Непрямой тест кумбса. Методика определения групп крови
Антиглобулиновый тест, или реакция Кумбса проводится для того, чтобы выявить определенные антитела, которые атакуют красные кровяные клетки (эритроциты).
Антитела это белки, производимые иммунной системой. Как правило, антитела связываются с посторонними веществами, такими как бактерии и вирусы, и уничтожают их.
В нашей клинике есть профильные специалисты по данному вопросу.
(4 специалиста)
2. Зачем нужен тест на антитела?
Тест на антитела может проводиться в следующих случаях:
Перед переливанием крови
Вы наверняка знаете, что у человека может быть одна из четырех групп крови. И антиглобулиновый тест можно проводить для определения возможности переливания крови. Если вам делают переливание, кровь донора должна соответствовать вашему типу (иметь одинаковые антигены). Если при переливании антигены отличаются, иммунная система разрушит перелитые клетки. Это может привести к серьезным заболеваниям и даже смерти. Именно поэтому поиск нужного типа крови является столь важным фактором.
Для выявления риска резус-сенсибилизации
Резус это антиген. Его полное название - резус-фактор. Тест Кумбса используется для обнаружения антител к резус-фактору в крови у беременных женщин. Если женщина с отрицательным резус-фактором крови беременна ребенком с положительным резус-фактором (он может передаваться от отца), есть риск наступления резус-сенсибилизации. Резус- сенсибилизация происходит, когда кровь ребенка смешивается с кровью матери во время беременности или родов. Если группа крови матери несовместима с группой крови ребенка, то ее иммунная система может атаковать плод, воспринимая его чужеродным объектом. При этом может развиться тяжелое заболевание, именуемое эритробластозой плода. В редких случаях, если заболевание не лечить, плод или новорожденный могут погибнуть.
Женщине с отрицательным резус-фактором крови могут провести инъекцию анти-Rh- гаммаглобулина (например, RhoGAM), используемого для предотвращения развития Rh- гемолитической болезни.
Для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии
Аутоиммунная гемолитическая анемия является редким заболеванием, связанным с образованием антител к собственным антигенам эритроцитов.
3. Типы антиглобулиновой пробы
Существуют два типа антиглобулиновой пробы, или реакции Кумбса: прямой и непрямой.
Прямая реакция Кумбса, или прямой антиглобулиновый тест обнаруживает антитела, связанные с эритроцитами. Он используется для определения анемии. При этой болезни эритроциты разрушаются быстрее, чем производятся.
Непрямая реакция Кумбса, или непрямой антиглобулиновый тест проводится для поиска антител, не связанных с эритроцитами. Для пробы используется сыворотка крови, в которой и находятся антитела. Эта процедура достаточно редкая: в основном ее проводят для определения возможности переливания крови или как этап обследования беременных женщин.
4. Результаты реакции Кумбса
Норма:
Отрицательный результат теста - антитела не обнаружены.
- Прямой тест Кумбса . Отрицательный результат прямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь не имеет антител, связанных с эритроцитами.
- Непрямой тест Кумбса . Отрицательный результат непрямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь совместима с кровью донора. Для беременной женщины такой результат означает, что ее организм не выработал антитела против резус- положительного типа крови своего ребенка (резус-сенсибилизации не произошло).
Отклонение от нормы:
- Прямой тест Кумбса . Положительный результат прямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь имеет антитела, которые борются против эритроцитов. Это может быть вызвано переливанием несовместимой крови или такими заболеваниями, как гемолитическая анемия или гемолитическая болезнь новорожденных (ГБН).
- Непрямой тест Кумбса . Положительный результат непрямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь несовместима с кровью донора. У беременной женщины такие результаты означают присутствие антител против положительного резус-фактора крови ребенка (резус-сенсибилизация). Если ребенок имеет положительный резус-фактор крови, мать будет внимательно наблюдаться врачом на протяжении всей беременности.
Проба Кумбса является методом лабораторного исследования, сделанного путем воздействия на гемагглютинацию. В ее основании лежит восприимчивость антител к иммуноглобулинам и элементам фермента, а также их способность агглютинировать эритроциты, покрытые C3 либо Lg.
Прямая диагностика Кумбса
Используется для обнаружения антител или составляющих комплемента, установленных с наружной части клеток. Прямая проба Кумбса выполняется следующими действиями.
Применение такой пробы
Прямую диагностику Кумбса используют в определенных случаях, таких, как:
- трансфузионные воздействия;
- аутоиммунный гемолиз;
- медикаментозная гемолитическая анемия.
Непрямая проба Кумбса
Данная диагностика дает возможность выявить антитела к клеткам в сыворотке, которую инкубируют, как правило, с донорскими эритроцитами типа 0, а потом осуществляют прямую пробу. Применяют непрямую диагностику Кумбса в следующих случаях:
Как готовиться к анализу
Существуют некоторые правила подготовки к обследованию.
- Если пациент является новорожденным, родителям нужно знать, что исследование будет способствовать диагностированию ГЗН (гемолитическому заболеванию новорожденных).
- В случае если у больного есть подозрения гемолитического малокровия, ему должны объяснить, что анализ позволит узнать, вызвано ли оно защитными расстройствами, приемами лекарств либо другими факторами.
- Проба Кумбса прямая и непрямая не делает никаких ограничений в режиме питания или диете.
- Необходимо уведомить пациента, что для обследования потребуется взять кровь из вены, а также сказать ему, когда именно будет производиться венепункция.
- Еще следует предупредить о вероятности неприятных ощущений в период наложения повязки на руку и самой процедуры.
- Препараты, которые способны подействовать на результат образца, нужно отменить.
К таким лекарствам относятся:
- «Стрептомицин»;
- «Метилдофа»;
- «Прокаинамид»;
- сульфаниламиды;
- «Мелфалан»;
- «Хинидин»;
- «Рифампин»;
- «Изониазид»;
- цефалоспорины;
- «Гидралазин»;
- «Хлорпромазин»;
- «Леводопа»;
- «Тетрациклин»;
- «Дифенилгидантоин»;
- «Этосуксимид»;
- «Пенициллин»;
- мефенаминовая кислота.
Забор крови совершают с утра натощак.
Как проводится мероприятие
Проба Кумбса осуществляется в таком порядке:
- При выполнении диагностики у взрослого больного после венепункции берут кровь в трубочки с ЭДТА (этилендиаминтетраацетатом).
- У новорожденного производят забор крови из пуповины в мензурку с ЭДТА.
- Зону прокола прижимают ватным тампоном до прекращения кровотечения.
- При появлении синяка в месте венепункции прописывают согревающие компрессы.
- После набора крови пациенту разрешается вернуться к приему отменных препаратов.
- Необходимо сообщить родителям новорожденного, что для наблюдения за динамикой анемии может потребоваться вторичный анализ.
Преимущества пробы Кумбса
Такое исследование имеет некоторые превосходства, а именно:
Минусы анализа
Проба Кумбса положительная является достаточно трудоемким методом осмотра, предполагающим характерную точность выполнения. При ее использовании можно столкнуться с определенными трудностями, связанными в особенности с интерпретацией слабоположительных воздействий.
Установлено, что ошибочные отрицательные либо слабоположительные реакции при производстве проб Кумбса могут стать последствиями неудовлетворительно активной отмывки клеток, ослабления антиглобулинового реагента остатками сыворотки, а также соединения с необезжиренной наружностью, на которой может закрепляться антиглобулин, утрачивая при этом свою действенность.
Проба Кумбса отличается еще одним недостатком - малостойкостью антиглобулинового реагента, приобретение и сохранение которого имеют индивидуальные особенности, что аналогично делает сложной численную оценку воздействия антиглобулиновой сыворотки на гемагглютинацию.
Болезни, которые можно обнаружить при исследовании
Диагностика Кумбса дает возможность обнаружить некоторые виды заболеваний, такие, как:
- гемолитическое недомогание новорожденных;
- различные трансфузионные реакции;
- аутоиммунный гемолиз;
- лекарственное гемолитическое малокровие.
На сегодняшний день проба Кумбса считается довольно популярной системой исследования крови как у взрослого человека, так и у новорожденного. Она дает возможность выявить множество различных болезней.
В последние годы среди пациентов различного возраста увеличилось количество заболеваний крови и для их диагностики используются различные методы и средства. Проба Кумбса является клиническим исследованием крови, и цель ее проведения заключается в выявлении в организме определенных , представляющих угрозу для здоровья человека.
Может произойти приклеивание антител к и результатом этого может стать нарушение состояния иммунной системы. Прямая проба Кумбса представляет собой антиглобулиновый тест, который проводится для выявления антител, прикрепившихся к поверхности эритроцитов.
Обычно специалисты прибегают к проведению теста на антитела в следующих ситуациях:
- Необходимость переливания крови. Из курса школьной анатомии известно, что у человека может быть одна из четырех групп крови. Проведение антиглобулинового теста позволяет определить возможность переливания крови в другой организм. Говорить о том, что пациент может стать донором для переливания можно лишь в том случае, если его кровь соответствует типу больного, то есть в ней присутствуют одинаковые антигены. В том случае, если у пациента и донора существует различие антигенов, то это может привести к тому, что произойдет разрушение иммунной системой перелитых клеток. Результатом этого может стать развитие тяжелых заболеваний и осложнений, и даже летальный исход. Именно по этой причине важную роль придается поиску нужного типа крови при появлении необходимости ее переливания.
- Определение риска резус-сенсибилизации. Современная медицина определяет резус как антиген, а его полным определением является понятие «резус-фактор». Благодаря тесту Кумбса удается диагностировать присутствие антител к резус-фактору в крови женщин во время . В том случае, если будущая мамочка имеет отрицательный резус-фактор, а отец положительный, то будущий ребенок может унаследовать любой из них. При выявлении у будущего ребенка положительного резус-фактора повышается опасность развития резус-сенсибилизации — это процесс смешения крови и матери во время беременности или родовой деятельности.
В том случае, если наблюдается несовместимость группы матери и ребенка, то иммунная система женского организма начинает воспринимать плод как чужеродный предмет и оказывает на него всевозможную атаку. Результатом этого может стать развитие тяжелой патологии у ребенка, которая получила название эритробластоза. В некоторых случаях при отсутствии эффективного лечения наблюдается гибель плода в утробе матери либо сразу же после его рождения.
В некоторых случаях проба Кумбса проводится с целью выявления аутоиммунной гемолитической .
Такое заболевание встречается довольно редко и проявляется в образовании к антигенам эритроцитов своего собственного организма.
Специалисты выделяют две разновидности проб Кумбса, каждая из которых применяется для определенных целей.
Прямая проба. Прямая проба в медицинской практике еще называется прямой антиглобулиновый тест и с его помощью удается диагностировать антитела, прикрепленные к поверхности . В некоторых случаях производство таких антител в организме человека происходит как результат прогрессирования различных либо приема таких лекарственных препаратов, как:
- Хинидин
- Метилдоп
- Прокаинамид
Опасность таких антител кроется в том, что они могут становиться причиной развития и оказывать разрушающее воздействие на . Иногда к проведению теста Кумбса прибегают в том случае, когда необходимо выявить причины развития таких патологий, как анемия и .
- 1.Медицинская микробиология. Предмет, задачи, методы, связь с другими науками. Значение медицинской микробиологии в практической деятельности врача.
- 3. Микроорганизмы и их положение в системе живого мира. Номенклатура бактерий. Принципы классификации.
- 6. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.
- 7.Питание бактерий. Типы и механизмы питания бактерий. Аутотрофы и гетеротрофы. Факторы роста. Прототрофы и ауксотрофы.
- 8.Питательные среды. Искусственные питательные среды: простые, сложные, общего назначения, элективные, дифференциально-диагностические.
- 9. Бактериологический метод изучения микроорганизмов. Принципы и методы выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий. Характер роста микроорганизмов на жидких и плотных питательных средах.
- 13. Спирохеты, их морфология и биологические свойства. Патогенные для человека виды.
- 14. Риккетсии, их морфология и биологические свойства. Роль риккетсий в инфекционной патологии.
- 15. Морфология и ультраструктура микоплазм. Виды, патогенные для человека.
- 16. Хламидии, морфология и другие биологические свойства. Роль в патологии.
- 17. Грибы, их морфология и особенности биологии. Принципы систематики. Заболевания, вызываемые грибами у человека.
- 20. Взаимодействие вируса с клеткой. Фазы жизненного цикла. Понятие о персистенции вирусов и персистентных инфекциях.
- 21. Принципы и методы лабораторной диагностики вирусных инфекций. Методы культивирования вирусов.
- 24. Строение генома бактерий. Подвижные генетические элементы, их роль в эволюции бактерий. Понятие о генотипе и фенотипе. Виды изменчивости: фенотипическая и генотипическая.
- 25. Плазмиды бактерий, их функции и свойства. Использование плазмид в генной инженерии.
- 26. Генетические рекомбинации: трансформация, трансдукция, конъюгация.
- 27. Генная инженерия. Использование методов генной инженерии для получения диагностических, профилактических и лечебных препаратов.
- 28.Распространение микробов в природе. Микрофлора почвы, воды, воздуха, методы ее изучения. Характеристика санитарно-показательных микроорганизмов.
- 29. Нормальная микрофлора тела человека, ее роль в физиологических процессах и патологии. Понятие о дисбактериозе. Препараты для восстановления нормальной микрофлоры: эубиотики (пробиотики).
- 31. Формы проявления инфекции. Персистенция бактерий и вирусов. Понятие о рецидиве, реинфекции, суперинфекции.
- 32. Динамика развития инфекционного процесса, его периоды.
- 33. Роль микроорганизма в инфекционном процессе. Патогенность и вирулентность. Единицы измерения вирулентности. Понятие о факторах патогенности.
- 34. Классификация факторов патогенности по о.В. Бухарину. Характеристика факторов патогенности.
- 35. Понятие об иммунитете. Виды иммунитета.
- 36. Неспецифические защитные факторы организма против инфекции. Роль и.И. Мечникова в формировании клеточной теории иммунитета.
- 37. Антигены: определение, основные свойства. Антигены бактериальной клетки. Практическое использование антигенов бактерий.
- 38. Структура и функции иммунной системы. Кооперация иммунокомпетентных клеток. Формы иммунного ответа.
- 39. Иммуноглобулины, их молекулярная структура и свойства. Классы иммуноглобулинов. Первичный и вторичный иммунный ответ. :
- 40. Классификация гиперчувствительности по Джейлу и Кумбсу. Стадии аллергической реакции.
- 41. Гиперчувствительность немедленного типа. Механизмы возникновения, клиническая значимость.
- 42. Анафилактический шок и сывороточная болезнь. Причины возникновения. Механизм. Их предупреждение.
- 43. Гиперчувствительность замедленного типа. Кожно-аллергические пробы и их использование в диагностике некоторых инфекционных заболеваний.
- 44. Особенности противовирусного, противогрибкового, противоопухолевого, трансплантационного иммунитета.
- 45. Понятие о клинической иммунологии. Иммунный статус человека и факторы, влияющие на него. Оценка иммунного статуса: основные показатели и методы их определения.
- 46. Первичные и вторичные иммунодефициты.
- 47. Взаимодействие антигена с антителом in vitro. Теория сетевых структур.
- 48. Реакция агглютинации. Компоненты, механизм, способы постановки. Применение.
- 49. Реакция Кумбса. Механизм. Компоненты. Применение.
- 50. Реакция пассивной гемагглютинации. Механизм. Компоненты. Применение.
- 51. Реакция торможения гемагглютинации. Механизм. Компоненты. Применение.
- 53. Реакция связывания комплемента. Механизм. Компоненты. Применение.
- 54. Реакция нейтрализации токсина антитоксином, нейтрализации вирусов в культуре клеток и в организме лабораторных животных. Механизм. Компоненты. Способы постановки. Применение.
- 55. Реакция иммунофлюоресценции. Механизм. Компоненты. Применение.
- 56. Иммуноферментный анализ. Иммуноблотинг. Механизмы. Компоненты. Применение.
- 57. Вакцины. Определение. Современная классификация вакцин. Требования, предъявляемые к вакцинным препаратам.
- 59. Вакцинопрофилактика. Вакцины из убитых бактерий и вирусов. Принципы приготовления. Примеры убитых вакцин. Ассоциированные вакцины. Преимущества и недостатки убитых вакцин.
- 60. Молекулярные вакцины: анатоксины. Получение. Использование анатоксинов для профилактики инфекционных заболеваний. Примеры вакцин.
- 61. Генно-инженерные вакцины. Получение. Применение. Преимущества и недостатки.
- 62. Вакцинотерапия. Понятие о лечебных вакцинах. Получение. Применение. Механизм действия.
- 63. Диагностические антигенные препараты: диагностикумы, аллергены, токсины. Получение. Применение.
- 64. Сыворотки. Определение. Современная классификация сывороток. Требования, предъявляемые к сывороточным препаратам.
- 65. Антительные препараты – сыворотки, применяемые для лечения и профилактики инфекционных заболеваний. Способы получения. Осложнения при применении и их предупреждение.
- 66. Антительные препараты – сыворотки, применяемые для диагностики инфекционных заболеваний. Способы получения. Применение.
- 67. Понятие об иммуномодуляторах. Принцип действия. Применение.
- 68. Интерфероны. Природа, способы получения. Применение. № 99 Интерфероны. Природа, способы получения. Применение.
- 69. Химиотерапевтические препараты. Понятие о химиотерапевтическом индексе. Основные группы химиотерапевтических препаратов, механизм их антибактериального действия.
- 71. Лекарственная устойчивость микроорганизмов и механизм ее возникновения. Понятие о госпитальных штаммах микроорганизмов. Пути преодоления лекарственной устойчивости.
- 72. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней.
- 73. Возбудители брюшного тифа и паратифов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- 74. Возбудители эшерихиозов. Таксономия. Характеристика. Роль кишечной палочки в норме и патологии. Микробиологическая диагностика эшерихиозов.
- 75. Возбудители шигеллеза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- 76. Возбудители сальмонеллезов. Таксономия. Характеристика. Микробиологический диагноз сальмонеллезов. Лечение.
- 77. Возбудители холеры. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- 78.Стафилококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых стафилококками. Специфическая профилактика и лечение.
- 79. Стрептококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Лечение.
- 80. Менингококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Лечение.
- 81. Гонококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика гонореи. Лечение.
- 82. Возбудитель туляремии. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- 83. Возбудитель сибирской язвы. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- 84. Возбудитель бруцеллеза. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- 85. Возбудитель чумы. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- 86. Возбудители анаэробной газовой инфекции. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- 87. Возбудители ботулизма. Таксономия и характеристика Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- 88. Возбудитель столбняка. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика и лечение.
- 89. Неспорообразующие анаэробы. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика и лечение.
- 90. Возбудитель дифтерии. Таксономия и характеристика. Условно – патогенные коринебактерии. Микробиологическая диагностика. Выявления анатоксического иммунитета. Специфическая профилактика и лечение.
- 91. Возбудители коклюша и паракоклюша. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- 92. Возбудители туберкулеза. Таксономия и характеристика. Условно – патогенные микобактерии. Микробиологическая диагностика туберкулеза.
- 93. Актиномицеты. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- 95. Возбудитель хламидиозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- 96.Возбудитель сифилиса. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- 97. Возбудитель лептоспирозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика. Лечение.
- 98. Возбудитель боррелиозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика.
- 99. Клиническая микробиология, ее задачи. Вби, особенности причины возникновления.Роль условно – патогенных микроорганизмов в возникновении внутрибольничных инфекций.
- 100. Классификация грибов. Характеристика. Роль в патологии. Лабораторная диагностика. Лечение.
- 101. Классификация микозов. Поверхностные и глубокие микозы. Дрожжеподобные грибы рода кандида. Роль в патологии человека.
- 102. Возбудитель гриппа. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- 103. Возбудитель полиомиелита. Таксономия и характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- 104. Возбудители гепатитов а и е. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- применяют
у больных при внутрисосудистом гемолизе.
У некоторых таких больных обнаруживают
антирезусные антитела, которые являются
неполными, одновалентными. Они
специфически взаимодействуют с
резус-положительными эритроцитами, но
не вызывают их агглютинации. Наличие
таких неполных антител определяют в
непрямой реакции Кумбса. Для этого в
систему антирезусные антитела +
резус-положительные эритроциты добавляют
антиглобулиновую сыворотку (антитела
против иммуноглобулинов человека),
что вызывает агглютинацию эритроцитов.
С помощью реакции Кумбса диагностируют
патологические состояния, связанные
с внутрисосудистым лизисом эритроцитов
иммунного генеза, например гемолитическую
болезнь новорожденных: эритроциты
резус-положительного плода соединяются
с циркулирующими в крови неполными
антителами к резус-фактору, которые
перешли через плаценту от
резус-отрицательной матери.
Механизм . Сложность выявления неполных (моновалентных) антител связана с тем, что эти антитела, связываясь с эпитопами специфического антигена, не образуют структуру решетки и реакция между антигенами и антителами не выявляется ни агглютинацией, ни преципитацией, ни другими тестами. Для выявления образовавшихся комплексов антиген - антитело приходится использовать дополнительные тест-системы. Для выявления неполных антител, например к резус-антигену эритроцитов в сыворотке крови беременной женщины, реакция ставится в два этапа: 1) к двукратным разведениям испытуемой сыворотки добавляют эритроциты, содержащие резус-антиген, и выдерживают при 37 °С в течение часа; 2) к тщательно отмытым после первого этапа эритроцитам добавляют кроличью античеловеческую анти-глобулиновую сыворотку (в заранее оттитрованном рабочем разведении). После инкубации в течение 30 мин при 37 °С результаты оценивают по наличию гемагглютинации (положительная реакция). Необходимо ставить контроль ингредиентов реакции: 1) антиглобулиновая сыворотка + заведомо сенсибилизированные специфическими антителами эритроциты; 2) обработанные нормальной сывороткой эритроциты + антиглобулиновая сыворотка; 3) обработанные исследуемой сывороткой резус-отрицательные эритроциты + антиглобулиновая сыворотка.
50. Реакция пассивной гемагглютинации. Механизм. Компоненты. Применение.
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА) основана на использовании эритроцитов (или латекса) с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка.
Компоненты. Для постановки РНГА могут быть использованы эритроциты барана, лошади, кролика, курицы, мыши, человека и другие, которые заготавливают впрок, обрабатывая формалином или глютаральдегидом. Адсорбционная емкость эритроцитов увеличивается при обработке их растворами танина или хлорида хрома.
Антигенами в РНГА могут служить полисахаридные АГ микроорганизмов, экстракты бактериальных вакцин, АГ вирусов и риккетсий, а также другие вещества.
Эритроциты, сенсибилизированные АГ, называются эритроцитарными диагностикумами. Для приготовления эритроцитарного диагностикума чаще всего используют эритроциты барана, обладающие высокой адсорбирующей активностью.
Применение . РНГА применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности к лекарственным препаратам, гормонам и в некоторых других случаях.
Механизм . Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) отличается значительно более высокой чувствительностью и специфичностью, чем реакция агглютинации. Ее используют для идентификации возбудителя по его антигенной структуре или для индикации и идентификации бактериальных продуктов - токсинов в исследуемом патологическом материале. Соответственно используют стандартные (коммерческие) эритроцитарные антительные диагностикумы, полученные путем адсорбции специфических антител на поверхности танизированных (обработанных танином) эритроцитов. В лунках пластмассовых пластин готовят последовательные разведения исследуемого материала. Затем в каждую лунку вносят одинаковый объем 3 % суспензии нагруженных антителами эритроцитов. При необходимости реакцию ставят параллельно в нескольких рядах лунок с эритроцитами, нагруженными антителами разной групповой специфичности.
Через 2 ч инкубации при 37 °С учитывают результаты, оценивая внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания): при отрицательной реакции появляется осадок в виде компактного.диска или кольца на дне лунки, при положительной реакции - характерный кружевной осадок эритроцитов, тонкая пленка с неровными краями.
– антиглобулиновая проба, направленная на выявление в резус-отрицательной крови неполных антиэритроцитарных антител к резус-фактору – специфическому белку, который находится на поверхности эритроцитов резус-положительной крови. Существует два вида данного теста: прямой – выявление антител на поверхности эритроцитов, непрямой – выявление антител в сыворотке крови. Прямая проба осуществляется при диагностике и мониторинге лечения заболеваний крови: гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденных и других. Непрямая проба выполняется для оценки совместимости крови донора и реципиента при переливании, а также для определения наличия и риска резус-конфликта при планировании и ведении беременности. Материалом для теста Кумбса является венозная кровь, исследование проводится методами на основе реакции агглютинации. В норме обе пробы дают отрицательный результат. Анализ выполняется в течение одного дня. Всего в Москве нашлось 87 адресов, где можно сделать этот анализ.
– антиглобулиновая проба, направленная на выявление в резус-отрицательной крови неполных антиэритроцитарных антител к резус-фактору – специфическому белку, который находится на поверхности эритроцитов резус-положительной крови. Существует два вида данного теста: прямой – выявление антител на поверхности эритроцитов, непрямой – выявление антител в сыворотке крови. Прямая проба осуществляется при диагностике и мониторинге лечения заболеваний крови: гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденных и других. Непрямая проба выполняется для оценки совместимости крови донора и реципиента при переливании, а также для определения наличия и риска резус-конфликта при планировании и ведении беременности. Материалом для теста Кумбса является венозная кровь, исследование проводится методами на основе реакции агглютинации. В норме обе пробы дают отрицательный результат. Анализ выполняется в течение одного дня.
Тест Кумбса – клиническое исследование резус-отрицательной крови, направленное на обнаружение антител к резус-фактору. Проба используется для выявления риска развития резус-конфликта и гемолитических реакций. У каждого человека поверхность эритроцитов содержит определенный набор антигенов или агглютиногенов – соединений различной природы, по наличию или отсутствию которых судят о группе крови и резус-факторе. Существует множество видов антигенов, в медицинской практике наибольшее практическое значение имеют агглютиногены A и B, определяющие группу крови, и агглютиноген D – резус-фактор. При положительном резус-факторе на внешней мембране эритроцитов определяются антигены D, при отрицательном – нет.
Тест Кумбса, который также называют антиглобулиновой пробой, направлен на выявление в крови неполных антиэритроцитарных антител к системе резус-фактора. Антитела к резус-фактору – специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются в резус-отрицательной крови при попадании в нее эритроцитов с агглютиногенами D. Это может произойти при смешении крови плода и беременной, при гемотрансфузиях , проведенных без предварительного типирования крови. Тест Кумбса существует в двух вариантах – прямой и непрямой. При выполнении прямого теста Кумбса выявляются антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов. Исследование используется для установления причины гемолитической реакции. Непрямой тест Кумбса направлен на выявление антиэритроцитарных антител в плазме крови. Он необходим для определения совместимости крови донора и реципиента или матери и плода, позволяет предупредить развитие резус-конфликта и последующего гемолиза эритроцитов.
Кровь для проведения обоих вариантов теста Кумбса берется из вены. Анализ выполняется методом агглютинации с использованием антиглобулиновой сыворотки. Результаты исследования находят применение в гематологии при выявлении причин гемолитических реакций, в хирургии и реаниматологии при проведении гемотрансфузий, в акушерстве и гинекологии при мониторинге беременностей у женщин с резус-отрицательной кровью.
Показания
Прямой тест Кумбса, выявляющий антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов, назначается при гемолитических реакциях (разрушении эритроцитов) различного происхождения. Исследование показано при первичной аутоиммунной гемолитической анемии , посттрансфузионной гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденного , гемолизе эритроцитов, вызванном аутоиммунными, опухолевыми или инфекционными заболеваниями, а также приемом лекарственных средств, например, хинидина, метилдопы, прокаинамида. Непрямой тест Кумбса, определяющий антитела в плазме крови, используется для предупреждения развития резус-конфликта. Он показан пациентам при подготовке к гемотрансфузиям, а также беременным с отрицательным резус-фактором при условии, что будущий отец ребенка имеет положительный резус-фактор.
С целью определения резус-совместимости тест Кумбса не назначается пациентам с резус-положительной кровью. В этих случаях на поверхности эритроцитов уже имеются антигены, выработка антител не может быть спровоцирована гемотрансфузией или попаданием крови плода в кровоток беременной. Также исследование не показано беременным женщинам, если оба родителя имеют отрицательный резус-фактор – передающийся по наследству рецессивный признак. Ребенок в таких парах всегда имеет резус-отрицательную кровь, иммунологический конфликт с матерью невозможен. При гемолитических патологиях антиглобулиновая проба не используется с целью контроля успешности терапии, так как результаты не отражают активность процесса разрушения эритроцитов.
Ограничением теста Кумбса является трудоемкость процедуры исследования – для получения достоверных результатов необходимо соблюдение температурных и временных режимов, правил подготовки реагентов и биоматериала. К преимуществам теста Кумбса относится его высокая чувствительность. При гемолитической анемии результаты этого анализа остаются положительными, даже если показатели гемоглобина , билирубина и ретикулоцитов нормализуются.
Подготовка к анализу и забор материала
Материалом для выполнения теста Кумбса является венозная кровь. Специальных требований ко времени проведения процедуры забора крови и к подготовке пациента нет. Как и при любом исследовании рекомендуется выдержать перерыв после приема пищи не менее 4 часов, а в последние 30 минут отказаться от курения, физических нагрузок, избегать эмоционального напряжения. Также стоит заранее обсудить с врачом необходимость отмены принимаемых лекарств – некоторые препараты могут исказить результаты теста Кумбса. Кровь берут с помощью шприца из локтевой вены, реже из вены на тыльной стороне кисти. В течение нескольких часов материал доставляется в лабораторию.
При выполнении прямого теста Кумбса к сыворотке крови пациента добавляется антиглобулиновая сыворотка. Через некоторое время смесь исследуется на наличие агглютинатов – они образуются, если на эритроцитах есть антитела. При положительном результате определяется агглютинирующий титр. Непрямой тест Кумбса состоит из большего количества этапов. Сначала антитела, находящиеся в сыворотке, в ходе инкубации фиксируются на введенных эритроцитах. Затем к образцу добавляется антиглобулиновая сыворотка, через некоторое время определяется наличие и титр агглютинатов. Сроки выполнения анализа – 1 день.
Нормальные результаты
В норме результат прямой теста Кумбса отрицательный (-). Это означает, что в крови нет антител, связанных с эритроцитами, и они не могут быть причиной гемолиза. Нормальный результат непрямого теста Кумбса тоже отрицательный (-), то есть антитела к резус-фактору в плазме крови отсутствуют. При подготовке к гемотрансфузии для реципиента это означает совместимость с кровью донора, при мониторинге беременности – отсутствие резус-сенсибилизации матери, низкий риск развития иммунологического конфликта. Физиологические факторы, такие как особенности питания или физической активности, не могут повлиять на результат пробы. Поэтому если результат положительный, необходима консультация врача.
Диагностическое значение анализа
Положительный результат теста Кумбса выражается качественно, от (+) до (++++), либо количественно, титрами от 1:16 до 1:256. Определение концентрации антител на эритроцитах и в сыворотке крови выполняется в обоих видах пробы. При положительном результате прямого теста Кумбса на внешней мембране эритроцитов выявляются антитела, которые приводят к разрушению этих клеток крови. Причиной может стать переливание крови без предварительного типирования – посттрансфузионная гемолитическая реакция, а также эритробластоз новорожденного, гемолитическая реакция вследствие применения лекарств, первичная или вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия. Вторичное разрушение эритроцитов может быть вызвано системной красной волчанкой , синдромом Эванса, макроглобулинемией Вальденстрема, пароксизмальной холодовой гемоглобинурией , хроническим лимфолейкозом , лимфомой, инфекционным мононуклеозом , сифилисом , микоплазменной пневмонией .
Положительный результат непрямого теста Кумбса указывает на наличие в плазме антител к резус-фактору. На практике это означает, что произошла резус-сенсибилизация, существует возможность развития резус-конфликта после вливания крови донора, во время беременности. Для предупреждения осложнений беременности женщины с положительным результатом теста Кумбса ставятся на специальный учет.
Лечение отклонений от нормы
Тест Кумбса относится к изосерологическим исследованиям. Его результаты позволяют выявить гемолитическую реакцию, а также определить совместимость крови донора и реципиента, матери и плода, чтобы предупредить развитие резус-конфликта. Если результат пробы положительный, то необходимо обратиться за консультацией к лечащему врачу – акушеру-гинекологу, гематологу, хирургу .