AULA 7

Aula teórica. Corynebacterium difteria. Morfologia, formação de toxinas. Características de sustentabilidade no meio ambiente. Patogênese da difteria. Imunidade. Prevenção e terapia específicas. Métodos de diagnóstico.

Mycobacterium tuberculose. Morfologia, formação de toxinas. Características de sustentabilidade no meio ambiente. Doenças causadas por Mycobacterium tuberculosis. Imunidade. Métodos de diagnóstico. Teste de alergia de Mantoux. Prevenção específica da tuberculose.

Patógenos de infecções especialmente perigosas (DAI). Características gerais das propriedades dos patógenos das doenças infecciosas agudas. Medidas de segurança na seleção do material.

CORYNEBACTERIA DIPTHERIA E MYCOBACTERIA TUBERCULOSE

Corynebacterium difteria.

O agente causador da difteria pertence ao departamento Firmicutes, filo Actinobacteria, classe Actinobacteria, ordem Actinomycetales, família Corinebacteriaceae, gênero Corinebacterium, espécie C. diphtheriae

O patógeno foi descoberto por T.K. Klebs (1883), isolado por F. Leffler (1884)

Morfologia e cultivo. C. A difteria são bastonetes gram-positivos, finos e levemente curvos (polimórficos - ramificados, filamentosos, cocóides), com tamanho de 1-8 × 0,3-0,8 µm. Eles estão localizados em traços em ângulo na forma de algarismos romanos X e V ou dedos abertos. Eles formam inclusões - grãos de volutina (são de cor azul-violeta de acordo com Neisser, e o próprio patógeno é amarelo). Não possuem esporos, cápsulas, flagelos, possuem fímbrias .

Anaeróbios ou aeróbios facultativos, quimioorganoheterotróficos. Eles crescem a 37 0 C (15 0 C-40 0 C), o pH do ambiente é 7,2-7,6. Meios seletivos - Meio de Tinsdal (ágar cistina-telurito-soro), meio de Clauberg (MPA com adição de sangue hemolisado, telurito de potássio, glicerol), meio de Buchin (MPA com adição de quinosol, cistina, hidrolisado de peixe, sangue, água- rosa)

No soro e no ágar sangue, eles formam colônias quebradiças de cor creme (paralelepípedos); em meio Tinsdal – colônias marrons; na quarta-feira de Buchin - colônias azuladas; e no meio de Clauberg formam colônias de três tipos:

– gravidade– colónias grandes, ásperas (em forma de R), pretas ou cinzentas, em forma de roseta;

– mitis– escuro liso (formato S) brilhante;

– intermediário– preto pequeno (formato RS)

O crescimento no caldo é caracterizado por turbidez uniforme ou uma película superficial que cresce, se desfaz e se deposita em flocos no fundo do tubo de ensaio;

gravidade forma um filme superficial e sedimento granular;

mitis– turbidez difusa;

intermediário– turbidez e sedimentos granulares

Propriedades enzimáticas. Corynebacterium diphtheria produz: enzimas sacarolíticas - fermentam a glicose; quebrar o amido; enzimas proteolíticas - formam cistinase; restaurar nitratos; não libere urease, não liquefaça a gelatina; não forma indol; formar sulfeto de hidrogênio

Fatores de patogenicidade. O patógeno produz os seguintes fatores de patogenicidade:

· fator hemolisante leva ao desenvolvimento de síndrome hemorrágica;

· fímbrias (vilosidades ou pili) proporcionam adesão e colonização;

· o fator cordão interrompe os processos respiratórios em várias células do corpo;

· fator necrótico, fibrinolisina;

A exotoxina (histotoxina, dermotoxina, hemolisina) é um dos principais fatores de patogenicidade.

A exotoxina consiste nas frações A e B. A fração A (polipeptídeo tóxico - a própria toxina) possui propriedades necróticas. Bloqueia a síntese de proteínas nas células, incluindo o miocárdio e as células do sistema nervoso (desmielinização das fibras nervosas - causa paralisia, paresia). Danifica as células epiteliais das paredes dos vasos, causando aumento da exsudação.

Fração B (polipeptídeo de transporte) – promove a disseminação da fração A, pois possui atividade hialuronidase, neuraminidase e protease.

A exotoxina é instável e é facilmente destruída pela temperatura, luz e oxigênio atmosférico. Sob a influência da formalina (temperatura 38-40 0 C, 3-4 semanas) transforma-se em toxóide.

Antígenos: Antígeno K – natureza proteica específica do tipo, termolábil; O antígeno O é um lipopolissacarídeo termoestável, específico do grupo.

A reação de aglutinação identifica 54 sorotipos. Eles têm 19 produtos de fagos.

Resistência (estabilidade no ambiente externo). Sensível a altas temperaturas, peróxido de hidrogênio, solução sublimada, ácido carbólico, antibióticos. Quando expostos a uma solução de fenol a 1% e 60 0 C, morrem em 10 minutos. Eles permanecem vivos com soro de leite coagulado por até um ano. Liberados no ambiente externo com saliva e filmes, os bacilos da difteria são capazes de permanecer viáveis ​​em temperatura ambiente por até dois meses e em brinquedos infantis por vários dias.

Patogenicidade para animais. Em condições naturais, foram encontradas corinebactérias patogênicas em cavalos, vacas e cães, provavelmente infectados por pessoas doentes. Mas eles não servem como fonte de infecção.

Entre os animais de laboratório, porquinhos-da-índia e coelhos são suscetíveis. Ao serem infectados, desenvolve-se um quadro típico de intoxicação com formação de inflamação, edema e necrose no local da injeção. Os órgãos internos estão hiperêmicos e são observadas hemorragias nas glândulas supra-renais.

Difteria– doença infecciosa aguda caracterizada pela formação de películas fibrosas na porta de entrada e intoxicação que causa danos tóxicos aos sistemas nervoso e cardiovascular, bem como a outros sistemas e órgãos.

Fonte de infecção: pessoa doente e portadora de bactérias.

Formas de transmissão da infecção: aerotransportado, contato doméstico (brinquedos macios para crianças).

Portão de entrada: membranas mucosas da nasofaringe, menos frequentemente a conjuntiva dos olhos, superfície da ferida.

Patogênese da doença. Uma vez nas membranas mucosas, o patógeno se multiplica ativamente no local da porta de entrada e libera exotoxina. A toxina se espalha pelas vias linfogênica e hematogênica, o que leva ao desenvolvimento de intoxicação, acompanhada de danos aos órgãos parenquimatosos, miocárdio, rins, glândulas supra-renais e tecido nervoso. Na porta de entrada, devido à liberação de exotoxina, a fagocitose é suprimida, as células endoteliais são danificadas, a permeabilidade da parede vascular aumenta e a exsudação aumenta. O fibrinogênio é encontrado no exsudato e, quando ele coagula, formam-se depósitos transparentes branco-acinzentados, firmemente fundidos ao tecido circundante. Desenvolve-se inflamação fibrosa. Os filmes são difíceis de remover; quando são arrancados, uma superfície erosiva fica exposta. A necrose afeta todas as camadas da membrana mucosa e aparecem úlceras (inflamação diftérica).

Quadro clínico. Existem diferentes formas de localização da difteria: difteria da faringe, nariz, laringe, olhos, genitália externa, pele, feridas e outras. Em 80-95% dos casos, é observada difteria da faringe.

O período de incubação é de 2 a 10 dias. A doença começa com aumento da temperatura corporal, dor ao engolir, película nas amígdalas e aumento dos gânglios linfáticos. Em adultos, a difteria pode ocorrer como amigdalite lacunar. Em crianças pequenas, junto com a faringe e o nariz, a laringe está envolvida no processo patológico e, como resultado do inchaço da laringe e das cordas vocais, desenvolve-se o crupe da difteria, que pode levar à asfixia e à morte.

Na forma tóxica da difteria, o início é agudo, a temperatura é de 39-40 0 C e a intoxicação é pronunciada; as placas são espessas, protuberantes, purulentas e difíceis de remover; as amígdalas sangram quando a placa é removida; desenvolve-se inchaço dos tecidos, os gânglios linfáticos regionais ficam aumentados e doloridos.

Complicações – miocardite tóxica, insuficiência aguda do sistema hipófise-adrenal, paralisia dos músculos respiratórios.

Imunidade. Até os 5 meses, existe uma imunidade passiva natural do recém-nascido, adquirida pela criança durante o desenvolvimento intrauterino. Após uma doença, forma-se uma imunidade antitóxica e antimicrobiana estéril estável. Esta imunidade ativa natural está associada à atividade fagocítica de células, opsoninas, aglutininas e substâncias de ligação ao complemento.

A imunidade artificial ativa (pós-vacinação) é bastante duradoura – até 3-5 anos.

Prevenção. Diagnóstico precoce, internação imediata, isolamento e tratamento dos pacientes; identificação e tratamento de portadores com antibióticos; desinfecção completa no surto; quarentena em instituições infantis.

Prevenção específica:

1. Ativo. As vacinas utilizadas são: AD (toxóide diftérico), ADS (toxóide adsorvido difteria-tétano), ADSM, DPT (vacina adsorvida coqueluche-difteria-tétano). A vacinação DPT é realizada três vezes em crianças de 3 meses (até esse momento elas mantêm a imunidade placentária). A revacinação é realizada com o toxóide ADS não só na infância, mas também em adultos a cada 10 anos.

Ao entrar em contato com uma pessoa doente, pessoas que não possuem forte imunidade antitóxica são injetadas com toxóide diftérico (AD).

2. Passivo. É realizado nos focos da doença com soro antitóxico, cuja dose é determinada pela forma e gravidade da doença.

Tratamento. Utilizar nas fases iniciais soro antitóxico antidifteria, que é administrado pelo método Bezredka (fracionado, aumentando gradativamente a dose). Paralelamente, são utilizados antibióticos (penicilina, tetraciclinas, eritromicina), sulfonamidas, glicose, vitaminas e anti-histamínicos.

1. CORINEBACTÉRIAS

O gênero Corynebacterium inclui bactérias que apresentam espessamentos em forma de clube nas extremidades: corinebactérias, patogênicas para humanos e animais, e difteróides (corinebactérias não patogênicas e oportunistas).

O agente causador da difteria

A descoberta do agente causador da difteria foi precedida por extensos estudos clínicos, patológicos, epidemiológicos e experimentais, que em grande parte abriram caminho para sua descoberta (Klebs E., 1883), isolamento em cultura pura (Leffler F., 1884), e produção da toxina (Ru E. e Yersen A., 1888), soro antitóxico (Bering E., Kitazato, 1890, Roux E., 1894) e toxóide diftérico (Ramon G., 1923).

Morfologia. Corinebactérias da difteria - Corynebacterium diphtheriae (lat. soguna club, diphthera - filme, pele) bastonetes retos ou levemente curvos com 1-8 mícrons de comprimento e 0,3-0,8 mícrons de largura, polimórficos, melhor corados nos pólos sobre os quais grânulos metacromáticos de volutina (grânulos de Babes ) estão localizados Ernst, polimetafosfatos) Nas corinebactérias da difteria, observam-se espessamentos em forma de clube nas extremidades contendo grãos de volutina, às vezes aparecem formas ramificadas e filamentosas, além de formações curtas, quase cocóides e semelhantes a leveduras. Nos traços, eles são dispostos em forma de V (em ângulo), assumindo a forma de dedos abertos. Não formam esporos, cápsulas ou flagelos e são gram-positivos.

Cultivo. O agente causador da difteria é um aeróbio ou anaeróbio facultativo, bem cultivado em meios contendo proteínas (soro de leite coagulado, ágar sangue, ágar soro de leite), bem como em caldo de açúcar. Em meio Roux (soro de cavalo coagulado) e meio Leffler (3 partes de soro bovino + 1 parte de caldo de açúcar), as corinebactérias da difteria se desenvolvem dentro de 16-18 horas, seu crescimento se assemelha à pele shagreen, as colônias não se fundem umas com as outras.

Com base nas propriedades culturais e biológicas das corinebactérias, a difteria é dividida em três biovares: gravis, mitis e intermedius, que diferem entre si em uma série de características.

Corynebacterium biovar gravis em ágar telurito contendo sangue desfibrinado e telurito de potássio forma colônias grandes e ásperas (em forma de R) em forma de roseta de cor preta ou cinza. Eles fermentam dextrina, amido e glicogênio, formam uma película superficial e um sedimento granular no caldo, geralmente são altamente tóxicos e possuem propriedades invasivas mais pronunciadas.

Corynebacterium biovar mitis cresce em ágar telúrio com a formação de colônias brilhantes escuras e lisas (em forma de S). Eles não fermentam amido e glicogênio, fermentam a dextrina de forma inconsistente, causam hemólise de eritrócitos de todas as espécies animais e observa-se turbidez difusa no caldo. Culturas deste tipo são geralmente menos toxigênicas e invasivas que o corynebacterium biovar gravis.

Corynebacterium biovar intermedius ocupa uma posição intermediária. Suas colônias no ágar telurito são pequenas (forma RS), pretas, não fermentam amido e glicogênio e crescem em caldo com aparência de turbidez e sedimento granular.

Propriedades enzimáticas. As corinebactérias da difteria (todas as três biovars) não coagulam o leite, não decompõem a uréia, não emitem indol, formam fracamente sulfeto de hidrogênio, reduzem nitratos em nitritos, bem como telurito de potássio em sulfeto de telurito, como resultado das colônias de difteria as corinebactérias no ágar telurito tornam-se pretas ou cinza.

As corinebactérias da difteria fermentam glicose e maltose e, ocasionalmente, galactose, amido, dextrina e glicerol.

As bactérias da difteria fermentam a cisteína para produzir sulfeto de hidrogênio e não decompõem a uréia, enquanto as bactérias da difteria decompõem a uréia, mas não fermentam a cisteína.

As corinebactérias da difteria produzem bacteriocinas (corinecinas), o que lhes confere algumas vantagens seletivas.

Formação de toxinas. As corinebactérias da difteria produzem exotoxinas fortes (histotoxina, dermonecrotoxina, hemolisina) em culturas em caldo. A toxigenicidade do Corynebacterium diphtheria está associada à lisogenicidade (presença de profagos temperados em cepas toxigênicas). A cepa clássica de referência internacional Park-Williams 8, produtora de exotoxinas, também é lisogênica e mantém a capacidade de produzir toxinas há mais de 85 anos. Os determinantes genéticos da toxigenicidade (tox + genes) estão localizados no genoma do profago integrado ao nucleóide do Corynebacterium diphtheria.

Como resultado da lisogenização, cepas não toxigênicas de C. diphtheriae (biovar mitis) transformam-se em toxigênicas ( conversão toxigênica).

A toxina diftérica é um polipeptídeo termoestável que consiste em dois fragmentos chamados A e B. O fragmento B é necessário para transportar o fragmento A para a célula, onde inibe o alongamento da cadeia polipeptídica no ribossomo. A inibição da síntese proteica provavelmente medeia os efeitos tóxicos necrotóxicos e neutrotóxicos da toxina diftérica.

A toxina da difteria é instável. É facilmente destruído sob a influência da temperatura, luz e oxigênio atmosférico, mas é relativamente resistente ao ultrassom.

Depois de adicionar 0,3-0,4% de formaldeído à toxina e mantê-la a 38 - 40 °C durante 3-4 semanas, ela se transforma em toxóide diftérico, que é mais resistente às influências físicas e químicas do que a toxina original.

Cepas toxigênicas de corinebactérias diftéricas, juntamente com a lisogenicidade, são caracterizadas por atividade pronunciada de desidrogenase e neuraminidase, enquanto cepas não toxigênicas não possuem tal atividade.

Estrutura antigênica. Por meio de reação de aglutinação, foram identificados 11 sorovares do agente causador da difteria.

As toxinas produzidas por diferentes cepas de biovars gravis e mitis não diferem entre si e são completamente neutralizadas pela antitoxina diftérica padrão. Vários autores estabeleceram a presença de antígenos proteicos de superfície termolábeis específicos de variantes (antígenos K) e antígenos polissacarídeos somáticos termoestáveis ​​específicos de grupo em Corynebacterium diphtheria.

Entre o Corynebacterium diphtheria existem 19 fagótipos, com a ajuda dos quais são identificadas fontes de infecção; os fagótipos também são levados em consideração na identificação de culturas isoladas.

Resistência. As corinebactérias da difteria são relativamente resistentes aos efeitos nocivos dos fatores ambientais. Eles permanecem vivos em soro de leite coagulado por até 1 ano, em temperatura ambiente por até 2 meses e em brinquedos infantis por vários dias. As corinebactérias persistem por bastante tempo nos filmes de pacientes com difteria, principalmente se os filmes não forem expostos à luz. Quando expostas a uma temperatura de 60 °C e a uma solução de fenol a 1%, as corinebactérias morrem em 10 minutos.

Patogenicidade para animais. Em condições naturais, corinebactérias virulentas da difteria foram encontradas em cavalos, vacas e cães, provavelmente infectados por pacientes humanos e portadores. No entanto, os animais domésticos não desempenham um papel como fontes de infecção humana.

Entre os animais de laboratório, as cobaias e os coelhos são os mais suscetíveis. Quando infectados com cultura ou toxina, desenvolvem quadro típico de infecção tóxica com formação de inflamação, edema e necrose no local da injeção. Os órgãos internos estão hiperêmicos e são observadas hemorragias nas glândulas supra-renais. Uma dose de 0,06 mcg de toxina mata uma cobaia pesando 250 g.

Patogênese da doença em humanos. A fonte de infecção são pacientes com difteria e portadores. A doença é transmitida por gotículas transportadas pelo ar, às vezes com partículas de poeira; a transmissão também é possível através de vários objetos (brinquedos, pratos, livros, toalhas, lenços, etc.), produtos alimentícios (leite, pratos frios diversos, etc.) infectados com corinebactérias da difteria.

Os portadores desempenham um papel importante na epidemiologia da difteria. Em média, o número de portadores entre convalescentes e indivíduos saudáveis ​​varia de 3 a 5%.

A maior incidência de difteria é observada no outono, o que é explicado pelo aumento da aglomeração de crianças nesta época do ano e pela diminuição da resistência do organismo sob a influência do resfriamento.

Devido à presença de um fator de difusão, as corinebactérias da difteria têm a capacidade de penetrar no sangue e nos tecidos de pessoas doentes e animais infectados. O fator de difusão é uma enzima hialuronidase que tem a capacidade de decompor o ácido hialurônico. Os fatores de invasividade incluem neuraminidase, fator necrótico e fibrinolisina.

Na patogênese da difteria, o papel principal é desempenhado pela histotoxina, que bloqueia a síntese protéica nas células dos mamíferos e inativa a enzima transferase responsável pela formação da cadeia polipeptídica.

Experimentos clínicos e em animais comprovaram a influência de estafilococos e estreptococos patogênicos no desenvolvimento da doença, o que aumenta significativamente a gravidade da infecção.

Em humanos, no local de entrada do patógeno da difteria (garganta, nariz, traquéia, conjuntiva dos olhos, pele, vulva da vagina, superfície da ferida), são formados filmes com um grande número de corinebactérias da difteria e outros micróbios. A exotoxina produzida causa necrose e inflamação diftérica das mucosas ou da pele, quando absorvida, afeta células nervosas, músculo cardíaco e órgãos parenquimatosos, causando intoxicação geral grave;

Mudanças profundas ocorrem no músculo cardíaco, nos vasos sanguíneos, nas glândulas supra-renais, bem como no sistema nervoso central e periférico. Por isso, destacam três pontos de aplicação toxina da difteria no corpo: miocárdio(desenvolvimento de miocardite diftérica tóxica), glândulas supra-renais(queda no tônus ​​​​vascular e na pressão arterial devido à diminuição da produção de adrenalina), sistema nervoso(desenvolvimento de paralisia e paresia).

De acordo com a localização do processo, a difteria da faringe e o crupe da difteria (difteria da laringe), depois a difteria do nariz, são mais frequentemente observadas. A difteria dos olhos, ouvidos, órgãos genitais, pele e feridas é relativamente rara. A difteria da faringe é responsável por mais de 90% de todas as doenças, com a difteria nasal em segundo lugar.

A morte por difteria da laringe pode ser causada por asfixia, asfixia, porque mesmo um pequeno filme diftérico pode bloquear completamente a glote. Na difteria da faringe, a maioria das mortes está associada a danos cardíacos devido à intoxicação.

Imunidade. Na difteria, a imunidade depende principalmente do nível de antitoxina no sangue. Contudo, é impossível excluir um certo papel do complexo antibacteriano associado à fagocitose e à presença de opsoninas, aglutininas, precipitinas e substâncias fixadoras de complemento. A imunidade à difteria é de natureza anti-infecciosa (antitóxica e antibacteriana).

Amostra chique. A presença de imunidade antitóxica antidiftérica pode ser detectada pela reação de Schick. 1/40 Dlm de toxina de cobaia em um volume de 0,2 ml é administrado por via intradérmica a crianças no antebraço. Com uma reação positiva, indicando ausência de imunidade antitóxica, vermelhidão e inchaço com diâmetro de até 2 cm aparecem no local da injeção após 24-48 horas. Uma reação de Schick positiva ocorre na ausência de antitoxina ou de uma pequena quantidade dela. no soro sanguíneo. Uma reação negativa de Schick é, até certo ponto, um indicador de imunidade à difteria.

Devido ao fato de a exotoxina da difteria causar um estado de sensibilização e causar o desenvolvimento de complicações graves em muitas crianças, a reação de Schick anteriormente amplamente utilizada é usada de forma limitada.

Para determinar a quantidade de antitoxinas no sangue, recomenda-se uma reação de hemaglutinação indireta com hemácias sensibilizadas com toxóide diftérico.

Crianças de 1 a 4 anos são mais suscetíveis à difteria. Nos últimos anos, houve um aumento relativo na incidência entre pessoas com 15 anos de idade ou mais.

A transmissão da difteria deixa uma imunidade menos forte do que outras doenças infantis (sarampo, coqueluche). Doenças repetidas da difteria são observadas em 6 a 7% dos casos.

Tratamento. O tratamento para difteria inclui isolamento doente, rigoroso repouso na cama, marcação antecipada antitoxina e correspondente terapia antibiótica. Terapia de suporte, como intubação e ventilação, pode ser necessária para obstrução das vias aéreas.

Pacientes com difteria recebem soro antitóxico em doses de 5.000 a 15.000 UI para gravidade moderada da doença e 30.000 a 50.000 UI para formas graves.

C. diphtheriae é sensível à penicilina, tetraciclina, rifampicina e clindamicina. A eritromicina é preferida à penicilina para o tratamento da difteria na garganta, especialmente no tratamento de portadores. Foram descritas cepas resistentes à eritromicina e à tetraciclina.

A terapia antibiótica não tem efeito sobre a toxina pré-formada (previamente formada), que se espalha rapidamente a partir do local do dano e, se não for neutralizada pela antitoxina, liga-se rapidamente às células do tecido de forma irreversível.

Tratamento) não deve esperar pela confirmação laboratorial se houver forte suspeita clínica, uma vez que a taxa de mortalidade está diretamente relacionada ao período de atraso antes da administração da antitoxina, aumentando de zero a 20% entre o início da doença e o dia 5 da infecção, a média a taxa de letalidade é de 5 a 7%.

Penicilina, tetraciclinas, rifampicina, clindamicina, sulfas e medicamentos cardíacos também são usados.

Os antibióticos são prescritos para tratar os portadores. O uso de tetraciclina, eritromicina em combinação com vitamina C dá bons resultados.

Prevenção. Consiste em diagnóstico precoce, internação imediata, desinfecção completa de instalações e objetos e identificação de portadores.

Prevenção específica realizada por imunização ativa. Existem várias vacinas utilizadas para a prevenção específica da difteria: 1) toxóide diftérico adsorvido (toxóide AD); 2) toxóide diftérico-tétano adsorvido (toxóide ADS); 3) vacina adsorvida contra coqueluche-difteria-tétano (vacina DTP). Todos esses medicamentos são usados ​​de acordo com instruções ou diretrizes.

Deve-se notar que nem todas as crianças imunizadas adquirem resistência à difteria. Em média, 5-10% deles permanecem suscetíveis ou refratários, ou seja, incapaz de formar anticorpos após a imunização. Esta condição é resultado de tolerância imunológica, agamaglobulinemia ou hipogamaglobulinemia.

Anteriormente, a difteria era uma doença terrível entre as crianças. Na Rússia em 1886-1912. Mais de 250.000 pessoas adoecem todos os anos. A mortalidade foi muito elevada, 12-30%.

Graças à introdução da imunização obrigatória contra a difteria, grandes avanços foram feitos na luta contra esta infecção. A incidência de difteria em 1975 em comparação com 1913 diminuiu para casos únicos, e a taxa de mortalidade por difteria diminuiu mais de 100 vezes.

No entanto, actualmente, a difteria voltou a ser uma infecção relevante para os países da ex-URSS, incluindo a Ucrânia.

Corynebacterium diphtheriae foi descoberto e isolado em cultura pura há 100 anos. Seu significado etiológico final na ocorrência da difteria foi confirmado vários anos depois, quando foi obtida uma toxina específica que causou a morte de animais com fenômenos semelhantes aos observados em pacientes com difteria. Corynebacterium diphtheriae pertence ao gênero Corynebacterium, um grupo de bactérias corinefromas. Corynebacterium diphtheriae são bastonetes retos ou ligeiramente curvados com extremidades alargadas ou pontiagudas. A divisão em fratura e divisão fornece um arranjo característico na forma de um numeral romano V ou dedos abertos, mas bastões localizados individualmente são frequentemente encontrados em traços. Grandes acúmulos deles, que ocorrem em esfregaços preparados a partir de muco da garganta, nariz e secreção de feridas, têm caráter semelhante a feltro. O comprimento médio de suas hastes é de 1 a 8 mícrons, largura - 0,3/0,8 mícrons. São imóveis e não formam esporos ou cápsulas. Corynebacterium diphtheriae é um anaeróbio facultativo. Os bacilos da difteria são resistentes à secagem. A uma temperatura de 60 °C em culturas puras são destruídos dentro de 45-60 minutos. Em produtos patológicos, ou seja, na presença de proteção protéica, podem permanecer viáveis ​​por uma hora a uma temperatura de 90°C. As baixas temperaturas não têm um efeito prejudicial sobre os bacilos da difteria. Em desinfetantes de concentração normal, eles morrem rapidamente.

É necessário observar o polimorfismo extremamente grande dos bacilos da difteria, que se manifesta em alterações em sua espessura e forma (inchado, em forma de frasco, segmentado, filamentoso, ramificado nos espessamentos terminais, e às vezes na parte central, após 12 horas). do crescimento da cultura, são encontrados grãos de Babesh com coloração especial de Ernst, que são acúmulos de volutina. Há evidências de que a volutina é um polifosfato inorgânico de cadeia longa. M.A. Peshkov sugere sua natureza metafosfato. A. A. Imshanetsky acredita que a volutina é um subproduto dos processos metabólicos. Sabe-se que o fósforo é necessário para a formação dos grãos. Também existem suposições sobre a necessidade de manganês e zinco para esse processo.

Os grãos de volutina são encontrados em culturas de um dia e, então, o número de bactérias com a presença de grãos diminui. O citoplasma também contém nucleotídeos, membranas intracitoplasmáticas - lisossomos, vacúolos.

As bactérias são coradas com todos os corantes de anilina. Quando corados pelo método de Gram, são positivos. O método Neisser é usado para corar grãos de volutina. Quando corados por este método, os grãos de volutina, que têm alta afinidade pelo azul de metileno, são persistentemente corados em azul, e do corpo da bactéria, com coloração adicional com crisoidina ou bismarckbraun, o azul de metileno é deslocado.

O agente causador da difteria é um heterótrofo, ou seja, pertence a um grupo de bactérias que necessitam de substâncias orgânicas para seu crescimento. Os meios utilizados para cultivo devem conter aminoácidos como fonte de carbono e nitrogênio - alanina, cistina, metionina, valina, etc. Nesse sentido, os meios eletivos para cultivo são meios contendo proteína animal: sangue, soro, líquido ascítico. Com base nisso, foi criado o ambiente Leffler clássico e, em seguida, os ambientes Clauberg, Tyndall e de acumulação.

No meio de Leffler, as colônias do bacilo da difteria apresentam superfície brilhante e úmida, bordas lisas e cor amarelada. Após vários dias de crescimento, aparecem estrias radiais das colônias e linhas concêntricas fracamente definidas. O diâmetro das colônias chega a 4 mm. Os primeiros sinais de crescimento aparecem após 6 horas em termostato a 36-38 °C. O crescimento é claramente visível 18 horas após a semeadura. O valor de pH ideal para o crescimento do bacilo da difteria é 7,6. O Corynebacterium diphtheria é muitas vezes difícil de distinguir de outras espécies de corynebacterium. Para determinar as espécies, é utilizado um complexo de características culturais e bioquímicas.

O tipo de Corynebacterium diphtheria também é heterogêneo; é dividido em 3 tipos culturais e bioquímicos gravis, mitis, intermedins, em duas variedades - toxigênica e não toxigênica, vários tipos sorológicos e fagotipos.

Atualmente, dois tipos bioquímicos culturais circulam na maioria dos territórios - gravis e mitis. O tipo intermedins, que costumava ser amplamente distinguido, raramente foi encontrado recentemente. A diferenciação mais clara dos tipos pode ser feita pelo formato das colônias quando a cultura é cultivada em ágar sangue com adição de telurito. Colônias do tipo gravis atingem 1-2 mm de diâmetro após 48-72 horas, apresentam bordas onduladas, estrias radiais e centro plano. Sua aparência geralmente é comparada a uma flor de margarida. As colônias são foscas devido à capacidade da bactéria de reduzir o telurito, que então se combina com o sulfeto de hidrogênio resultante, de cor cinza-escura. Ao crescer em caldo, as culturas do tipo gravis formam uma película esfarelada na superfície. Quando semeados em meio Hiss com adição de soro de leite, eles decompõem polissacarídeos - amido, dextrina, glicogênio com formação de ácido.

Culturas do tipo mitis em ágar sangue telurito crescem como colônias redondas, ligeiramente convexas, de bordas lisas e pretas foscas. Quando cultivados em caldo, produzem turbidez e sedimentos uniformes. Eles não decompõem o amido, a dextrina e o glicogênio.

Nos esfregaços, os bastonetes do tipo gravis costumam ser curtos e os do tipo mitis são mais finos e longos.

Um estudo comparativo de microscopia eletrônica de bacilos da difteria de vários tipos bioquímicos mostrou a presença de uma parede celular de três camadas nos tipos gravis e mitis. A casca do tipo intermedins tem duas camadas e é quase 3 vezes mais espessa. Entre o citoplasma e a membrana existem espaços preenchidos por grãos, que podem estar relacionados à exotoxina. São visíveis as estrias oblíquas das bactérias, criadas pelas paredes divisórias entre as células-filhas. O aparelho cromossômico, nos tipos gravis e mitis, é representado por grãos comuns com vacúolos no tipo intermedins, está distribuído por todo o citoplasma; Um microscópio eletrônico revela uma membrana multicamadas, cuja presença explica por que os bacilos da difteria às vezes são gram-negativos.

As colônias de bactérias da difteria vêm nas formas S, R e SR, sendo esta última considerada intermediária. N. Morton acredita que as colônias de formas S são características do tipo mitis, e as formas SR são características do tipo gravis. Além dessas formas principais, existem colônias mucóides - formas M, colônias anãs - formas D e colônias gonidiais - formas L. Todos estes são considerados formas de variabilidade dissociativa.

As bactérias da difteria devem ser diferenciadas dos difteróides e do bacilo da pseudodifteria.

Um grande número de estudos é dedicado à variabilidade do bacilo da difteria. A possibilidade de ocorrência de formas atípicas em condições laboratoriais foi confirmada por estudos epidemiológicos.

A variabilidade bioquímica, morfológica e físico-química das bactérias da difteria, reconhecida por um grande número de pesquisadores, em alguns casos complica o diagnóstico bacteriológico e obriga a um estudo abrangente das culturas.

Dividimos todas as culturas isoladas sob diferentes condições epidemiológicas em 8 grupos; eles incluíram todas as variantes morfológicas possíveis dos representantes de corynebacterium de interesse para nós:

1º grupo - bastões curtos, com cerca de 2 mícrons de comprimento, sem grãos;

2º grupo - bastonetes curtos, com cerca de 2 mícrons de comprimento, mas ocasionalmente com grãos;

3º grupo - bastonetes de tamanho médio, 3-6 mícrons de comprimento, 0,3-0,8 mícrons de largura, sem granularidade característica;

4º grupo - bastonetes de tamanho médio, 3-7 mícrons de comprimento, 0,3-0,8 mícrons de largura, levemente curvados, ocasionalmente com grãos;

5º grupo - bastonetes de tamanho médio, 3-6 mícrons de comprimento, 0,3-0,8 mícrons de largura, levemente curvados, granulares;

6º grupo - hastes longas, com 6-8 mícrons de comprimento e 0,3-0,6 mícrons de largura, levemente curvadas, ocasionalmente com grãos;

7º grupo - hastes longas, com 6 a 8 mícrons de comprimento e 0,3 a 0,8 mícrons de largura, geralmente curvas, sem grãos;

Grupo 8 - bastões curtos e ásperos, com cerca de 2 mícrons de comprimento e cerca de 1 mícron de largura, sem grãos.

A localização dos bastonetes não era levada em consideração na sua atribuição aos grupos, mas geralmente o arranjo característico correspondia à morfologia.

Nos 1º, 2º, 3º e 8º grupos, que correspondiam em morfologia aos bastonetes de Hoffmann, o arranjo era grupal, paralelo ou em forma de indivíduos únicos, nos 4º, 5º e 6º grupos, que correspondiam principalmente em morfologia à difteria verdadeira bactérias, bastonetes localizados em ângulo ou na forma de indivíduos únicos. No grupo 7, as hastes estavam mais frequentemente dispostas aleatoriamente, entrelaçando-se entre si. No 8º grupo, os bastonetes estavam localizados na forma de indivíduos únicos.

Das 428 culturas estudadas, 111, pela totalidade de suas características, deveriam ter sido classificadas como difteria verdadeira, 209 eram culturas de bacilos de Hoffmann e 108 constituíam um grupo de culturas atípicas. Em culturas próximas à difteria, a atipicidade se manifestou na diminuição da atividade bioquímica, às vezes na decomposição da uréia; em culturas morfologicamente próximas aos bastonetes de Hoffmann, eles retêm teste de cisteína positivo e capacidade de decompor um dos açúcares.

Das 111 culturas de difteria, 81 culturas (73%) eram morfologicamente típicas, 28 culturas (27%) tinham a morfologia de bastonetes de Hoffmann. Das 111 culturas de difteria, havia 20 culturas do tipo gravis, e destas, apenas 9 foram atribuídas ao 1º e 2º grupos morfológicos.

As culturas que foram classificadas com base em uma combinação de características como culturas de bacilo de Hoffmann apresentaram a morfologia de culturas típicas de difteria em 20% dos casos.
25% das cepas estudadas foram classificadas como culturas atípicas; sua morfologia correspondia tanto a bacilos de difteria quanto a bacilos de Hoffmann;

Assim, as propriedades bioquímicas e morfológicas das culturas nem sempre coincidem, e a atipicidade bioquímica, assim como a morfológica, é mais frequentemente observada em culturas isoladas durante um período de diminuição da incidência e, portanto, diminuição do nível de transporte.

É necessário notar a diminuição geral da atividade bioquímica das culturas nos últimos 10-15 anos. Um indicador disso é a fermentação retardada dos açúcares, que às vezes ocorre no 5º ao 6º dia, bem como as diferentes atividades bioquímicas das colônias de uma mesma cultura.

A identificação bioquímica de culturas puras isoladas em diferentes condições epidemiológicas mostra que embora a morfologia e as propriedades bioquímicas muitas vezes não coincidam, o princípio geral de distribuição das culturas, estabelecido a partir de dados morfológicos, não muda. Tanto na distribuição das culturas de acordo com dados morfológicos e bioquímicos, como na sua identificação completa com a inclusão de reações sorológicas, o princípio de distribuição permanece o mesmo: as culturas atípicas são mais comuns durante o período de prosperidade epidêmica, os bacilos de Hoffmann são mais frequentemente detectados durante o período de prosperidade epidêmica. período de problemas epidêmicos e são semeados por mais tempo do que a verdadeira difteria.

O estudo das propriedades toxigênicas de culturas isoladas em meios nutrientes sólidos mostrou que mesmo durante o período de prosperidade epidêmica há um número suficiente de portadores de bacilos toxigênicos da difteria. Deve-se notar que as propriedades toxigênicas nem sempre podem ser detectadas, mesmo em culturas isoladas de pacientes. Isto indica a necessidade de melhorar os métodos aplicados para determinar a toxigenicidade das culturas.

Os resultados da reação de aglutinação de culturas atípicas isoladas em diferentes condições epidemiológicas mostraram a presença dos mesmos padrões de propriedades sorológicas que observamos ao estudar a morfologia e bioquímica das culturas. A atipicidade das culturas isoladas numa área próspera, segundo dados serológicos, era mais profunda do que em áreas desfavorecidas. Assim, numa área próspera, 26% das culturas atípicas apresentaram reação de aglutinação positiva, em áreas desfavoráveis ​​- 19%.

Uma das principais propriedades do bacilo da difteria é a capacidade de formar toxinas. A toxinogênese do Corynebacterium diphtheria é determinada pelo gene contido no profago, portanto, o principal meio de agressão - a formação da toxina - não está associado ao cromossomo bacteriano;

A toxina diftérica é uma proteína com peso molecular de 6.200 daltons. A força da toxina é determinada através da realização de testes intradérmicos para a presença de ação necrótica e o efeito em animais suscetíveis (efeito letal). A força da toxina é medida pela dose letal mínima, que é a menor quantidade de toxina que pode causar a morte de uma cobaia pesando 250 g no 4-5º dia quando administrada por via intraperitoneal. A toxina possui propriedades antigênicas que são preservadas quando tratada com formaldeído, que retira suas propriedades tóxicas. Isso possibilitou sua utilização no preparo de um medicamento profilático.

A molécula da toxina é composta por dois fragmentos, um dos quais é termoestável e possui atividade enzimática, e o segundo é termolábil e desempenha função protetora. Foi comprovada a síntese intracelular da toxina com sua liberação através dos túbulos da parede celular. A síntese da toxina ocorre quando o micróbio é cultivado em meio líquido - caldo de carne-peptona com adição de glicose, maltose e fatores de crescimento em pH 7,8-8,0.

Segundo dados recentes, a toxina diftérica é um produto de origem viral. Como confirmação, I. V. Chistyakova apresenta a capacidade das corinebactérias não toxigênicas de se transformarem em toxigênicas sob a influência de fagos. A possibilidade de conversão de culturas não toxigênicas em toxigênicas foi confirmada em experimentos em culturas unicelulares. O fenômeno descrito é denominado conversão lisogênica. Utilizando vírus temperados obtidos de cepas toxigênicas de gravis, foi possível converter a variante não toxigênica de Corynebacterium diphtheria gravis em uma variante toxigênica.

E.V. Bakulina, M.D. Krylova sugeriu que a conversão focal pode ser importante no processo epidêmico. Nesse sentido, foi iniciado um estudo sobre seu papel na formação de cepas toxigênicas de Corynebacterium diphtheria na natureza. A possibilidade de conversão toxigênica foi demonstrada não apenas em sistemas fago-bactérias, mas também em condições naturais. Mas entre as culturas locais, esse processo, segundo vários pesquisadores, está longe de ser comum. As razões para isso são provavelmente a falta de produtores de fagos temperados, a sensibilidade dos fagos das cepas locais é diferente das cepas de referência e, portanto, não podem ser receptoras de fagos conversores de espectro de ação conhecido.

Apenas em parte da população microbiana foi possível converter as propriedades toxigênicas dos bacilos da difteria sob a influência de fagos estafilocócicos e estreptocócicos. Em trabalhos recentes, a questão da conversão de fagos no processo epidêmico recebe uma avaliação ainda mais contida. Acredita-se que os corinefagos tox+ não desempenhem um papel independente no processo epidêmico da difteria. Portadores de bacilos não toxigênicos podem ser infectados pelo fago tox+ somente junto com uma cepa toxigênica, e os fagos estafilocócicos não são capazes de converter corinebactérias não toxigênicas. Para realizar a conversão no sentido da toxigenicidade no corpo humano, aparentemente é necessário haver contato próximo entre um carreador que possui um fago conversor e um carreador que secreta uma cepa que é lisossensível a esse fago. Além da capacidade de formar toxinas, a bactéria da difteria possui fatores de patogenicidade como hialuronidase, neuraminidase, desoxirribonuclease, catalase, esterase e peroxidase. O estudo dos produtos metabólicos extracelulares não mostrou diferenças entre corinebactérias diftéricas toxigênicas e não toxigênicas.

Atualmente, para tipagem intraespecífica de Corynebacterium diphtheria, além do método bioquímico descrito acima, podem ser utilizados métodos sorológicos e fágicos.

A presença de tipos sorológicos se deve a antígenos específicos do tipo, estáveis ​​ao calor, de superfície e termolábeis.

Existem vários esquemas de tipagem sorológica. Em nosso país, utilizamos o esquema proposto por V. S. Suslova e M. V. Pelevina, mas não pode fornecer a classificação de todas as cepas não toxigênicas. O número de tipos sorológicos está crescendo. I. Ewing estabeleceu a presença de 4 tipos sorológicos - A, B, C e D; D. Robinson e A. Peeney 5 tipos - I, II, III, IV e V. L. P. Delyagina identificaram mais 2 tipos sorológicos. Acredita-se que o número de tipos sorológicos seja muito maior, principalmente devido ao tipo mitis. A partir dos limitados dados da literatura disponível, não foram estabelecidos padrões de isolamento de um ou outro sorotipo em diversas formas do processo infeccioso e em diversas situações epidemiológicas. Junto com dados sobre as diferentes agressividades de culturas pertencentes a diferentes tipos sorológicos, há relatos que rejeitam a ligação do tipo sorológico com a patogenicidade das culturas.

É característico que diferentes tipos sorológicos ocorram em diferentes áreas. A tipagem sorológica pode ser utilizada para análise epidemiológica.

Em condições de morbidade esporádica, número limitado de portadores, quando a busca pela fonte de infecção é muito mais difícil, o método de fagotipagem torna-se importante, possibilitando a subdivisão das corinebactérias em variantes sorológicas e culturais. A marcação pode ser realizada de acordo com as propriedades dos fagos isolados de uma cultura e de acordo com a sensibilidade da cultura a bacteriófagos específicos. O esquema mais utilizado é o proposto por R. Saragea e A. Maximesco. Ele permite rotular cepas toxigênicas e não toxigênicas de todas as variantes culturais. Com a ajuda de 22 fagos típicos, as culturas podem ser divididas em 3 grupos, nos quais são combinadas 21 variantes de fagos: 1º grupo - cepas toxigênicas e não toxigênicas do tipo mitis (variantes de fagos I, la, II, III); 2º - cepas toxigênicas e não toxigênicas do tipo intermedinas e gravis não toxigênicas (fagos variantes IV, V, VI, VII); 13 variantes de fagos (de VIII a XIX) foram incluídas no 3º grupo, que reunia cepas toxigênicas gravis.

O esquema foi testado num grande número de estirpes isoladas na Roménia e obtidas em museus de 14 países. A fagotipagem foi positiva em 62% das cepas do tipo gravis foram marcadas com especial sucesso; Entre estes últimos, o pertencimento a uma das variantes do fago foi estabelecido em 93%. As reações específicas com fagos típicos em cepas toxigênicas do tipo gravis de acordo com o esquema desses autores baseiam-se na infecção das cepas por vários vírus.

Em nosso país, as pesquisas na área de fagotipagem foram realizadas por M. D. Krylova. O autor desenvolveu um esquema de marcação de fagos baseado no princípio proposto por Williams e Rippon para tipagem de estafilococos plasmacoagulantes: a variante do fago foi designada pelo nome do tipo de fago que o lisava em uma diluição de teste. Fagos e variantes de fagos no esquema de M.D. Krylova são designados por letras do alfabeto latino: letras maiúsculas - fagos que proporcionam lise confluente e semiconfluente, letras minúsculas - lise na forma de placas. Com base nisso, foram desenvolvidos um esquema de fagotipagem modificado para corinebactérias não toxigênicas da variante gravis e um esquema de fagotipagem para corinebactérias toxigênicas da variante gravis.

A difteria é considerada uma das doenças mais perigosas; o agente causador é chamado de espécie corynebacterium (spp), uma bactéria em forma de bastonete.

O corpo de uma pessoa saudável contém uma pequena quantidade de corinebactérias no intestino grosso. Com alterações patológicas, infecção adicional, a atividade vital dos microrganismos leva à doença.

A bactéria é dividida em vários tipos, cada um deles único e com características específicas. Dependendo da variedade, os microrganismos infectam a pele e afetam o funcionamento dos órgãos internos. Pessoas com sistema imunológico fraco estão em risco. A bacteremia começará a se desenvolver quando as bactérias infectarem cateteres abdominais e venosos.

Se homens ou mulheres tiverem corinebactérias, há uma grande probabilidade de artrite séptica e pneumonia.

Mobiluncus

Existem doenças infecciosas ocultas que envolvem bactérias perigosas, como mobiluncus spp e corynebacterium spp, presentes no DNA. A presença de bactérias perigosas na urina, sêmen ou esfregaço levará a processos inflamatórios. Nos homens, desenvolve-se patologia do trato urogenital, levando a orquiepididimite, não gonocócica e outras.

Freqüentemente, um microrganismo móvel é encontrado no corrimento vaginal feminino, tanto bacteriano quanto saudável. Se o mobiluncus se acumular na área retal, pode ocorrer contaminação da vagina e infecção durante o sexo anal.

Para diagnosticar a presença de bactérias, vários métodos são utilizados:

• Reação em cadeia da polimerase;
• Exame bacterioscópico.
• Métodos sorológicos.

Você só pode ser infectado pela doença através do contato com uma pessoa doente. Pessoas que já tiveram a doença também representam um perigo para outras pessoas, pois possuem a bactéria causadora em seus corpos.

As bactérias são transmitidas por gotículas transportadas pelo ar ou depositadas em utensílios domésticos: utensílios, roupas de cama, roupas, artigos de higiene pessoal, etc. Se uma pessoa infectada teve contato com alimentos, eles também se tornam causa de infecção.

Pessoas que entram em contato com pacientes que sofrem de difteria aguda aumentam o risco de sua própria infecção através de gotículas transportadas pelo ar.

A difteria costuma ser assintomática por muito tempo, sem hospitalização, o paciente pode infectar muitas pessoas saudáveis ​​ao seu redor; O paciente recuperado é portador por mais 3–8 semanas e, às vezes, o período aumenta para 3–5 meses.

Tratamento

Para evitar que as corinebactérias causem doenças dos órgãos reprodutivos e do sistema urinário, antes de planejar uma gravidez, dois parceiros precisam ser testados quanto à presença da bactéria.

Se os testes mostrarem um resultado positivo, os médicos prescrevem um tratamento com antibióticos.É proibida a automedicação; é necessário um regime de tratamento claramente selecionado para cada paciente.

Homens que vivem em climas quentes e secos estão predispostos ao eritrasma, patologia relacionada à dermatite cutânea. A doença se manifesta na região das dobras do corpo, com sintomas semelhantes aos de dermatite ou candidíase (segundo nome -).

Quando uma mulher é diagnosticada com corinebactérias, é importante uma determinação precisa da quantidade. Para casos moderados, um curso de medicação é suficiente. Se o volume ultrapassar a norma, são realizados estudos adicionais para identificar outras patologias infecciosas vaginais. Se alguma for detectada, as doenças associadas são tratadas primeiro.

Ao prescrever o tratamento, a mulher deve adiar a concepção. Quando pelo menos 30 dias se passaram após a recuperação completa, você pode pensar em gravidez.

O agente causador da difteria - Corynebacterium diphtheriae e um grande grupo de microrganismos do gênero Corynebacterium com propriedades morfológicas e bioquímicas semelhantes são chamados bactérias corineformes ou difteróides. Eles são representados por bastonetes gram-positivos, imóveis, muitas vezes com espessamentos nas extremidades, lembrando uma clava (corina - clava). Os difteróides estão amplamente distribuídos no solo, no ar e em produtos alimentícios (leite). Entre eles, podem ser distinguidos três grupos ecológicos:

• - patógenos de humanos e animais;
• - patógenos de plantas;
• - corinebactérias não patogênicas.

Muitas espécies de difteróides são habitantes normais da pele, membranas mucosas da faringe, nasofaringe, olhos, trato respiratório, uretra e órgãos genitais.

Difteria.

A difteria é uma doença infecciosa aguda predominantemente infantil, caracterizada por intoxicação corpo toxina diftérica e característico inflamação fibrinosa (diftérica) na localização do patógeno (filme phther).

Propriedades morfológicas e tintoriais. C.diphtheriae são bastonetes polimórficos finos com extremidades em forma de taco, muitas vezes contendo inclusões volutinosas, reveladas por coloração com azul de metileno ou Neisser. Neste último, os palitos são amarelo-palha, os grãos de volutina (polimetafosfato) são marrom-escuros. Nas culturas, os palitos formam um ângulo entre si (características de divisão), formando várias figuras - dedos abertos, V, Y, L, etc. Possuem microcápsula e fímbrias que facilitam a adesão ao epitélio das mucosas.

Propriedades culturais. As bactérias da raiz da difteria não crescem em meios simples. Eles requerem meios com sangue ou soro sanguíneo (meios de Leffler, Roux), nos quais o crescimento é observado após 10-12 horas, período durante o qual a microflora acompanhante (amostras contaminantes) não tem tempo para se desenvolver completamente.

Mais ideal meio telurito e telurito - ágar chocolate McLeod. Altas concentrações de telurito de potássio nesses ambientes inibem o crescimento da flora estranha. Corynebacterium diphtheria reduz o telurito a telúrio metálico, o que confere às suas colônias uma cor cinza escuro ou preta.

Este patógeno produz biótipos - gravis, mitis, intermedius, diferindo em morfologia, propriedades antigênicas e bioquímicas e na gravidade das doenças humanas. O tipo gravis geralmente causa surtos e um curso mais grave, e é caracterizado por colônias grandes em formato de margarida com bordas irregulares e estrias radiais (forma R). O tipo mitis causa doenças esporádicas predominantemente leves e forma colônias pequenas e lisas com bordas lisas (formas S) em meio denso. O tipo intermedius ocupa uma posição intermediária e forma em meios densos formas RS de características transitórias, mas ainda menores. Em meios líquidos eles causam turvação do meio e formam um precipitado quebradiço.

Propriedades bioquímicas. Corynebacterium diphtheria fermenta glicose e maltose. Falta de atividade em relação sacarose e uréia - uma importante característica diferencial entre os difteróides. Possuir cistenase atividade (decompor a cisteína) - teste de Pisu.

Estrutura antigênica. Os antígenos O e K são isolados. Os componentes polissacarídeos dos antígenos O da parede celular possuem propriedades intergenéricas, causando reações cruzadas inespecíficas com micobactérias e actinomicetos (nocardia).

Os antígenos K de superfície são proteínas capsulares específicas da espécie e imunogênicas. Existem 11 sorotipos. Os sorotipos 1-5 e 7 pertencem ao biovar gravis. A serotipagem das culturas é realizada na República da Arménia com soros de diagnóstico para os serovares correspondentes e soro aglutinante poligrupo.

No diagnóstico sorológico em humanos, o RPGA, que é mais sensível que a AR, é frequentemente utilizado. Atualmente, o ELISA também é utilizado. Muitas cepas de corinebactérias diftéricas (especialmente as não toxigênicas) apresentam aglutinabilidade e poliaglutinabilidade espontâneas.

Fatores de patogenicidade. Cepas toxigênicas do agente causador da difteria produzem fortes exotoxina(proteína imunogênica altamente tóxica, lábil ao calor). Cepas não toxigênicas não causam doenças.

A toxina causa bloqueio irreversível do alongamento da cadeia polipeptídica, ou seja, qualquer síntese proteica. Principalmente certos sistemas são afetados: simpático-adrenal, coração e vasos sanguíneos, nervos periféricos. Existem distúrbios estruturais e funcionais do miocárdio, desmielinização das fibras nervosas, levando à paralisia e paresia.

A capacidade de formar toxinas é exibida apenas por cepas lisogênicas infectadas com um bacteriófago (fago beta) portador do gene tox, que codifica a estrutura da toxina (isto é, portador de genes profágicos temperados em seu cromossomo). A fagotipagem é usada para diferenciar cepas de Corynebacterium diphtheria.

Epidemiologia. O reservatório é uma pessoa (paciente, convalescente, portador de bactérias). A principal via de transmissão são as gotículas transportadas pelo ar, a sazonalidade é outono-inverno. O patógeno fica bem preservado em baixas temperaturas, em estado seco (saliva, muco, poeira).

Características clínicas e patogenéticas. O patógeno no local da penetração causa inflamação fibrinosa com formação de um filme fibrinoso fortemente fundido aos tecidos. O efeito da exotoxina é essencial na patologia causada (descrita na seção “fatores de patogenicidade”). De acordo com a localização, a difteria distingue-se da orofaringe (na maioria das vezes), trato respiratório, nariz e localização rara (olhos, genitália externa, pele, superfície da ferida). A difteria da faringe pode causar crupe e asfixia.

Diagnóstico laboratorial. O principal método diagnóstico é bacteriológico. Usado para identificar pacientes, portadores de bactérias e contatos. Swabs estéreis são usados ​​para coletar material para microscopia e cultura - muco da garganta e do nariz, filmes das amígdalas e outros locais suspeitos de lesões diftéricas.

O patógeno é isolado por inoculação em meio telurito seletivo e ágar sangue. Na membrana mucosa do olho, C. xerose é frequentemente detectado (uma possível causa de conjuntivite crônica), na nasofaringe - C. pseudodiphtheriticum (bacilo de Hofmann) e outros difteróides também são detectados.

Para diferenciar o agente causador da difteria dos difteróides, indicadores como a capacidade de reduzir a telurite e formar colônias escuras, o teste de Pisa, a fermentação de carboidratos (glicose, maltose, sacarose) e uréia, e a capacidade de crescer em condições anaeróbicas (característica do agente causador da difteria).

Uma etapa obrigatória é determinar a toxigenicidade da cultura. Os métodos mais comuns são os bioensaios em cobaias e a reação de precipitação em ágar. ELISA com antitoxina, sondas genéticas e PCR também são utilizados para detectar o fragmento A do gene tox.

Tratamento. São utilizados soro antitóxico contra difteria, antibióticos e sulfonamidas.

Imunidade pós-infecciosa- persistente, predominantemente antitóxico. Para determinar quantitativamente o nível de imunidade antitóxica, anteriormente era utilizado o teste de Schick (injeção intradérmica de uma toxina), agora - RPGA com diagnóstico eritrocitário obtido pela sensibilização dos eritrócitos com toxóide diftérico.

Prevenção. A base é a imunização em massa da população. São utilizados vários medicamentos contendo toxóide diftérico - DTP, ADS, ADS-M, AD e AD-M.