Гемограмма - проводимый в лаборатории комплексный анализ, целью которого является подсчёт количества форменных элементов крови, показателей гематокрита и концентрации гемоглобина. В качестве материала выступает венозная или капиллярная кровь. Исследование эритроцитов позволяет определить средние показатели объёма клетки, содержания гемоглобина и его концентрации. Обычно врачи оценивают эти параметры относительно общепринятой нормы комплексно, но следует уделить внимание интерпретации каждого из них.

Что представляют собой эритроциты?

Эритроциты - крошечные дисковидные эластичные клетки двояковогнутой формы. Размер и эластичность позволяет им свободно проходить по узким капиллярам, а увеличенная площадь поверхности улучшает газообмен. Их главная функция - транспортировка кислорода к тканям организма и углекислого газа обратно.

В 1 мм 3 крови у мужчин находится примерно 4 500 000 - 5 500 000 эритроцитов, у женщин 4 000 000 - 5 000 000.

Их количество подсчитывают в счётной камере, используя анализаторы клеток крови. Существует так называемое правило трёх: по количеству эритроцитов (RBC в распечатке результатов анализа) можно примерно оценить показатель гематокрита (Ht) и концентрацию гемоглобина (Hb):

RBC · 3 = Hb
Hb · 3 = Ht

Следует помнить, что эта зависимость может быть использована только в тех анализах, где эритроциты здоровы и имеют правильное строение.

Нормальное содержание гемоглобина:

• для мужчин 13,3-18 ‰;
• для женщин 11,7-15,8 ‰.

Основной компонент красных телец крови - гемоглобин. Именно он переносит кислород к миоглобину (вещество-накопитель O 2 в тканях). Его значение можно вычислить по гематокриту, но ценность для диагностики в этом случае ограничена. Показатель применяется для оценки нарушений в работе кроветворной системы. В итогах анализа его обозначают как Hb, измеряют в граммах на литр (то есть в промилле, ‰).

Для полноты картины проводят анализ ретикулоцитов (незрелые эритроциты). У них все ещё нет клеточного ядра, но есть остатки РНК. В таком состоянии «зародыша» они свободно плавают в крови в течение 2 дней, после чего превращаются в зрелые клетки.

Таблица нормальных значений RBC:

Этот параметр напрямую указывает на эритропоэтическую активность кроветворной системы. Как видно из таблицы, у мужчин норма выше, что обусловлено большей мышечной массой. К сожалению, точность подсчёта при использовании микроскопа низка, но этот метод постепенно заменяет автоматический анализ, имеющий существенно более высокую точность.

Следует учесть не только количество эритроцитов к крови, но и другие параметры

Количество гемоглобина в крови (выводится «правилом трёх»), содержание гемоглобина в одной клетке (MCH) и её средний объём (MCV).

• МСН характеризует содержание гемоглобина в каждом отдельном эритроците. Этот параметр легко вычислить, используя показатель гемоглобина и количество эритроцитов. Современные гематологические анализаторы умеют определять этот показатель автоматически. МСН соотносится со значениями MCV (среднего объема эритроцитов) и MCHC (средней концентрации гемоглобина в эритроците). MCH относительно редко используется для характеристики типа анемии;
• MCV – средний объём клетки. Именно MCV главным образом используется для характеристики типа анемии. Новые гематологические анализаторы измеряют объём единичного эритроцита. Значение MCV - среднее значение объёма измеренных клеток. Эритроциты в норме имеют размер 80–100 фл (кубический микрометр или фемтолитр) и называются нормоцитами, ниже 80 фл – микроцитами, а выше 100 фл – макроцитами. MCV можно вычислить по количеству клеток и по показателю гематокрита.

MCV=(Ht(%)·10)/(RBC(10^ 12 /л))

Какое диагностическое значение имеет анализ эритроцитов?

Данные этих исследований используют главным образом для диагностики анемий, степени их выраженности и типа. Но они ценны и помимо этого: изменение любого из описанных выше параметров может быть последствием обширного круга болезней.

Повышенное количество эритроцитов имеет под собой 2 основных группы причин: пониженное содержание кислорода в крови и повышенным образованием эритропоэтина. Первое характерно для горных народов (для них это и есть норма), обладателей эмфиземы лёгких и пороков сердца разного происхождения. Второе для онкологических больных и людей, применявших для лечения кортикостероиды.

Высокие показатели могут явно свидетельствовать об образованиях в печени или почках, ведь эти органы выполняют работу по «утилизации» старых клеток. У мужчин — спортсменов норма может вырасти при использовании анаболических стероидов, так как их мышцы требуют больше кислорода и кровь старается доставить им его.

Понижение же является следствием анемий, гипергидратации, острой кровопотери.
Анализ среднего содержания гемоглобина в эритроците даёт информацию о характере анемии: повышается при гиперхромных и мегалобластных разновидностях болезни, а так же сопровождающих цирроз печени. Понижение наблюдается при гипохромной анемии.

Анемии описываются как снижение общего гемоглобина. Такие состояния наблюдаются если с пищей поступает недостаточно железа или повышена потребность в нём (беременность у женщин, активный рост у детей и подростков). При их диагностике всегда следует учитывать, что норма у мужчин и женщин различна, изменение показателя с возрастом. Для диагностики анемии требуется провести дополнительный биохимический и гематологический анализ.

Эритроциты умирают при повреждении их оболочки, что наблюдается при отравлении ядами, солями тяжёлых металлов. Механические повреждения они получают, если человек имеет искусственный сердечный клапан.

Норма эритроцитов в крови у беременных женщин может снижаться. Это обусловлено дефицитом железа и сильной задержкой воды, наблюдаемыми у подавляющего большинства женщин.

Для подсчёта форменных элементов взятую из пальца кровь разбавляют в специальных смесителях, чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчёта. Разбавленной кровью заполняют специальную счётную камеру и подсчитывают под микроскопом число форменных элементов. Зная объём камеры и разбавление крови, вычисляют число кровяных телец в 1 мкл цельной крови.

Для подсчёта форменных элементов используют счётную камеру Горяева. Она представляет собой толстое предметное стекло, в средней части которого находятся четыре желобка с тремя узкими площадками между ними. Средняя площадка ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны от этого желобка расположены сетки, нанесённые на стекло. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, 25 из них дополнительно расчерчены на 16 маленьких. Единицей отсчёта является маленький квадрат. Его сторона равна 1/20 мм, площадь - 1/20 х 1/20 = 1/400 мм 2 . Объём разведённой крови, помещающийся над маленьким квадратом, равен 1/400 мм 2 х 1/10 мм =1/4000 мм 3 . Перед работой необходимо рассмотреть под микроскопом сетку.

Для разбавления крови используют меланжеры или смесители. Смеситель представляет собой капилляр с расширением в средней части. В расширенном участке находится стеклянная бусинка для перемешивания разведённой крови. На капиллярах нанесена градуировка - метки 0,5 и 1,0. Третья метка находится в смесителе: для подсчёта эритроцитов - 101, лейкоцитов - 11. Для забора крови на меланжер надевают резиновую грушу, сдавливанием и расправлением которой достигается насасывание в него и крови и разбавляющих растворов. Для подсчёта эритроцитов в меланжер набирают кровь до метки 0,5 и раствор до метки 101, при этом кровь разбавляется в 200 раз. В меланжер для подсчёта лейкоцитов набирают кровь до метки 1, а раствор - до 11, при этом кровь разбавляется в 10 раз.

При подсчёте эритроцитов в качестве разбавляющего раствора применяют 3% раствор NaCl. Эритроциты в нём сморщиваются и становятся заметнее. При подсчёте лейкоцитов кровь разбавляют 5% раствором уксусной кислоты. В этих условиях эритроциты разрушаются и в поле зрения остаются только лейкоциты (точнее, их ядра). Уксусную кислоту подкрашивают метиленовым синим, при этом ядра лейкоцитов становятся видны отчетливее.

В норме в 1 мкл крови человека содержится в среднем 4,5 - 5 млн эритроцитов (или 4,5 - 5 в 1л).

Камеру помещают под микроскоп и рассматривают сетку вначале при малом, а затем при большом увеличении.

Накрывают камеру покровным стеклом, притирая его края к стеклу камеры до появления радужных колец. Оставив камеру под микроскопом, прокалывают палец.

Первую выступившую каплю крови из пальца стирают ватным тампоном. Во вторую каплю погружают кончик смесителя для эритроцитов, держат его вертикально и набирают кровь до отметки 0,5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Обтирают конец капилляра фильтрованной бумагой и быстро, пока кровь не свернулась, переносят его в чашку с раствором NaCI, продолжая держать смеситель вертикально. Набирают раствор до метки 101 (т.е. разводят кровь в 200 раз), после чего смеситель переводят в горизонтальное положение и кладут на стол.

Для подсчёта эритроцитов берут заполненный смеситель, зажимая нижний конец пальцем, снимают резиновую грушу и, зажав оба конца смесителя третьим и первым пальцами, в течение 1 мин перемешивают кровь. Выпускают из смесителя на вату три капли, а четвертую наносят на среднюю площадку камеры у края покровного стекла. Капиллярными силами капля сама втягивается в покровное стекло и заполняет камеру. Излишек раствора крови стекает в желобок. Если на сетку попал воздух или на боковых площадках оказался излишек раствора, камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова. Заполненную камеру ставят под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчёту. Считать эритроциты лучше при малом увеличении (объективе х 8), но использовать при этом окуляр х 15.

Для того чтобы получить наиболее точные данные, необходимо подсчитать число эритроцитов в пяти больших квадратах, расположенных в различных местах сетки, например, по диагонали. Подсчёт ведут в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего). Во избежание двукратного подсчёта клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, применяют следующее правило «К данному квадрату относятся эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границах; эритроциты, лежащие на правой и нижней границах, к данному квадрату не относятся».

Подсчитав, таким образом, сумму эритроцитов в пяти больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадрате. Зная, что объём пространства камеры над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм 3 , умножают найденное число на 4000. Получают число эритроцитов в 1 мм 3 разведённой крови. Умножив на величину разведения (200), получают количество эритроцитов в 1 мм 3 цельной крови.

Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

Х = (Э ·4000 · 200) /80, где

Х - искомое число эритроцитов в 1 мм 3 (мкл) цельной крови, Э - сумма эритроцитов в 80 маленьких квадратах.

В итоге полученное число эритроцитов записывают в пересчёте на 1 л крови, т. е. число миллионов эритроцитов, найденных в 1 мм 3 (мкл) умножают на 10 12 .

У человека и многих млекопитающих животных красные кровяные клетки, или эритроциты, представляют собой безъядерные клетки двояковогнутой формы (цвет. табл. II). Они эластичны, что помогает им проходить по узким капиллярам. Диаметр эритроцита человека 7-8 мкм, а толщина - 2-2,5 мкм. Отсутствие ядра и форма двояковогнутой линзы (поверхность двояковогнутой линзы в 1,6 раза больше поверхности шара) увеличивают поверхность эритроцитов, а также обеспечивают быструю и равномерную диффузию кислорода внутрь эритроцита.

Общая поверхность всех эритроцитов человека более 3000 м 2 , что в 1500 раз превышает поверхность его тела.

Общее количество эритроцитов, находящихся в крови человека, огромно. Оно примерно в 10 000 раз больше населения нашей планеты. Если выстроить все эритроциты человека в один ряд, то получилась бы цепочка длиной около 180 000 км; если же положить эритроциты один на другой, то образовалась бы колонна высотой, превосходящей длину экватора земного шара (50 000- 60 000 км).

В 1 мм 3 крови содержится от 4 000 000 до 5 000 000 эритроцитов (у женщин 4 000 000-4 500 000, у мужчин 4 500 000 - 5 000 000).

Количество эритроцитов не строго постоянно. Оно может значительно увеличиваться при недостатке кислорода на больших высотах, при мышечной работе. У людей, живущих в высокогорных районах, эритроцитов примерно на 30% больше, чем у жителей морского побережья. Не случайно, в первые дни пребывания в горной местности человек испытывает слабость, головокружение, снижается его работоспособность. Эти явления связаны с недостаточным поступлением в организм кислорода в условиях разреженного воздуха. Однако через некоторое время состояние человека значительно улучшается, так как в организме увеличивается количество эритроцитов, а следовательно, улучшается обеспечение его кислородом. При переезде из низменных районов в высокогорные количество эритроцитов в крови увеличивается. Когда же потребность в кислороде уменьшается, количество эритроцитов в крови снижается.

Подсчет эритроцитов

Подсчет эритроцитов производится при помощи специальных счетных камер.

Для подсчета форменных элементов взятую из пальца кровь разбавляют в специальных смесителях, чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для счета. Для разбавления крови при подсчете эритроцитов применяют гипертонический (3-про-центный) раствор NaCl, в котором эритроциты сморщиваются.

Смеситель (меланжер) состоит из градуированной капиллярной трубочки с яйцевидным расширением (ампулой). В ампулу помещена стеклянная бусинка для лучшего размешивания крови (рис. 5). Имеются смесители для подсчета красных и белых кровяных телец. В смесителях для эритроцитов бусинка внутри ампулы окрашена в красный цвет, а для лейкоцитов - в белый. На капилляре смесителей имеются метки 0,5 и 1,0; они обозначают половину или целый объем капилляра. Выше яйцевидного расширения метка 101 в смесителе для эритроцитов означает, что полость расширения (ампулы) имеет объем в 100 раз больший, чем объем полости капилляра. На смесителе для лейкоцитов имеется метка И, свидетельствующая о том, что полость ампулы в 10 раз больше полного объема капилляра. Когда в смеситель для эритроцитов набирают кровь до метки 1,0, а затем разбавляют ее 3-процентным раствором NaCl, доводя общий объем до метки 101, кровь будет разведена в 100 раз. При разведении в 200 раз следует набрать кровь в капилляр смесителя до метки 0,5 и добавить разбавляющей жидкости до метки 101.

Перед употреблением смеситель должен быть тщательно вымыт, высушен продуванием воздуха с помощью водоструйного насоса или резиновой груши. Достаточно ли просушен смеситель, определяют по передвижению бусинки в ампуле: прилипание бусинки к стенкам свидетельствует о наличии влаги.

Счетная камера представляет собой толстое предметное стекло, на верхней поверхности которого имеются три поперечные площадки, разделенные между собой углублениями (рис. 6). Средняя площадка ниже крайних на 0,1 мм, и при наложении на боковые площадки покровного стекла над сеткой средней площадки образуется камера глубиной 0,1 мм. Камера Горяева имеет на средней площадке поперечный желобок. По обе стороны от этого желобка находится квадратная сетка, нарезанная специальной делительной машиной. Сетка может иметь разный рисунок в зависимости от конструкции камеры. В сетке камеры Горяева имеется 225 больших квадратов, 25 из которых разделены на 16 маленьких квадратиков каждый. Размеры маленьких квадратиков в камере любой конструкции одинаковы. Сторона малого квадрата равна 1⁄20 мм, следовательно, его площадь 1⁄20 × 1⁄20 = 1⁄400 (мм 2). Если учесть, что высота камеры (расстояние от поверхности средней площадки до покровного стекла) равна 1⁄10 мм, то объем крови над малым квадратом равен: 1⁄400×1⁄10 = 1⁄4000 (мм 3).

Опыт 6

Налейте в чашечку раствор для разбавления крови (3-процентный раствор NaCl). Проколите иглой кожу пальца, первую выступившую из пальца каплю крови сотрите ватным тампоном и, когда на пальце появится капля крови достаточной величины, погрузите в нее кончик смесителя. Наконечник смесителя (4 на рис. 5) возьмите в рот и насосите кровь до метки 0,5, Надо следить, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Для этого кончик капилляра должен быть погружен в каплю крови до конца насасывания. Нельзя прижимать смеситель к пальцу, чтобы не закупорить отверстие смесителя. Нужно стараться, чтобы кровь не поднималась выше указанной метки на смесителе, но если это случилось, то можно осторожно опустить кончик капилляра на вату или фильтровальную бумагу, и уровень крови опустится. Разумеется, ошибка при подсчете увеличится. Затем быстро погрузите кончик капилляра в разбавляющую жидкость (3-процентный раствор NaCl). He выпуская кровь из смесителя, насосите в него ртом разбавляющий раствор до метки 101. Кровь теперь будет разведена в 200 раз. Закончив набор жидкости, переведите смеситель в горизонтальное положение, снимите резиновую трубку, закройте капилляр с обоих концов большим и указательным пальцами и тщательно перемешайте жидкости в расширении смесителя. Теперь смеситель в горизонтальном положении опустите на стол.

Плотно притрите покровное стекло к крайним площадкам счетной камеры так, чтобы при опрокидывании камеры стекло не падало. Из смесителя выпустите 2-3 капли жидкости на вату или фильтровальную бумагу, а следующую каплю с кончика капилляра выпустите под покровное стекло в счетную камеру. Смесь жидкостей в силу капиллярности должна ее равномерно заполнить, а положение покровного стекла не должно измениться. Если стекло "всплывает", то камеру тщательно протрите и процедуру заполнения повторите. Заполненную камеру поместите под микроскоп.

При малом увеличении подсчитайте число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках, что соответствует 5 большим часто разграфленным квадратам. 5 больших квадратов выбирайте по диагонали через всю счетную камеру. Это делается для того, чтобы уменьшить ошибку, связанную с неравномерностью заполнения камеры.

Чтобы облегчить подсчет эритроцитов, на листе бумаги нарисуйте 5 больших квадратов, каждый из них разделите на 16 маленьких квадратиков. Подсчитав под микроскопом число эритроцитов в каждом маленьком квадратике, впишите эту величину в квадратики на бумаге.

Для того чтобы не ошибиться в подсчете и дважды не подсчитать эритроциты, лежащие на границах между малыми квадратиками, пользуйтесь таким правилом: относящимися к данному квадрату считаются эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе квадрата, не считаются.

Исходным для дальнейших расчетов принимают объем жидкости над одним малым квадратиком. Поскольку он равен 1⁄4000 мм 3 , то количество эритроцитов в 1 мм 3 крови можно подсчитать, умножив среднее количество эритроцитов в малом квадратике на 4000 и на величину разведения крови.

где Э - число эритроцитов в 1 мм 3 крови;

n - число эритроцитов, подсчитанное в 80 малых квадратиках;

200 - разведение крови.

Закончив подсчет эритроцитов, вымойте счетную камеру и вытрите ее насухо чистой марлей.

Значение эритроцитов в поддержании постоянства внутренней среды

Основная функция эритроцитов заключается в переносе кислорода от легких ко всем клеткам тела. Находящийся в эритроцитах гемоглобин легко соединяется с кислородом и легко отдает его в определенных условиях.

Велика роль эритроцитов и в удалении углекислого газа из тканей. При участии эритроцитов углекислый газ, образующийся в процессе жизнедеятельности клеток, превращается в углекислые соли, которые постоянно циркулируют в крови. В капиллярах легких эти соли, опять же при обязательном участии эритроцитов, распадаются с образованием углекислого газа и воды. Углекислый газ и часть воды тут же удаляются из организма через дыхательные пути.

Эритроциты поддерживают относительное постоянство газового состава крови. При нарушении их функции во внутренней среде организма резко повышается содержание углекислого газа и развивается кислородная недостаточность, что губительно сказывается на деятельности всего организма.

Гемоглобин

В составе эритроцитов содержится белковое вещество гемоглобин, придающее крови красный цвет. Гемоглобин состоит из белковой части - глобина - и небелкового вещества - гема, содержащего двухвалентное железо. В капиллярах легких гемоглобин соединяется с кислородом, образуя оксигемоглобин .

В капиллярах тканей оксигемоглобин легко распадается с освобождением кислорода и гемоглобина. Этому способствует высокое содержание в тканях углекислого газа.

Оксигемоглобин имеет ярко-красный цвет, а гемоглобин - темно-красный. Этим объясняется различие в окраске венозной и артериальной крови.

Оксигемоглобин обладает свойствами слабой кислоты, что имеет важное значение в поддержании постоянства реакции крови (рН).

Гемоглобин способен образовывать соединение и с углекислым газом. Этот процесс происходит в капиллярах тканей. В капиллярах легких, где содержание углекислого газа значительно меньше, чем в капиллярах тканей, соединение гемоглобина с углекислым газом распадается. Таким образом, гемоглобин переносит не только кислород от легких к тканям. Он участвует и в переносе углекислого газа.

Наиболее прочно гемоглобин соединяется с угарным газом (СО). При содержании в воздухе 0,1% угарного газа больше половины гемоглобина крови связывается с окисью углерода, в связи с чем клетки и ткани не обеспечиваются необходимым количеством кислорода. В результате кислородного голодания появляются мышечная слабость, судороги, происходит потеря сознания и может наступить смерть.

Первая помощь при отравлении угарным газом - обеспечить приток чистого воздуха, напоить пострадавшего крепким чаем, а дальше необходимо медицинское вмешательство.

В 100 мл крови человека содержится в среднем около 16 г гемоглобина.

Определение количества гемоглобина производится колориметрическим способом, основанным на следующем принципе: если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет одинакова, а количества веществ будут соотноситься как их объемы. Зная количество вещества в стандартном растворе, можно вычислить его содержание в исследуемом растворе. Прибор для определения количества гемоглобина в крови называют гемометром.

Гемометр (рис. 7) представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из стекла молочного цвета. В штатив вставлены три пробирки одинакового диаметра. Две крайние пробирки сверху запаяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина (соединение гемоглобина с соляной кислотой). Средняя пробирка градуирована и открыта сверху. Она предназначена для исследуемой крови. К прибору приложены пипетка на 20 мм 3 и тонкая стеклянная палочка. Раствор, взятый для стандарта, содержит в 100 мл 16,7 г гемоглобина. Такое содержание гемоглобина считается высшим пределом нормы и принимается за 100%. Для проведения исследования гемоглобин испытуемой крови нужно перевести в солянокислый гематин. Это вещество коричневого цвета, а стандартный раствор его имеет окраску крепкого чая.

Опыт 7

В среднюю пробирку гемометра налейте 0,1-нормального раствора соляной кислоты до метки 10. В специальную пипетку, прилагаемую к гемометру, наберите 20 мм 3 крови; обтерев кончик пипетки ваткой (уровень крови в ней при этом не должен меняться), осторожно выдуйте кровь на дно пробирки с соляной кислотой. Не вынимая из пробирки пипетку, несколько раз сполосните ее соляной кислотой. Наконец, прикоснитесь пипеткой к стенке пробирки и тщательно выдуйте ее содержимое. Раствор оставьте на 5-10 мин, перемешивая его стеклянной палочкой. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин.

Затем в среднюю пробирку по каплям приливайте пипеткой дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет одинаковым с цветом стандарта (добавляя воду, раствор перемешивайте палочкой). Особенно осторожно добавляйте последние капли.

Цифра, стоящая на уровне поверхности раствора в средней пробирке, покажет содержание гемоглобина в исследуемой крови в процентах по отношению к норме, условно принятой за 100 %.

Реакция оседания эритроцитов (РОЭ)

Если кровь предохранить от свертывания и оставить на несколько часов в капиллярных трубочках, то эритроциты, находящиеся в крови, в силу тяжести начинают оседать. Они оседают с определенной скоростью. У женщин нормальная скорость оседания эритроцитов 7-12 мм в 1ч, а у мужчин - 3- 9 мм в 1 ч.

Определение скорости оседания эритроцитов имеет важное диагностическое значение в медицине. При туберкулезе, различных воспалительных процессах в организме скорость оседания эритроцитов повышается.

Реакцию оседания эритроцитов (РОЭ) определяют с помощью прибора Панченкова (рис. 8).

Прибор представляет собой штатив, в котором укреплены в вертикальном положении капиллярные трубочки. На капиллярах нанесены деления в миллиметрах. Кроме того, на каждом капилляре имеются еще три метки: метка К (кровь), метка Р (реактив) и метка О, которая стоит на одном уровне с меткой К.

Эритроциты - красные кровяные тельца. Имеют форму двояковогнутого диска.

Функции эритроцитов:

1. Дыхательная - транспорт кислорода и участие в транспорте углекислого газа.

2. Адсорбция и транспорт питательных веществ.

3. Адсорбция и транспорт токсинов.

4. Регуляция ионного состава плазмы крови.

5. Формирует реологические характеристики крови/вязкость и т.д./

Количество эритроцитов: у мужчин 4,5-5,0 млн. в 1 мм3, 4,5-5,0*1012/л; у женщин 4,0-4,5 млн. в 1 мм3,4,0-4,5*1012/л.

Эритроцитоз - увеличение содержания эритроцитов. Эритропения – снижение содержания эритроцитов, это состояние может еще обозначатся термином "анемия". Возможны истинные и ложные изменения количества эритроцитов. Истинные - изменения во всем организме. Ложные - изменения за счет изменения объема плазмы крови.

Размеры эритроцитов: 6-8 микрон - нормоцит; менее 6 микрон - микроцит; 8-10 микрон - макроцит; более 10 микрон - мегалоцит.

Для подсчета эритроцитов наберите кровь в соответствующий смеситель до метки 0.5. после этого наберите в смеситель 3% раствор хлористого натрия до метки 101. Концы заполненного меланжера зажмите 3 и 1 пальцами и встряхните его в течении 1 минуты. Затем выдуйте на ватный тампон 2-3 капли, а 4 нанесите на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла.

Подсчет эритроцитов производят в 5 больших квадратах, разделяемых на 16 маленьких. Подсчитайте все эритроциты внутри квадрата и на верхней и левой его сторонах. На основании произведенного подсчета вычислите количество эритроцитов в 1 мм 2 крови по формуле:

Х- количество эритроцитов;

а-количество эритроцитов, подсчитанные в 5 больших квадратах;

200-степень разведения крови.

126.Гемоглобин. Основные функции эритроцитов обусловлены наличием в их составе особого белка хромопротеида - гемоглобина. Молеку­лярная масса гемоглобина человека равна 68 800. Гемоглобин состоит из белковой (глобин) и железосодержащей (гем) частей. На 1 мо­лекулу глобина приходится 4 молекулы гема.В крови здорового человека содержание гемоглобина составляет 120-165 г/л (120-150 г/л для женщин и 130-160 г/л для мужчин). У беременных содержание гемоглобина может понижаться до 110 г/л, что не является патологией. Основное назначение гемоглобина - транспорт О2 и СО2. Кроме того, гемоглобин обладает буферными свойствами, а также способ­ностью связывать некоторые токсичные вещества. Гемоглобин человека и различных животных имеет разное стро­ение. Это касается белковой части - глобина, так как гем у всех представителей животного мира имеет одну и ту же структуру. Гем состоит из молекулы порфирина, в центре которой расположен ион Fe2+, способный присоединять О2. Структура белковой части гемо­глобина человека неоднородна, благодаря чему белковая часть раз­деляется на ряд фракций. Большая часть гемоглобина взрослого человека (95-98%) состоит из фракции А (от лат. adultus - взрослый); от 2 до 3% всего гемоглобина приходится на фракцию А2; наконец, в эритроцитах взрослого человека находится так на­зываемый фетальный гемоглобин (от лат. fetus - плод), или гемоглобин F, содержание которого в норме подвержено значительным колебаниям, хотя редко превышает 1-2%. Гемоглобины А и А2 обнаруживаются практически во всех эритроцитах, тогда как ге­моглобин F присутствует в них не всегда. Гемоглобин F содержится преимущественно у плода. К моменту рождения ребенка на его долю приходится 70-90%. Гемоглобин F имеет большее сродство к О2, чем гемоглобин А, что позволяет тканям плода не испытывать гипоксии, несмотря на относительно низкое напряжение О2 в его крови. Гемоглобин обладает способностью образовывать соединения с О2, СО2 и СО. Гемоглобин, присоединивший О2, носит наименование оксигемоглобина (ННbО2); гемоглобин, отдавший О2, называется восстановленным, или редуцированным (ННb). В артериальной кро­ви преобладает содержание оксигемоглобина, от чего ее цвет при­обретает алую окраску. В венозной крови до 35% всего гемоглобина приходится на ННb. Кроме того, часть гемоглобина через аминную группу связывается с СО2, образуя карбогемоглобин (ННbСО2), благодаря чему переносится от 10 до 20% всего транспортируемого кровью СО2.

Гемоглобин способен образовывать довольно прочную связь с СО. Это соединение называется карбоксигемоглобином (ННЬСО). Сродство гемоглобина к СО значительно выше, чем к О2, поэтому гемоглобин, присоединивший СО, неспособен связываться с О2. Од­нако при вдыхании чистого О2 резко возрастает скорость распада карбоксигемоглобина, чем пользуются на практике для лечения отравлений СО.

Сильные окислители (ферроцианид, бертолетова соль, пероксид, или перекись, водорода и др.) изменяют заряд от Fe2+ до Fe3+, в результате чего возникает окисленный гемоглобин - прочное сое­динение гемоглобина с О2, носящее наименование метгемоглобина. При этом нарушается транспорт О2, что приводит к тяжелейшим последствиям для человека и даже смерти.

Цветовой показатель

О содержании в эритроцитах гемоглобина судят по так назы­ваемому цветовому показателю,- относительной величине, характе­ризующей насыщение в среднем одного эритроцита гемоглобином. Fi - процентное соотношение гемоглобина и эритроцитов, при этом за 100% (или единиц) гемоглобина условно принимают величину, равную 166,7 г/л, а за 100% эритроцитов - 5*10 /л. Если у человека содержание гемоглобина и эритроцитов равно 100%, то цветовой показатель равен 1. В норме Fi колеблется в пределах 0,75-1,0 и очень редко может достигать 1,1. В этом случае эритроциты называются нормохромными. Если Fi менее 0,7, то такие эритроциты недонасыщены гемоглобином и называются гипохромными. При Fi более 1,1 эритроциты име­нуются гиперхромными. В этом случае» объем эритроцита значительно увеличивается, что позволяет ему содержать большую концентрацию гемоглобина. В результате создается ложное впе­чатление, будто эритроциты перенасыщены гемоглобином. Гипо- и гиперхромия встречаются лишь при анемиях. Определение цве­тового показателя важно для клинической практики, так как позволяет провести дифференциальный диагноз при анемиях раз­личной этиологии.

127.Лейкоциты (белые кровяные тельца) представляют собой образования
различной формы и величины. По строению лейкоциты делятся на две группы: зернистые (гранулоциты) и незернистые (агранулоциты). К гранулоцитам относятся нейтрофилы, эозинофилы и базофилы, к агранулоцитам - лимфоциты и моноциты.
В норме количество лейкоцитов у взрослых людей колеблется от 4,5 до
9 тыс. в 1 мм3, или 4,5-9 10в 9степени/л. Увеличение числа лейкоцитов за пределы
нормы называется лейкоцитозом, уменьшение - лейкопениеи. Физиологические лейкоцитозы. Лейкопении
Различают следующие виды физиологических лейкоцитозов.
Пищевой лейкоцитоз возникает после приема пищи. При этом число
лейкоцитов увеличивается незначительно (в среднем на 1-3 тыс. в I мкл) и редко выходит за границу верхней физиологической нормы. При пищевом лейкоцитозе большое количество лейкоцитов скапливается в подслизистой основе тонкой кишки. Здесь они осуществляют защитную функцию (препятствуют попаданию чужеродных агентов в кровь и лимфу). Пищевой лейкоцитоз носит перераспределительный характер и обеспечивается поступлением лейкоцитов в циркуляцию из депо крови.
Миогенный лейкоцитоз наблюдается после выполнения тяжелой мышечной работы. Число лейкоцитов при этом может возрастать в 3-5 раз.
Огромное количество лейкоцитов при физической нагрузке скапливается в мышцах. Миогенный лейкоцитоз носит как перераспределительный, так
и истинный характер, так как при нем отмечается усиление костномозгового кроветворения.
Эмоциональный лейкоцитоз, как и лейкоиитоз при болевом раздражении,
носит перераспределительный характер и редко достигает высоких цифр. Овуляторныи лейкоцитоз характеризуется незначительным повышением числа лейкоцитов при одновременном снижении количества эозинофилов.
При беременности большое количество лейкоцитов скапливается в подслизистой основе матки. Этот лейкоцитоз в основном носит местный характер. Его физиологический смысл состоит не только в предупреждении попадания инфекции в организм роженицы, но и в стимулировании сократительной функции матки.
Во время родов число лейкоцитов увеличивается за счет повышения количества нейтрофилов. Содержание белых кровяных телец уже в начале
родового акта может достигать более 30 000 в 1 мкл. Послеродовый лейкоцитоз сохраняется на протяжении 3-5 дней и связан с поступлением лейкоцитов из депо крови и костномозгового резерва.
Лейкопении встречаются только при патологических состояниях. Особенно тяжелая лейкопения может наблюдаться при поражении костного мозга - острых лейкозах и лучевой болезни.
Лейкоцитарная формула
В норме и патологии учитывается не только количество леикоцитов, но и их процентное соотношение, получившее наименование леикоцитарнои
формулы, или лейко граммы. В крови здорового человека могут встречаться зрелые и юные лейкоцитов, однако в норме обнаружить их удается лишь у самой многочисленной группы - нейтрофилов. К ним относятся юные и палочкоядерные нейтоойилы. Увеличение количества юных и палочкоядерных неитрофилов свительствует об омоложении крови и носит название сдвига лейкоцитарной формулы влево; снижение количества этих клеток говорит о старени крови и называется сдвигом лейкоцитарной формулы вправо.
Лейкоцитарная формула здорового человека
Нейтрофилы: метамиелоциты 0-1%,палочкоядерные 1-4,сегментоядерные 50-65,
Агранулоциты: базофилы 0-1, эозинофилы 1-4
лимфоциты 25-40
Характеристика отдельных видов лейкоцитов
Нейтрофилы
Нейтрофилы содержат богатейший набор биологически активных субстанций, в том числе способных убивать бактерии, вирусы и раковые клетки. Нейтрофилы подвижны, легко проникают в экстравазальное пространство ткани, высокоактивны. При стимуляции нейтрофилы быстро
реализуют свой цитолитический материал по отношению к вирусинфииированным и опухолевым клеткам и могут запускать у них генетические программы апоптоза.
Нейтрофилы осуществляют цитотоксический эффект (киллинг) в отношении отдельных чужеродных клеток.
Обладая фагоцитарной функцией, нейтрофилы поглощают не только
бактерии, но и продукты повреждения тканей.
Базофилы .
Функция базофилов и тучных клеток обусловлена наличием в них ряда
биологически активных веществ. К ним в первую очередь принадлежит гистамин, расширяющий кровеносные сосуды. В базофилах содержатся противосвертываюш.ие вещества - гепарин, хондроитинсульфаты А и С, дерматансульфат и гепарансульфат.

Методика подсчета в камере

Принцип метода подсчета лейкоцитов аналогичен принципу подсчета эритроцитов, суть его состоит в точном отмеривании крови и разведении ее в определенном объеме жидкости с последующим подсчетом клеточных элемен­тов в счетной камере и пересчете полученного результата на 1 мл крови.

Оборудование и реактивы:

1. Смесители или пробирки для подсчета лейкоцитов.

2. 3 %-ный раствор уксусной кислоты, к которому прибавлено несколько капель метил-виолета или метиленовой синьки.

3. Счетная камера.

4. Микроскоп.

Смеситель для лейкоцитов отличается от смесителя для эритроцитов тем, что имеет более широкий просвет капилляра и меньший по величине резервуар. На смесителе нанесены 3 метки: 0,5, 1,0 и 11. Это позволяет развести кровь в 10 либо в 20 раз (чаще разводят в 20 раз).

Ход исследования. При взятии крови для подсчета лейкоцитов предва­рительно удаляют ватным тампоном остатки крови с кожи и, слегка сдавливая палец, выпускают свежую каплю крови. При работе со смесителями кровь на­бирают до метки 0,5, затем разводят 3 %-ным раствором уксусной кислоты до метки 11. Энергично встряхивают в течение 3 мин, после чего сливают 1-2 ка­пли и заполняют счетную камеру. При работе с пробирками для подсчета лей­коцитов наливают 0,4 мл 3 %-ного раствора уксусной кислоты и в нее выпус­кают 0,02 мл крови, отмеренной пипеткой от гемометра Сали. Тщательно встряхивают пробирки, затем в жидкость опускают пипетку и, набрав содер­жимое, заполняют счетную камеру. Так как лейкоцитов гораздо меньше, чем эритроцитов, то для большей точности подсчет производят в 100 больших (не­разграфленных) квадратах. Обычно в одном большом квадрате находится 1-2 лейкоцита. Число лейкоцитов в 1 мкл крови рассчитывается аналогично расче­ту числа эритроцитов по формуле:

X = (А х 4000 х В)/Б,

где X - количество лейкоцитов в 1 мкл крови; А - количество лейкоцитов, сосчитанных в 1600 малых квадратах; Б - количество сосчитанных малых квадратов (1600); 4000 - величина, умножая на которую мы получаем количе­ство клеток в 1 мкл.

128.Сосудисто – тромбоцитарный гемостаз. Тромбоциты.особенности строения, количество, функции. Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз сводится к образованию тромбоцитарной пробки, или тромбоцитарного тромба. Условно его разделяют на три стадии: 1) временный (первичный) спазм сосудов; 2) образование тромбоцитарной пробки за счет адгезии (прикреп­ления к поврежденной поверхности) и агрегации (склеивания между собой) тромбоцитов; 3) ретракция (сокращение и уплотнение) тром­боцитарной пробки.

Сразу после травмы наблюдается первичный спазм кровеносных сосудов, благодаря чему кровотечение в первые секунды может не возникнуть или носит ограниченный характер. Первичный спазм сосудов обусловлен выбросом в кровь в ответ на болевое раздражение адреналина и норадреналина и длится не более 10-15 с. В даль­нейшем наступает вторичный спазм, обусловленный активацией тромбоцитов и отдачей в кровь сосудосуживающих агентов - серотонина, ТхА2, адреналина и др.

Повреждение сосудов сопровождается немедленной активацией тромбоцитов, что обусловлено появлением высоких концентраций АДФ (из разрушающихся эритроцитов и травмированных сосудов), а также с обнажением субэндотелия, коллагеновых и фибриллярных структур. В результате «раскрываются» вторичные рецепторы и создаются оптимальные условия для адгезии, агрегации и образо­вания тромбоцитарной пробки.

Адгезия обусловлена наличием в плазме и тромбоцитах особого белка - фактора Виллебранда (FW), имеющего три активных цен­тра, два из которых связываются с экспрессированными рецепторами тромбоцитов, а один - с рецепторами субэндотелия и коллагеновых волокон. Таким образом, тромбоцит с помощью FW оказывается «подвешенным» к травмированной поверхности сосуда.

Одновременно с адгезией наступает агрегация тромбоцитов, осу­ществляемая с помощью фибриногена - белка, содержащегося в плазме и тромбоцитах и образующего между ними связующие мо­стики, что и приводит к появлению тромбоцитарной пробки.

Важную роль в адгезии и агрегации играет комплекс белков и полипептидов, получивших наименование «интегрины». Последние служат связующими агентами между отдельными тромбоцитами (при склеивании друг с другом) и структурами поврежденного сосуда. Агрегация тромбоцитов может носить обратимый характер (вслед за агрегацией наступает дезагрегация, т. е. распад агрегатов), что зависит от недостаточной дозы агрегирующего (активирующего) агента.

Из тромбоцитов, подвергшихся адгезии и агрегации, усиленно секретируются гранулы и содержащиеся в них биологически актив­ные соединения - АДФ, адреналин, норадреналин, фактор Р4, ТхА2 и др. (этот процесс получил название реакции высвобождения), что приводит к вторичной, необратимой агрегации. Одновременно с высвобождением тромбоцитарных факторов происходит образовани­ем тромбина, резко усиливающего агрегацию и приводящего к по­явлению сети фибрина, в которой застревают отдельные эритроциты и лейкоциты.

Благодаря контрактильному белку тромбостенину тромбоциты подтягиваются друг к другу, тромбоцитарная пробка сокращается и уплотняется, т. е. наступает ее ретракция.

В норме остановка кровотечения из мелких сосудов занимает 2-4 мин.

Важную роль для сосудисто-тромбоцитарного гемостаза играют производные арахидоновой кислоты - простагландин I2 (PgI2), или простациклин, и ТхА2. При сохранении целости эндотелиального покрова действие Pgl преобладает над ТхА2, благодаря чему в сосудистом русле не наблюдается адгезии и агрегации тромбоцитов. При повреждении эндотелия в месте травмы синтез Pgl не проис­ходит, и тогда проявляется влияние ТхА2, приводящее к образованию тромбоцитарной пробки.

Структура тромбоцитов :(150-300х109/л.)

красные кровяные пластинки, не имеющие ядра, не делятся.У них выделяют несколько зон-периферическую, зона золя- геля , внутриклеточных органелл. На наружной поверхности периферической зоны располагается покров толщиной до 50 нм, содержащий плазматические факторы свертывания крови, энзимы, рецепторы,необходимые для активации тромбоцитов, их адгезии(приклеиванию к субэндотелию) и агрегации(приклеиванию др к др.).

Периферическая зона . Мембрана содержит "мембранный фосфолипидный фактор 3"-"фосфолипидную матрицу", формирующую активные коагуляционные комплексы с плазменными факторами свертывания крови. Мембрана богата арахидоновой кислотой, из которой фосфолипаза А2 образует свободную арахидоновую кислоту для синтеза простагландинов. В липидный бислой мембраны тромбоцита "встроены" гликопротеины 1(субъединицы 1а,1b, 1c), 2(субъединицы 2a, 2b), 3(субъединицы 3a,3b), 4,5,6, которые обусловливают адгезивные и агрегационные функции тромбоцитов. Зона золя-геля гиалоплазмы прилегает к нижнему краю периферической зоны тромбоцита и отделяет зону внутриклеточных органелл.В этой зоне вдоль края клетки располагается сократительный аппарат тромбоцита-краевое кольцо микротрубочек, контактирующее с микрофиламентом. Зона плотных и альфа-гранул 1-го и 2-го типа. Плотные гранулы содержат АДФ, АТФ, кальций, серотонин, норадреналин и адреналин. Кальций участвует в регуляции адгезии, сокращения, секреции тромбоцитов, активации его фосфолипаз и продукции в мембране тромбоцитов простагландинов, необходимых для образования тромбоксана А2.Альфа -гранулы 1-го типа содержат и секретируют антигепариновый фактор тромбоцитов 4, тромбоцитарный ростовой фактор, тромбоспондин. Альфа -гранулы 2-го типа содержат лизосомальные энзимы(кислые гидролазы). После адгезии или агрегации большая часть гранул в тромбоците исчезает. Данный феномен получил название "реакции освобождения гранул". Он имеет место поле активации тромбоцитов тромбоксаном А2, АДФ, адреналином, тромбином, протеолитическими энзимами, бактериальными эндотоксинами, коллагеном.