cells) - количество лейкоцитов крови (х10 9 /л). Измерение числа лейкоцитов проводится после полного лизиса эритроцитов специальным реактивом. Все частицы размером более 35 фл считаются как лейкоциты. Тромбоциты, размер которых меньше порогового значения 35 фл, исключаются из подсчета. Коэффициент вариации (CV) при автоматическом определении этого показателя составляет 2-3%.При наличии резистентных к лизису эритроцитов они определяются как лейкоциты и вызывают повышение числа WBC. В этих случаях следует обратить внимание на изменение формы RBC гистограммы.
Таблица 11. Возможные ошибки измерения лейкоцитов
6.4. Подсчет лейкоцитарной формулы
Многие современные гематологические анализаторы определяют от 6 до 10 показателей лейкоцитарной формулы с учетом относительного и абсолютного количества клеток, так называемые 3Diff или 5Diff .
6.4.1 Гематологические анализаторы, определяющие 18 параметров крови, дифференцируют все WBC на три популяции (3Diff). В основе работы анализаторов 3Diff лежит принцип кондуктометрии. Клетки дифференцируются по объему на 3 категории: лимфоциты, нейтрофилы и средние клетки, состоящие преимущественно из моноцитов с добавлением эозинофилов и базофилов. Определяется как относительное (%), так и абсолютное их содержание (клетки/л).
Автоматические гематологические анализаторы, определяющие 26 и более параметров крови, дифференцируют WBC на пять популяций (5Diff). В основе работы анализаторов 5Diff используется комбинация кондуктометрического метода с другими технологиями, такими как: метод лазерного светорассеивания, радиочастотный анализ, использование дифференцирующих лизатов, цитохимический метод.
Автоматический дифференцированный счет лейкоцитов должен выполняться в день взятия крови. Для получения наиболее точных результатов дифференциального анализа лейкоцитов рекомендуется исследование образцов крови проводить в промежуток времени от 30 минут до 5 часов после взятия материала, при значительном лейкоцитозе после предварительного разведения крови – от 5 минут до 1 часа.
После 24-часового интервала изменения, возникшие при хранении, могут воздействовать на систему «сигналы тревоги» и искажать результат. На дифференциальный счет популяций лейкоцитов влияют те же факторы, что и на общее число лейкоцитов. Появление «сигналов тревоги» указывает на наличие патологических изменений в исследуемом образце и требует микроскопического исследования окрашенного мазка крови.
6.4.2 Некоторые факторы, влияющие на дифференциальный счет лейкоцитов в гематологических анализаторах 3Diff
LY и LY%: микроформы бластов, нормобласты, резистентные к лизису эритроциты (например, эритроциты, содержащие малярийный плазмодий) могут быть причиной ошибочного измерения числа LY.
MO и MO%: крупные лимфоциты, атипичные лимфоциты, плазматические клетки, бластные клетки и избыточное количество базофилов могут оказывать влияние на точность подсчета МО. Часть эозинофилов также может просчитываться в данном канале.
GR и GR%: избыток эозинофилов, метамиелоцитов, промиелоцитов, бластных клеток и плазматических клеток могут быть причиной ошибочного подсчета GR и GR%.
На лейкоцитарной гистограмме в анализаторах 3Diff субпопуляции лейкоцитов попадают в три главные области гистограммы распределения WBC, которые отделены с помощью пороговых значений (дискриминаторов). Если результаты подсчета попадают в область нормальных значений, то никаких маркеров, предупреждающих о возможной патологии не появляется. Форма гистограммы изменяется при нарушении распределения лейкоцитов по популяциям или недостаточном лизисе эритроцитов.
Таким образом, гематологические анализаторы 3Diff в большинстве случаев позволяют выявлять изменения лейкоцитарной формулы крови, однако не способны проводить полную дифференцировку лейкоцитов. При наличии микроформ бластных клеток, по своему размеру сходных с лимфоцитами, анализаторы, принцип измерения которых основан только на кондуктометрическом методе, будут относить их к популяции мелких клеток (лимфоцитов).
6.4.3 В гематологических анализаторах 5Diff подсчитываются все 5 классов лейкоцитов, встречающихся в норме: нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы и базофилы. Использование одновременно нескольких методов анализа позволяет значительно улучшить качество дифференцировки клеток и, следовательно, работу анализатора. В анализаторах данного типа более сложная система «сигналов тревоги», позволяющая уточнить наличие патологических клеток (незрелых нейтрофилов, атипичных лимфоцитов, бластных клеток, нормобластов). При плохом качестве материала анализаторы выдают дополнительные «сигналы тревоги», такие, например, как сгустки тромбоцитов, фрагменты эритроцитов-призраков. Они снабжены соответствующими программами обнаружения незрелых клеток, активированных лимфоцитов, бластных клеток.
Обозначения флагов дифференциальных параметров зависят от фирмы-производителя анализатора.
Это могут быть: LIC (Large Immature Cells), которые, в свою очередь, подразделяются на:
IMG (Immature Granulocytes), незрелые гранулоциты,
IMM (Immature Monocytes) незрелые моноциты,
IML (Immature Lymphocytes) незрелые лимфоциты,
LS (Left Shift) – левый сдвиг, указывающий на возможность левого сдвига в формуле крови (палочкоядерные нейтрофилы)
исследование мазка крови.
При лимфоцитозах или наличии измененных по объему лимфоцитов появляются следующие флаги:
Аtipical Lymphocytes, Variant
Lymphocytes, Reactive
Lymphocytes, Abnormal Lymphocytes
Большинство гематологических анализаторов 5Diff имеют жесткую систему как внутреннего, так и внешнего контроля качества, что делает их работу более надежной.
Несмотря на все достоинства, даже самые современные гематологические анализаторы обладают некоторыми ограничениями, которые касаются точной морфологической оценки патологических клеток (например, при лейкозах), и не в состоянии полностью заменить световую микроскопию.
Контроль качества исследования клеточного состава крови на автоматических гематологических анализаторах
Порядок проведения контроля качества
Установления единых требований к аналитическому качеству количественных методов;
Ежесерийного выполнения процедур внутрилабораторного контроля качества с использованием контрольных материалов (оперативный контроль качества);
Регулярного участия в программах внешней оценки качества (ГОСТ Р 53133.1―2008) .
Внутрилабораторный контроль качества представляет собой систему повседневного слежения за точностью получаемых на гематологическом анализаторе результатов для поддержания стабильности аналитической системы, выявления и устранения недопустимых случайных и систематических погрешностей и заключается в сопоставлении результатов исследования проб с результатами исследования контрольного материала и измерении величины отклонения.
Проводится в соответствии с инструкцией к прибору и инструкцией к используемым контрольным материалам и требованиями стандарта ГОСТ Р 53133.2―2008 ..
Внутрилабораторный контроль качества должен быть:
Систематическим, повседневным, проводиться по единым правилам, т.е. анализ контрольных проб должен включаться в обычный ход работы лаборатории;
Охватывать все области измерений (норма, высокие и низкие патологические значения);
Производиться в реальных условиях работы лаборатории (так же, как обычные пробы пациентов, т.е. тем же персоналом и в тех же условиях);
Объективным (желательно "шифровать" контрольный материал, чтобы исполнитель не знал, где опыт, а где контроль).
Принцип проведения внутреннего контроля достаточно прост: периодически (в каждой серии) нужно проводить измерение одного и того же контрольного материала, а результаты этих измерений заносить на контрольную карту.
Хорошо организованная система внутреннего контроля качества позволяет достаточно эффективно выявлять ошибки, связанные с:
внешними варьирующими факторами (реактивы, калибраторы, расходные материалы);
внутренними варьирующими факторами (организация в лаборатории "домашних реактивов", обучение персонала, обслуживание приборов, ведение документации, реакция персонала на возникающие проблемы).
Контролем за правильностью измерения концентрации гемоглобина может служить величина МСНС.Чаще всего увеличение МСНС свидетельствует об ошибках, допущенных при измерении пробы (погрешности определения гемоглобина или MCV). В подобных ситуациях наиболее точные результаты определения концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным методом могут быть получены на фотометре при добавлении в холостую пробу 20 мкл сыворотки больного. Таким образом, данный параметр может быть использован и как индикатор ошибок, допущенных на аналитическом или преаналитическом этапах работы.
Требования к качеству исследований клеточного состава крови
Для оценки качества исследований рассчитываются следующие статистические
показатели:
Среднее арифметическое значение или средняя арифметическая (Х):
- предварительная оценка прецизионности (по 10 измерениям в одной серии) - CV 10 ;
Предварительная оценка относительного смещения – В 10 ;
Окончательная оценка прецизионности (по 20 измерениям) CV 20 ;
Окончательная оценка относительного смещения В 20 .
В таблице 11 представлены рекомендуемые стандартом ГОСТ Р 53133.1─2008 (приложение А) внутрилабораторных погрешностей гематологических исследований. Эти ПДЗ вычислены как компромисс между основанными на коэффициентах биологической вариации пределами погрешностей и фактическими характеристиками точности, достигнутыми большей частью клинико-диагностических лабораторий страны по данным системы внешней оценки качества.
Таблица 12
Оперативные пределы допускаемых значений
| Вид исследования | | |
|||
| В 10 | CV 10 | B 20 | CV 20 | B 1 |
|
| Общий гемоглобин в крови | ± 5 | 4 | ± 4 | 4 | ± 9 |
| Эритроциты в крови | ± 7 | 4 | ± 6 | 4 | ± 11 |
В таблице 13 представлены ПДЗ, рассчитанные на основе имеющихся в литературе данных о биологической вариации. Их можно рассматривать как желательные нормативы.
Таблица 13
Оперативные пределы допускаемых значений, рассчитанные на основе данных о биологической вариации
| Вид исследования | Оперативные пределы допускаемых значений |
||||
| для установочной серии внутрилабораторного контроля качества, коэффициент вариации, % | для результата единичного измерения, относительное смещение, % |
||||
| В 10 | CV 10 | B 20 | CV 20 | B 1 |
|
| Эритроциты, подсчет в крови | ± 2,7 | 2,2 | ± 2,4 | 2,0 | ± 4,9 |
| Эритроциты, средний объем клетки | ± 1,6 | 0,9 | ± 1,5 | 0,8 | ± 2,5 |
| Гемоглобин, концентрация в крови | ± 2,7 | 1,9 | ± 2,4 | 1,8 | ± 4,5 |
| Гемоглобин, средняя концентрация в эритроците (МСНС) | ± 1,3 | 1,2 | ± 1,2 | 1,1 | ± 2,5 |
| Гемоглобин, среднее содержание в одном эритроците (МСН) | ± 1,9 | 1,1 | ± 1,7 | 1,0 | ± 2,9 |
| Гематокрит | ± 2,6 | 1,9 | ± 2,4 | 1,8 | ± 4,5 |
| Лейкоциты, подсчет в крови | ± 9,0 | 7,5 | ± 8,0 | 6,9 | ± 16,3 |
| Лимфоциты, подсчет в крови | ± 10,6 | 7,1 | ± 9,7 | 6,5 | ± 17,6 |
| Моноциты, подсчет в крови | ± 18,7 | 12,2 | ± 17,1 | 11,2 | ± 30,7 |
| Нейтрофилы, подсчет в крови | ± 14,1 | 11,0 | ± 12,7 | 10,1 | ± 24,9 |
| Тромбоциты, подсчет в крови | ± 8,7 | 6,2 | ± 7,9 | 5,7 | ± 14,8 |
| Тромбоциты, средний объем | ± 3,6 | 2,9 | ± 3,2 | 2,7 | ± 6,5 |
| Ретикулоциты, подсчет в крови | ± 11,2 | 7,5 | ± 10,2 | 6,9 | ± 18,5 |
Содержание гемоглобина, скорость оседания эритроцитов (СОЭ) число эритроцитов и лейкоцитов в 1 мкл крови, лейкоцитарная формула (процентное содержание различных групп лейкоцитов), а также цветной показатель (коэффициент, свидетельствующий о степени насыщения гемоглобином эритроцитов) составляют данные общего клинического анализа крови.
Кровь для анализа берется в утренние часы (необязательно до завтрака), в поликлинических же условиях кровь следует брать после 10- 15-минутного отдыха.
Для исследования кровь берут из безымянного пальца левой руки после тщательной обработки его спиртом. Прокол делают на боковой поверхности мякотной части первого фаланга стерильной иглой-скарификатором, причем плоскость иглы следует располагать перпендикулярно рисунку кожи пальца - в этом случае ранка зияет и кровь выделяется длительно.
Определение концентрации гемоглобина
Среди методов определения гемоглобина наиболее широкое распространение получили методы, основанные на колориметрии, т. е. определении интенсивности окраски.
Наиболее простым из них является определение гемоглобина при помощи визуальной колориметрии в гемометре Сали, который представляет собой деревянный штатив с центральной градуированной пробиркой, по бокам которой расположены запаянные стеклянные трубочки с цветным стандартом (солянокислый гематин в глицерине).
В центральную пробирку предварительно наливают 0,1% раствор соляной кислоты до метки, соответствующей 2 или 3 г%, затем осторожно вносят (точно!) 0,02 мл крови, взятой из пальца специальной пипеткой, приложенной к гемометру. Поверхностным слоем кислоты промывают пипетку и, перемешав стеклянной палочкой кровь и кислоту, оставляют на 5 мин для образования солянокислого гематина. Затем добавляя дистиллированную воду и постоянно перемешивая палочкой, добиваются полного совпадения цвета жидкости в центральной пробирке со стандартами. Концентрация гемоглобина соответствует отметке уровня раствора по нижнему мениску. Концентрацию гемоглобина можно выражать или в г% гемоглобина или в условных единицах. 16,67 г гемоглобина принято за 100 единиц.
Концентрация гемоглобина в крови у женщин бывает от 11,7 до 15,8 г°/о или от 117 до 158 г/л,-у мужчин - от 13,3 до 18 г% или от 133 до 180 г/л.
Взятие крови для подсчета форменных элементов
Для подсчета форменных элементов кровь разводят в смесителях (меланжерах) или пробирках, что последнее время получило более широкое применение.
Для подсчета эритроцитов кровь разводят в 200 раз 3% раствором хлорида натрия; если для взятия крови мы пользуемся пипеткой от гемометра, объем которой 0,02 мл, то мы должны брать 4 мл раствора хлорида натрия.
Для подсчета лейкоцитов кровь разводят в 20 раз, следовательно берут 0,02 мл крови и 0,38 мл 3% подкрашенного раствора метиленовой синькой уксусной кислоты, которая необходима, чтобы вызвать разрушение эритроцитов.
Взятие крови должно производиться с большой точностью, так как при таких небольших объемах попадание пузырька воздуха или остатка крови на внешней стороне пипетки ведет к увеличению ошибки определения.
Перед заполнением камеры необходимо протереть в камере шлифованное стекло так, чтобы появились радужные кольца.
Перед заполнением камеры разведенную кровь тщательно перемешивают, так как клетки оседают на стенки пробирки или ампулы смесителя, после этого каплю крови вносят под притертое шлифованное стекло камеры и оставляют на 1 мин в покое для оседания клеток.
Подсчет форменных элементов производят при малом увеличении микроскопа (объектив 8Х, окуляр 15Х или 10Х) в затемненном поле зрения.
Эритроциты считают в 5 больших квадратах (16x5 = 80 малых квадратов), расположенных в разных участках камеры, можно брать квадраты, расположенные по диагонали.
Счету подлежат эритроциты, лежащие внутри квадрата, и те, которые находятся на верхней и левой его сторонах; эритроциты, лежащие на нижней и правой сторонах, не считают, так как они относятся уже к другим квадратам.
Подсчитав число эритроцитов (А) в 5 больших квадратах, находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном малом квадрате A/80, т. е. в 1/4000 мкл. Поэтому, чтобы найти число эритроцитов в 1 мкл, мы должны умножить полученное от деления число на 4000 и на 200 (разведение) .
Таким образом, мы получаем следующую формулу:
X=A*4000*200/80,
где X - число эритроцитов в 1 мкл, а А - число эритроцитов в 5 больших квадратах.
Если мы считали эритроциты в 5 больших квадратах и разводили кровь в 200 раз, то общий множитель для числа А будет 10 000.
Нормальное содержание эритроцитов в крови женщин 4-5*10 6 , мужчин - 4,5-5,5*10 6 .
Лейкоциты считают в 100 больших квадратах, не разделенных на малые, что соответствует 1600 малым. Таким образом, число лейкоцитов, найденное в 100 квадратах, делят на 1600, умножают на 4000 и на 20 (разведение). В данном случае для получения результата достаточно число сосчитанных лейкоцитов умножить на 50. Нормальное содержание лейкоцитов в крови 5*10 3 - 8*10 3 в 1 мкл.
Цветовой показатель крови.
Цветовым показателем крови называют число, которое показывает, каково в среднем насыщение гемоглобином отдельного эритроцита данной крови по сравнению с насыщением отдельного эритроцита нормальной крови.
За нормальное содержание гемоглобина принимают 100 единиц, а нормальное количество эритроцитов равно 5 000 000.
Величина цветового показателя здоровых людей колеблется от 0,9 до 1,1.
Изучение мазка периферической крови. В мазках крови изучают морфологию эритроцитов и считают лейкоцитарную формулу, т. е. процентное соотношение между различными видами лейкоцитов.
Для того чтобы исследование было успешным, приготовление, фиксация и окраска мазков крови должны проводиться с большой тщательностью.
Для приготовления мазка поверхностью чистого, обезжиренного стекла на расстоянии 0,5 см от края предметного стекла прикасаются к капле крови у места прокола на пальце, а затем шлифованное покровное стекло помещают под углом 45° к предметному и подводят первое к капле крови так, чтобы она растекалась по заднему краю покровного стекла и легким движением, без резкого нажима делают мазок. Мазок должен кончаться на предметном стекле «метелочкой». Мазок высушивают на воздухе, при высыхании хороший, тонкий мазок имеет желтую окраску.
Простым, остро отточенным карандашом по середине мазка надписывают фамилию больного и дату исследования, после этого мазки фиксируют в метиловом спирте не менее 5 мин и красят по методу Романовского-Гимзы.
Краска состоит из смеси кислого (эозина) и основного (Азур II) красителей. Такой метод окраски дает возможность дифференцировать клетки. Первым этапом работы с мазком является оценка морфологии эритроцитов. Для этого выбирают тонкое место, где клетки лежат отдельно, а не в виде монетных столбиков. Нормальные эритроциты - безъядерные, окрашенные в розовый цвет клетки, округлые, приблизительно одинакового диаметра - 7,5 мкм, эритроциты имеют форму двояковогнутого диска, поэтому в мазке имеют просветление в центре и более интенсивно окрашенную периферию.
{module директ4}
Приготовление толстой капли
Для исследования крови на плазмодии малярии делают толстую каплю. Кровь берут обычным способом из мякоти пальца. К капле крови, выступившей из места укола, прикасаются поверхностью предметного стекла. Нанесенные отдельно 2-3 капли размазывают углом другого стекла. Сухой мазок заливают (без фиксирования) краской Романовского на 30-40 мин, потом окрашенную каплю осторожно ополаскивают водой и просушивают препарат в вертикальном положении.
Примерные данные анализа
Повышенное количество эритроцитов и гемоглобина в крови может быть при заболевании красных элементов крови - эритремии, тогда число эритроцитов достигает до 9-106 и больше.
Увеличенное содержание эритроцитов в крови может возникнуть вторично, т. е. тогда, когда нет заболевания красного листка кроветворения, а количество эритроцитов повышается в результате болезни других органов и систем (при декомпенсированном диффузном пневмосклерозе, эмфиземе легких, некоторых видах врожденных пороков сердца, склерозе сосудов системы легочной артерии, пороках правого сердца, недостаточности кровообращения III степени и др.). Этот симптом называется эритроцитозом.
Морфологически измененные эритроциты появляются при гиперхромной (мегалобластической) анемии. При этом в крови находят крупные эритроциты с большим содержанием гемоглобина (макроциты), эмбриональные эритроциты (мегалобласты), которые обычно в периферической крови не встречаются. Морфология эритроцитов изменяется также и при гипохромной анемии: появляются малые эритроциты (микроциты), измененные по своей форме (пойкилоциты) и эритроциты с малым содержанием гемоглобина (гипохромные эритроциты).
Подсчет лейкоцитарной формулы
При подсчете лейкоцитарной формулы необходимо определение структурных особенностей цитоплазмы и ядер клеток. Принадлежность клетки к той или иной группе определяется на основании совокупности всех признаков цитоплазмы и ядра.
При подсчете формулы надо придерживаться одного и того же способа передвижения стекла под микроскопом. Чаще всего применяется способ микроскопирования в 4 местах мазка. Известно, что лейкоциты распределяются в мазке неравномерно: лимфоцитов по краям меньше, чем в середине, а моноцитов в конце мазка больше, чем в начале. Поэтому при подсчете лейкоцитарной формулы лучше всего передвигаться по ломаной линии, просчитывая все встречающиеся клетки.
Подсчет 200 клеток - практический минимум для обычных клинических исследований.
Лейкоциты периферической крови в зависимости от наличия или отсутствия зернистости в цитоплазме делятся на гранулоциты (нейтрофильные, эозинофильные, базофильные) и агранулоциты (моноциты и лимфоциты).
Нейтрофилы
. Размер клеток 10-12 мкм. Цитоплазма клеток бледно-розового цвета с мелкой, обильной, фиолетового цвета зернистостью. В норме в крови встречаются палочкоядерные (2-4%) и сегментоядерные (60-65%) нейтрофилы.
Эозинофилы
. По величине клетки такие же, как нейтрофилы, иногда немного крупнее, цитоплазма заполнена крупными гранулами желтовато-красного цвета, ядро обычно имеет два сегмента одинаковой величины. Эозинофилов в норме 2-4%.
Базофилы
. По размеру это самый маленький гранулоцит. Ядро неправильной, многолопастной формы, занимает почти всю клетку, бледно-розовая цитоплазма содержит крупные темно-фиолетовые гранулы. Гранулы базофилов растворяются в воде, и иногда в результате смывания при окраске препарата на месте гранул остаются не смытые бесцветные ячейки. В норме базофилов 0,1%.
Лимфоциты
. Размер клеток колеблется от 7 до 10 мкм. Ядро компактной структуры, округлое или бобовидное. Цитоплазма клеток нежно-голубая с зоной просветления вокруг ядра (перинуклеарной), иногда в цитоплазме встречаются отдельные азурофильные зерна красно-фиолетового цвета. В периферической крови в норме 20-35% лимфоцитов.
Моноциты. Размер клеток колеблется от 12 до 20 мкм. Ядро чаще подковообразной, иногда неправильной формы. Цитоплазма более обширна чем у лимфоцитов, пепельно-голубого цвета с мелкой, нежной, красноватой зернистостью.
Моноцитов в норме 6-8%.
Повышенное содержание в крови лейкоцитов называется - лейкоцитозом, а пониженное - лейкопенией.
Окраска и подсчет ретикулоцитов
Ретикулоциты представляют собой молодые эритроциты с тонкой синей сетчаткой или зернистостью в цитоплазме. Эти клетки характеризуют активность красного кроветворения.
Для выявления подсчета ретикулоцитов пользуются методом суправитальной (прижизненной) окраски. На предметных стеклах делаются мазки краски бриллианткрезилблау в абсолютном спирте, а затем на покрытом краской стекле делают обычным образом мазок крови и помещают его на 3-5 минут во влажную камеру, после чего сушат и микроскопируют с иммерсионным объективом. В норме на 1000 эритроцитов встречается 8-10 ретикулоцитов, число их принято выражать в процентах (0,8-1%) или в промиллях (8-10%о) по отношению к эритроцитам.
Ретикулоциты - клетки, которые характеризуют повышенную выработку эритроцитов в костном мозге.
Они в большом проценте появляются в периферической крови при гипохромной анемии («злокачественной анемии»), при гемолитической анемии и др. заболеваниях. Пониженное содержание ретикулоцитов и полное их исчезновение в периферической крови наблюдаются при обострении гиперхромной анемии.
Для предупреждения агрегации (склеивания) кровяных пластинок прокол кожи делают через каплю 14% раствора сернокислой магнезии, нанесенной на палец. Кровь смешивают с магнезией и готовят тонкие мазки на предметных стеклах, которые затем фиксируют и окрашивают по Романовскому в течение 2-х часов.
Определяют количество кровяных пластинок на 1000 эритроцитов, а зная число эритроцитов в 1 мкл, подсчитывают число тромбоцитов в 1 мкл крови. В норме тромбоцитов содержится от 250 000 до 400 000.
Повышение содержания в крови тромбоцитов обнаруживается при эритремии, при заболеваниях селезенки, при некоторых формах злокачественных заболеваний (например, поджелудочной железы). Пониженное количество тромбоцитов возникает при анемиях.
Определение СОЭ
Скорость оседания эритроцитов определяется в крови, смешанной в соотношении 4:1с лимоннокислым натрием.
Реакция ставится в аппарате Панченкова. Капилляр Панченкова промывают цитратом натрия, затем набирают цитрат до метки 50, где стоит буква Р (реактив) и выдувают его в видалевскую пробирку. Этим же капилляром берут кровь дважды до метки К (кровь) и смешивают ее с цитратом. Смешанной с цитратом кровью заполняют этот же капилляр до деления 0 и ставят вертикально в штатив на час. Через час отмечают в миллиметрах величину столбика плазмы, образовавшегося над осевшими эритроцитами, что и является мерой скорости оседания эритроцитов.
В норме СОЭ у мужчин равна 10 мм/ч, у женщин-14 мм/ч.
Скорость оседания эритроцитов повышается при воспалительных, острых и хронических заболеваниях, при злокачественных опухолях и других заболеваниях.
Проба на совместимость резус-фактора
В пробирку без цитрата берут 2-3 мл крови реципиента, после свертывания крови сгусток обводят стеклянной палочкой и кровь центрифугируют. Две капли сыворотки из этой пробирки наносят на чашку Петри, добавляют к ней полкапли крови донора, перемешивают и чашку помещают в водяную баню (42-45°). Через 10 мин чашку вынимают и просматривают на свету при легком покачивании. Появление агглютинации укажет на недопустимость переливания данной крови.
Преимущества автоматизированных методов определения лейкоцитарной формулы - скорость и воспроизводимость. Однако, как уже упоминалось, ни один из автоматизированных методов не способен различать нейтрофильные гранулоциты как отдельный тип лейкоцитов. Пока неясно, насколько важен этот недостаток. Автоматизированное определение лейкоцитарной формулы в настоящее время является методом скрининга: при получении совершенно нормальных результатов вряд ли стоит вручную подсчитывать формулу с помощью микроскопа или во всяком случае вряд ли ее стоит повторять. Однако с помощью
автоматизированных методов не удается обнаружить редко встречающиеся нарушения и морфологические варианты. Для выявления таких аномалий необходимо исследовать мазок периферической крови.
МАЗОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
Изучение мазка периферической крови остается важной частью гематологического исследования. Клиницисту следует учесть, что к изучению мазка имеет смысл приступать после получения результатов автоматизированного анализа крови. Время, затрачиваемое на изучение мазка, необходимо для получения дополнительной информации, а не для дублирования данных автоматизированного анализа. В целом автоматизированный анализ крови гораздо эффективнее ручных методов при определении средних величин и обычных количественных характеристик: эритроцитарных индексов, количества клеток, размеров тромбоцитов и процентного соотношения лимфоцитов и гранулоцитов. Однако автоматизированный анализатор в лучшем случае малонадежен, а часто совершенно непригоден для выявления редких аномалий: ядросодержащих клеток эритроидного ряда, незрелых гранулоцитов, фрагментов эритроцитов.
Эритроциты
Обнаружение эритроцитов в виде монетных столбиков может быть первым толчком к выявлению лимфоцитарных или плазмоцитарных нарушений. Фрагменты эритроцитов удаётся обнаружить, если они составляют не менее0,5% всех клеток. Примерно при таком же уровне их содержания отклонения выявляются и на эритроцитарной гистограмме. Таким образом, оба метода дополняют друг друга. Аномалии формы могут указывать на конкретные заболевания, например, серповидные гемоглобинопатии, тогда как «каплевидные» клетки свидетельствуют об инфильтрации костного мозга опухолью или о миелофиброзе. Мишеневидные эритроциты и эритроциты в виде точильного камня являются менее специфическими аномалиями. Наиболее частая морфологическая аномалия описывается как«умеренный анизоцитоз, умеренный пойкилоцитоз». К сожалению, эта аномалия настолько неспецифична, что ее обнаружение бесполезно даже для решения вопроса о наличии гематологического заболевания.
Полихромазию необходимо оценивать количественно, клиницисты должны знать, что различная выраженность полихромазии указывает на различную степень стимуляции костного мозга. Базофильная зернистость является еще одним свидетельством присутствия остаточных количеств РНК; она может встречаться при любой форме стимуляции эритроидного ростка. Следует внимательно искать ядросодержащие эритроциты, поскольку их присутствие указывает на выраженную стимуляцию эритроидного ростка, недостаточность функции селезенки или инфильтрацию костного мозга опухолевыми клетками.
Н. Пулетти
Изготовление мазков крови технически простое и быстрое. Для получения максимальной информации оценку клеток крови необходимо систематизировать.
Подготовка и окраска мазков крови
При заборе материала у идеально спокойного животного со средним диаметром уширения вены кровь должна быстро поступать в пробирку, содержащую антикоагулянт. Чаще всего используется ЭДТА (этилендиаминтетраацетат), потому что этот антикоагулянт позволяет лучше сохранить исследуемые форменные элементы крови. Однако для упреждения разного рода морфологической деградации клеток промежуток времени между взятием свежей и хорошо гомогенизированной крови и изготовлением препарата должен быть максимально коротким (J.W. Harvey, 2001; D. Walker, 2008).
Классическая окраска отличается от быстрой. В последние время такие методы быстрой окраски, как Diff-Quick ® , имеют преимущества, поскольку они устойчивы к вариациям рН растворов и образованию депо окрашивающего вещества. Тем не менее они менее эффективны для выявления полихроматофилов и плохо окрашивают гранулы базофилов и мастоцитов (J.W. Harvey, 2001; D. Walker, 2008). Чтобы получить специфическую визуальную картину ретикулоцитов, необходимо провести окраску с новым метиленовым синим (NBM). В пластиковой пробирке каплю крови перемешивают с двумя каплями NBM. Пробирку оставляют при комнатной температуре на 10 минут. Маленькую каплю после перемешивания помещают на предметное стекло и размазывают так же, как при выполнении мазка крови. Затем предметное стекло быстро высушивают на воздухе и исследуют под микроскопом с большим увеличением (×50–×100).
Систематическое исследование мазков крови
При оценке мазка крови очень важно руководствоваться единой схемой исследования.
Мазок крови, выполненный одним тонким (моноцеллюлярным) слоем с округлостью на конце, утолщается к основанию. Клетки крови оценивают на тонком слое, потому как толстый слой несёт в себе мало информации. При малом увеличении (×10 или ×20) краевую часть мазка, в основном его округлый конец, обычно обследуют на выявление агрегатов тромбоцитов или широких атипичных клеток (лифмобластов или дендритных клеток) (фото 4). Агрегаты тромбоцитов после их активации формируются in vitro. Этот феномен происходит иногда в результате трудного забора крови, что, например, наиболее часто отмечают у кошек (E. Duan Lassen, G. Weiser, 2006; S.L. Stockhman, M.A. Skkott, 2008; D. Walker, 2008).
 |
Фото 4. Микроскопия мазка крови здоровой собаки (× 1000). Сгустки тромбоцитов |
Исследование мазков крови - это довольно распространённый метод, позволяющий быстро диагностировать многие часто встречающиеся нарушения у собак и кошек. Основными условиями эффективного использования этого метода диагностики являются строгое соблюдение техники подготовки мазка и систематическое исследование с соблюдением алгоритма исследования.
Основные положения
После забора материала кровь следует быстро поместить в пробирку с антикоагулянтом для того, чтобы сохранить качество клеток.
Окраска новым голубым метиленовым позволяет идентифицировать ретикулоциты.
Оценку осуществляют на тонком слое мазка крови со считыванием под микроскопом на уровне его косичек.
Под систематическим исследованием мазка крови подразумевается алгоритм APEL.
СВМ № 5/2010
