Análise de esfregaço de sangue periférico. Esfregaço de sangue periférico: eritrócitos normocrômicos de tamanho normal, sem esquistócitos, degmócitos (células “mordidas”) ou esferócitos. Análise de sedimento urinário
Taxa de hemossedimentação (VHS):
A velocidade normal de hemossedimentação (VHS) é de 4-10 mm/h para homens e 4-15 mm/h para mulheres. Depende do número de glóbulos vermelhos, do seu diâmetro e volume, da viscosidade do sangue, do conteúdo de frações proteicas, ácidos biliares e pigmentos no plasma. Quando a temperatura da sala onde é realizada a pesquisa diminui (menos de 20 °C), a VHS diminui e, quando aumenta, aumenta.Decodificação ESR:
A velocidade de hemossedimentação não é um indicador específico de nenhuma doença em particular, porém, uma aceleração da VHS, via de regra, indica o aparecimento de um processo patológico no organismo de natureza infeccioso-inflamatória (pneumonia, abscesso pulmonar, peritonite, pielonefrite , etc.).etc.), natureza infeccioso-alérgica (reumatismo, colagenose), natureza tumoral (câncer, sarcoma, hemoblastose) e natureza anêmica.
Uma aceleração particularmente pronunciada da VHS (60-80 mm/h) é característica das hemoblastoses paraproteinêmicas (mieloma, doença de Waldenström). Uma desaceleração da VHS é observada com policitemia (aumento no número de glóbulos vermelhos) em pacientes com eritremia, pneumonia crônica, úlcera péptica do estômago e bulbo duodenal, etc., e com espessamento significativo do sangue. Uma característica da infância é a diminuição da VHS nas crianças na primeira semana de vida.
Decodificando o conteúdo de hemoglobina:
A diminuição da quantidade de hemoglobina no sangue é o principal sintoma laboratorial da anemia de diversas etiologias.O conteúdo de hemoglobina varia amplamente dependendo do grau da anemia e da sua forma. Assim, na anemia ferropriva, a diminuição da hemoglobina geralmente varia de 85-110 g/l. Uma diminuição acentuada no nível de hemoglobina é característica da perda aguda de sangue, anemia hipoplásica, anemia hemolítica na fase de crise (45-80 g/l), um aumento na concentração de hemoglobina (180-210 g/l) é observado com eritremia (para cujo diagnóstico é importante estudar o número de eritrócitos, leucócitos, plaquetas, que aumentam nesta doença), insuficiência cardíaca pulmonar e espessamento sanguíneo.
Frações de hemoglobina:
Uma pessoa saudável possui três tipos principais de hemoglobina: primitiva - P, fetal - F, adulta - A. A hemoglobina tipo P predomina no feto até os três meses de idade, no recém-nascido a hemoglobina é representada por 20% do tipo F e, respectivamente, 80% do tipo A. Em uma criança de 4 a 5 meses, a hemoglobina F é de 1 a 2% (como em um adulto).Explicação:
Um aumento nos valores de hemoglobina F é um importante critério diagnóstico para talassemia B, mas também ocorre em outras anemias hemolíticas, anemia hipoplásica e leucemia.Contagem de glóbulos vermelhos, normal:
O número normal de glóbulos vermelhos nos homens é 4,0-5,0 x 10 12/l, nas mulheres 3,5-4,5 x 10 12/l.Explicação:
Um aumento no número de glóbulos vermelhos (eritrocitose) é observado com eritremia (policitemia vera de Vaquez), em pacientes com função respiratória externa insuficiente, por exemplo: com pneumonia crônica, pneumosclerose, síndrome de Haman-Rich, etc., bem como em pessoas que vivem em climas de alta altitude.Uma diminuição no número de glóbulos vermelhos (eritrocitopenia) ocorre mais frequentemente com anemia como resultado de perda de sangue (anemia pós-hemorrágica), anemia por deficiência (deficiência de ferro, deficiência de vitamina B12-folato, etc.), anemia devido ao aumento da degradação de glóbulos vermelhos (hemolíticos).
Índice de cores:
O indicador colorido reflete o conteúdo médio de hemoglobina em um glóbulo vermelho.Interpretação do indicador de cor:
O indicador colorido determina qual é o conteúdo de hemoglobina nas hemácias - normal, baixo ou alto, o que é de grande importância diagnóstica para estabelecer a natureza da anemia (normocrômica, hipocrômica, hipercrômica). Com saturação normal dos glóbulos vermelhos com hemoglobina, o índice de cor (CI) é igual a um. No recém-nascido, a PC é em média 1,2, no 2º-3º dia de vida aumenta para 1,3, depois diminui, atingindo valores normais para um adulto no terceiro mês de vida (0,85-1,15).Um índice de cor inferior a 0,85 é típico para anemia hipocrômica (anemia por deficiência de ferro, etc.), para anemia normocrômica varia de 0,85 a 1,15, e a anemia hipercrômica é caracterizada por uma PC superior a 1,15 (anemia por deficiência de vitamina B12-folato , anemia Addison-Beermer).
No diagnóstico da anemia, um papel importante é desempenhado pelo exame microscópico dos glóbulos vermelhos, que determina a sua natureza e é decidido com base nas alterações no tamanho, forma, cor dos glóbulos vermelhos e na presença de várias inclusões nos mesmos.
Diâmetro dos glóbulos vermelhos:
O diâmetro dos glóbulos vermelhos normalmente é em média de 7,5 mícrons.Explicação:
Uma mudança no tamanho dos glóbulos vermelhos individuais é chamada de anisocitose, que é um sinal precoce de anemia. Contudo, em recém-nascidos, a anisocitose ocorre normalmente durante os primeiros 2-3 meses de vida. Os glóbulos vermelhos com diâmetro superior a 9 mícrons são chamados de macrócitos, e os de menos de 6 mícrons são chamados de micrócitos. A macrocitose é observada com aumento da regeneração sanguínea, deficiência de vitamina B12, etc., microcitose - com perda crônica de sangue, com deficiência de ferro.Glóbulos vermelhos:
Os glóbulos vermelhos são normalmente em forma de disco.Decodificando glóbulos vermelhos:
Quando os glóbulos vermelhos perdem a forma normal de disco e se tornam esferoidais, alongados e fusiformes, essas alterações no formato dos glóbulos vermelhos são chamadas de poiquilocitose, que indica um curso mais grave da doença e ocorre mais frequentemente nas anemias hemolíticas. . Na anemia hemolítica congênita de Minkowski-Choffard, os glóbulos vermelhos têm o formato de pequenas bolas (microesferócitos), na talassemia, são encontrados glóbulos vermelhos de formato oval (ovalócitos), na anemia falciforme, glóbulos vermelhos em forma de foice (drepanócitos). ).Coloração de glóbulos vermelhos:
A cor dos glóbulos vermelhos depende da quantidade de hemoglobina que contêm e do tamanho dos glóbulos vermelhos.Explicação:
Os eritrócitos com coloração normal são chamados normocrômicos, aqueles com coloração menos intensa são chamados hipocrômicos e aqueles com coloração mais intensa são chamados hipercrômicos. A diferença na cor dos glóbulos vermelhos individuais é chamada de anisocromia. A hipocromia ocorre na deficiência de ferro, na anemia pós-hemorrágica crônica, na hipoaplástica e em algumas anemias mielotóxicas. A hipercromia é observada na anemia por deficiência de vitamina B12-folato, anemia perniciosa e algumas anemias hemolíticas (por exemplo, anemia microesferocítica).A policromatofilia (aparecimento em esfregaços de sangue de células diferentes dos glóbulos vermelhos rosa-vermelhos de cores azul, violeta e de transição) é característica de várias anemias hemolíticas e é um indicador da capacidade regenerativa da medula óssea em relação à produção de vermelho células sanguíneas. Normalmente, a policromatofilia ocorre apenas em recém-nascidos (até 1,5 meses de vida). A detecção de células eritróides nucleares - normoblastos - em esfregaços de sangue periférico tem valor diagnóstico semelhante ao da policromatofilia e é característica da anemia hemolítica, metástases tumorais na medula óssea. Os eritrócitos nucleares gigantes são megaloblastos, assim como o aparecimento de pontuação basofílica nos eritrócitos, que está associada à hematopoiese patológica.
Resistência dos glóbulos vermelhos:
A resistência dos glóbulos vermelhos é a resistência dos glóbulos vermelhos a várias influências. Neste caso, costuma-se determinar a resistência osmótica dos eritrócitos. Em uma pessoa saudável, o início da hemólise no sangue fresco é observado em uma concentração de cloreto de sódio de 0,5-0,45%. E completar a hemólise com solução de cloreto de sódio 0,4-0,35%.Explicação:
Observa-se diminuição da resistência osmótica dos eritrócitos, ou seja, aparecimento de hemólise dos eritrócitos em concentração de solução de cloreto de sódio superior ao normal (0,7-0,75%), na microesferocitose hereditária, bem como na anemia hemolítica autoimune. Um aumento na resistência osmótica dos eritrócitos é característico da talassemia e da hemoglobinopatia.Enzimopatia dos eritrócitos:
Enzimopatia dos eritrócitos - o estudo da atividade enzimática nos eritrócitos. A fermentopatia hereditária de glóbulos vermelhos mais comum é a deficiência de glicose-b-fosfato desidrogenase (Gb-PD). Para diagnosticar a deficiência de G-b-PD, é utilizada a determinação quantitativa da atividade enzimática nos eritrócitos. Em pessoas saudáveis, corpos vermelhos únicos (corpos de Heinz-Ehrlich) são formados nos glóbulos vermelhos.Explicação:
Nos eritrócitos G-b-PD patológicos, aparece um maior número de corpos (4-6), que também são característicos de overdose de sulfonamidas, envenenamento por corantes de anilina e deficiência de outras enzimas (glutationa redutase, b-fosfogluconato desidrogenase).Reticulócitos:
Os reticulócitos são um importante indicador da capacidade regenerativa do tecido hematopoiético. Normalmente, existem de 2 a 10 reticulócitos por 1.000 glóbulos vermelhos.Explicação:
Um aumento de reticulócitos no sangue periférico é observado na anemia hemolítica, especialmente durante uma crise (o número de reticulócitos pode ser 20-30), perda aguda de sangue, tratamento com ferro para anemia ferropriva, vitamina B12 e ácido fólico para vitamina B12 -anemia por deficiência fólica, com policitemia, bem como em recém-nascidos. A presença de reticulocitose permite suspeitar de sangramento oculto. Uma diminuição no número de reticulócitos ou sua ausência completa é observada na anemia hipoaplástica regenerativa, bem como na anemia por deficiência de vitamina B12-folato não tratada.Fórmula de leucócitos:
A fórmula leucocitária é a porcentagem de formas individuais de leucócitos, que são contadas em esfregaços de sangue corados por 100 leucócitos e expressas como uma porcentagem de cada tipo de glóbulo branco. Além das características quantitativas da fórmula leucocitária, é necessária uma avaliação qualitativa da composição morfológica das células sanguíneas, pois permite estabelecer a presença de uma patologia do sistema hematopoiético no paciente, para especificar a variante clínica do processo patológico, o grau de sua gravidade, a eficácia do tratamento (ao longo do tempo) e o prognóstico.Leucócitos:
Os leucócitos do sangue periférico são divididos em granulócitos (células cujo protoplasma contém granularidade) - basófilos, eosinófilos, neutrófilos em banda e segmentares e agranulócitos (células cujo protoplasma não possui granularidade) - linfócitos e monócitos.Decodificação de leucócitos e norma:
Um aumento ou diminuição no número de tipos individuais de leucócitos pode ser absoluto ou relativo. A variação percentual nem sempre corresponde a oscilações dos valores absolutos, o que deve ser levado em consideração na análise do hemograma leucocitário.No sangue de um adulto existem normalmente de 4 a 8 x 10 9/l leucócitos. Uma diminuição no número de leucócitos (leucopenia) ocorre em doenças infecciosas muito graves e condições tóxicas: gripe e muitas outras doenças virais, febre tifóide, distrofia, jejum, anafilaxia, hiperesplenismo, ao usar certos medicamentos (sulfonamidas, butadiona, cloranfenicol, citostáticos , imunossupressores), substâncias tóxicas (benzeno, arsênico), enjoo causado pela radiação. A leucopenia é claramente expressa na neutropenia de várias origens, anemia hipo e aplástica, bem como em algumas doenças do sistema endócrino: doença de Addison, doença de Simmonds.
Um aumento no número de leucócitos superior a 8 x 10 9/l é denominado leucocitose, que, por sua vez, pode ser absoluta e relativa. A leucocitose relativa ocorre devido à entrada de leucócitos na corrente sanguínea a partir de órgãos que servem como depósito para eles. Isto é observado após alimentação (leucocitose digestiva), exercício muscular intenso (leucocitose miogênica), banhos quentes e frios, emoções fortes (leucocitose vegetativo-vascular).
A leucocitose absoluta pode ser causada por hiperplasia do tecido hematopoiético, que é observada na leucemia, e também é uma reação temporária do sangue ao processo inflamatório no corpo (pneumonia, pleurisia, doenças inflamatórias da vesícula biliar e ductos, peritonite, abscesso purulento , sepse, erisipela, amigdalite, doenças infecciosas de origem bacteriana). Além disso, pode ocorrer leucocitose devido à exposição a substâncias tóxicas exógenas (monóxido de carbono, nitrobenzeno, etc.).
Número de basófilos, normal:
O número de basófilos no sangue periférico é normalmente pequeno e varia de 0 a 1%.Explicação:
Um aumento no número de basófilos é observado no diabetes, nefrose, mixedema, na fase aguda da trombocitopenia autoimune, na leucemia mieloide crônica, na mielofibrose. Na maioria dos pacientes, paralelamente ao aumento da concentração de basófilos, é observado um alto nível de histamina no sangue e na urina. Observa-se diminuição do número de basófilos com a administração de corticosteróides, adrenalina, com hipertireoidismo e qualquer situação estressante.Contagem de eosinófilos, normal:
Em adultos saudáveis, o sangue periférico contém 0 a 5% de eosinófilos. Em uma criança, o nível normal de eosinófilos no sangue varia de 1 a 4%.Explicação:
Um aumento no número de eosinófilos (eosinofilia) é observado com helmintíases (ascaridíase, enterobíase, ancilostomíase, triquinose), giardíase, linfogranulomatose, leucemia mieloide crônica, granuloma eosinofílico, condições alérgicas (asma brônquica, urticária, febre do feno, alimentos e medicamentos alergias).Observa-se diminuição do número de eosinófilos (eosinopenia) ou ausência completa (aneosinofilia) no período inicial de processos infecciosos e inflamatórios agudos, infarto do miocárdio. O aparecimento de eosinófilos no sangue nestes casos é um bom sinal prognóstico de “amanhecer eosinofílico de recuperação”.
Neutrófilos bastonetes nucleares e segmentados, norma:
Normalmente, neutrófilos nucleares e segmentados são encontrados no sangue periférico. Pessoas saudáveis contêm de 1 a 6% de neutrófilos em banda e de 45 a 70% de neutrófilos segmentados.Explicação:
Em condições patológicas, neutrófilos com núcleo redondo, os chamados neutrófilos jovens, ou seus precursores, os mielócitos, podem aparecer no sangue periférico, o que é referido como um desvio da fórmula leucocitária para a esquerda. Uma mudança na fórmula leucocitária para a direita é um aumento de neutrófilos mais maduros, ou seja, segmentados.Monócitos, normais:
Em pessoas saudáveis, o número de monócitos no sangue periférico é de 2 a 9%.Explicação:
Em várias condições patológicas, também é observada uma diminuição ou aumento no número de monócitos. Na maioria dos casos, a monocitose indica o desenvolvimento de reações patoimunes no corpo. A monocitose em combinação com neutrofilia é observada na endocardite séptica prolongada, processos inflamatórios purulentos no corpo e tuberculose. A monocitose absoluta se desenvolve como uma reação específica ao vírus Epstein-Barr e é característica da mononucleose infecciosa. A monocitopenia é característica de doenças sépticas graves e formas hipertóxicas de processos infecciosos.Linfócitos normais:
O número normal de linfócitos no sangue periférico é de 18 a 40%.Decifrando linfócitos:
Um aumento no número de linfócitos (linfocitose) ocorre frequentemente em doenças acompanhadas de neutropenia e é relativo. A linfocitose absoluta ocorre na mononucleose infecciosa, leucemia linfocítica crônica, tuberculose e algumas doenças infecciosas (sarampo, rubéola, varicela, tosse convulsa). A linfopenia ocorre frequentemente em pacientes com neutrofilia, ou seja, é relativa.A linfocitopenia absoluta é observada em todas as doenças acompanhadas pela substituição do tecido linfóide por outros elementos celulares (linfogranulomatose, linfossarcoma, leucemia mieloide aguda e crônica), bem como na uremia, condições sépticas graves, tuberculose generalizada e progressiva, doença da radiação, doença de longa duração. uso prolongado de hormônios.
Mudanças na composição morfológica do sangue periférico:
Além da avaliação quantitativa da fórmula leucocitária, o exame microscópico dos esfregaços de sangue permite estabelecer alterações qualitativas na composição morfológica do sangue periférico.Explicação:
Essas alterações são mais significativas na leucemia. Em pacientes com leucemia aguda, o número total de glóbulos brancos pode estar reduzido, normal ou aumentado. A composição qualitativa do sangue periférico é caracterizada pela presença de células hematopoiéticas progenitoras anaplásicas imaturas - blastos (linfoblastos, monoblastos, mieloblastos, eritroblastos, plasmablastos, megacarioblastos e células progenitoras pluripotentes e unipotentes morfologicamente irreconhecíveis.Freqüentemente, o sangue periférico consiste em 90-95% de células blásticas e apenas 5-10% de leucócitos maduros. Uma lacuna no hemograma entre células blásticas e células maduras é muito característica da leucemia aguda e é designada como lacuna leucêmica, lacuna leucêmica (hiatus leucemicus). Dependendo da predominância de um ou outro tipo de células blásticas, distinguem-se as formas correspondentes de leucemia: linfoblástica, mieloblástica, mielomonoblástica, plasmablástica, megacarioblástica, eritroleucemia, eritromielose.
Na leucemia aguda, as alterações morfológicas afetam não apenas o sangue branco, as alterações são detectadas no sangue vermelho na forma de anemia (o germe vermelho da hematopoiese é inibido, a maturação plaquetária é prejudicada). Na leucemia crônica, as alterações morfológicas no sangue periférico são determinadas principalmente pela forma da leucemia, pelo estágio de desenvolvimento do processo patológico e pela sua gravidade. As mais comuns são a leucemia mieloide crônica e a leucemia linfocítica. As alterações morfológicas no sangue periférico na leucemia mieloide crônica são caracterizadas por um aumento no número de leucócitos devido a uma mudança pronunciada na fórmula leucocitária para a esquerda, até mielócitos e promielócitos. Muitas vezes, no sangue periférico, aumenta o número de basófilos e esinófilos de vários graus de maturidade (associação basofílica-eosinofílica).
Uma certa característica hematológica da gravidade e gravidade da leucemia mieloide crônica é dada pela comparação da porcentagem de neutrófilos maduros e imaturos. Um pequeno número de mieloblastos, promielócitos, mielócitos e metamielócitos (formas imaturas) dentro de 10-15% pode indicar um curso benigno do processo leucêmico. Durante a exacerbação da leucemia mieloide crônica, o número de células blásticas no sangue periférico aumenta, o que é conhecido como crise blástica. O número de plaquetas na leucemia mieloide crônica nos estágios iniciais da doença pode estar aumentado ou normal, e no estágio final já está reduzido. A anemia não é típica dos estágios iniciais da leucemia mieloide crônica, mas aparece apenas no estágio avançado e aumenta progressivamente no estágio terminal.
Na leucemia linfocítica crônica, as alterações morfológicas na fórmula leucocitária apresentam-se na forma de leucocitose, principalmente devido aos linfócitos, cujo número pode chegar a 80-90%, e os linfócitos geralmente são de tamanho pequeno. A maioria das células é representada por elementos maduros. Com um curso relativamente benigno da doença, o número de células linfóides imaturas (prolinfócitos, linfoblastos) é de cerca de 5-10%. Um aumento no número dessas células indica uma exacerbação do processo patológico.
Os indicadores do hemograma na leucemia monocítica crônica são caracterizados por um aumento no número de monócitos de até 30-40% no contexto de leucocitose pronunciada de até 15.000-30.000.
A eritremia (doença de Vaquez) é caracterizada por alterações no hemograma na forma de eritrocitose, leucocitose, trombocitose, aumento da concentração de hemoglobina para 160-200 g/l no contexto de uma diminuição da VHS para 1-2 mm/h.
Plaquetas normais:
A contagem normal de plaquetas varia de 180 x 10 9/L a 320 x 10 9/L.Decifrando plaquetas:
Uma diminuição no número de plaquetas (trombocitopenia) ocorre na doença de Werlhof, leucemia, envenenamento por benzeno e anilina. Um aumento no número de plaquetas (trombocitose) é observado com perda de sangue, após esplenectomia e com algumas formas de neoplasias malignas.Células plasmáticas:
As células plasmáticas praticamente não são encontradas normalmente.Explicação:
Um aumento no número de plasmócitos é observado em todas as doenças acompanhadas de tensão do aparelho linfóide, em particular na mononucleose infecciosa. Também ocorre em doenças infecciosas como sarampo, rubéola, varicela, escarlatina e meningite serosa.Células de lúpus:
As células lúpicas (células L E) são formadas como resultado da fagocitose por leucócitos neutrófilos, menos frequentemente por monócitos, de núcleos celulares contendo DNA. Pessoas saudáveis não possuem células lúpicas.Explicação:
A detecção de células LE é um sintoma específico do lúpus eritematoso sistêmico. Porém, a obtenção de um resultado negativo não exclui esta doença, pois isso acontece nas fases iniciais da doença. WBC (glóbulos brancos) - o número de leucócitos no sangue (x10 9 / l). A medição do número de leucócitos é realizada após lise completa dos glóbulos vermelhos com um reagente especial. Todas as partículas maiores que 35 fL são contadas como leucócitos. As plaquetas inferiores ao limite de 35 fL são excluídas da contagem. O coeficiente de variação (CV) na determinação automática deste indicador é de 2-3%.Na presença de eritrócitos resistentes à lise, eles são detectados como leucócitos e causam aumento na contagem de leucócitos. Nestes casos, você deve prestar atenção à mudança no formato do histograma de hemácias.
Tabela 11. Possíveis erros na medição de leucócitos
6.4. Contagem de leucócitos
Muitos analisadores hematológicos modernos determinam de 6 a 10 indicadores da fórmula leucocitária, levando em consideração o número relativo e absoluto de células, o chamado 3Diff ou 5Diff.
6.4.1 Os analisadores hematológicos, que determinam 18 parâmetros sanguíneos, diferenciam todos os leucócitos em três populações (3Diff). A operação dos analisadores 3Diff é baseada no princípio da condutometria. As células são diferenciadas por volume em 3 categorias: linfócitos, neutrófilos e células médias, constituídas predominantemente por monócitos com adição de eosinófilos e basófilos. Tanto o conteúdo relativo (%) quanto o absoluto (células/l) são determinados.
Analisadores hematológicos automáticos, que determinam 26 ou mais parâmetros sanguíneos, diferenciam os leucócitos em cinco populações (5Diff). A operação dos analisadores 5Diff é baseada na combinação do método condutométrico com outras tecnologias, tais como: método de espalhamento de luz laser, análise de radiofrequência, uso de lisados diferenciadores e método citoquímico.
Uma contagem diferencial automática de leucócitos deve ser realizada no dia da coleta de sangue. Para obter resultados mais precisos da análise diferencial de leucócitos, recomenda-se estudar amostras de sangue no período de 30 minutos a 5 horas após a coleta do material, em caso de leucocitose significativa após diluição preliminar do sangue - a partir de 5 minutos a 1 hora.
Após um intervalo de 24 horas, alterações durante o armazenamento podem afetar o sistema de alarme e distorcer o resultado. A contagem diferencial das populações de leucócitos é influenciada pelos mesmos fatores que o número total de leucócitos. O aparecimento de “sinais de alarme” indica a presença de alterações patológicas na amostra de teste e requer exame microscópico de um esfregaço de sangue corado.
6.4.2 Alguns fatores que influenciam a contagem diferencial de leucócitos em analisadores hematológicos 3Diff
LY e LY%: microformas de blastos, normoblastos, glóbulos vermelhos resistentes à lise (por exemplo, glóbulos vermelhos contendo Plasmodium falciparum) podem causar medições erradas de LY.
MO e MO%: Linfócitos grandes, linfócitos atípicos, plasmócitos, blastócitos e excesso de basófilos podem afetar a precisão das contagens de MO. Alguns eosinófilos também podem ser contados neste canal.
GR e GR%: O excesso de eosinófilos, metamielócitos, promielócitos, blastócitos e plasmócitos pode causar contagens erradas de GR e GR%.
Num histograma de leucócitos em analisadores 3Diff, as subpopulações de leucócitos enquadram-se em três regiões principais do histograma de distribuição de leucócitos, que são separadas através de limiares (discriminadores). Se os resultados do cálculo estiverem dentro da faixa normal, não aparecerão marcadores alertando sobre uma possível patologia. A forma do histograma muda quando a distribuição dos leucócitos entre as populações é perturbada ou quando a lise dos eritrócitos é insuficiente.
Assim, os analisadores hematológicos 3Diff, na maioria dos casos, permitem detectar alterações no hemograma leucocitário, mas não são capazes de realizar a diferenciação completa dos leucócitos. Na presença de microformas de células blásticas, de tamanho semelhante aos linfócitos, os analisadores, cujo princípio de medição se baseia apenas no método condutométrico, irão classificá-los como uma população de pequenas células (linfócitos).
6.4.3 Os analisadores hematológicos 5Diff contam todas as 5 classes de leucócitos encontrados normalmente: neutrófilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos e basófilos. A utilização simultânea de diversos métodos de análise pode melhorar significativamente a qualidade da diferenciação celular e, consequentemente, o desempenho do analisador. Analisadores deste tipo possuem um sistema mais complexo de “sinais de alarme” que permite esclarecer a presença de células patológicas (neutrófilos imaturos, linfócitos atípicos, blastócitos, normoblastos). Se a qualidade do material for ruim, os analisadores emitem “sinais de alarme” adicionais, como coágulos de plaquetas ou fragmentos de glóbulos vermelhos fantasmas. Eles estão equipados com programas apropriados para detectar células imaturas, linfócitos ativados e células blásticas.
As designações dos sinalizadores de parâmetros diferenciais dependem do fabricante do analisador.
Podem ser: LIC (Grandes Células Imaturas), que, por sua vez, se dividem em:
IMG (granulócitos imaturos), granulócitos imaturos,
IMM (monócitos imaturos) monócitos imaturos,
IML (linfócitos imaturos) linfócitos imaturos,
LS (Left Shift) – desvio à esquerda, indicando a possibilidade de desvio à esquerda na fórmula sanguínea (banda de neutrófilos)
exame de esfregaço de sangue.
Em caso de linfocitose ou presença de alterações no volume dos linfócitos, aparecem os seguintes sinalizadores:
Linfócitos Atípicos, Variante
Linfócitos reativos
Linfócitos, Linfócitos Anormais
A maioria dos analisadores hematológicos 5Diff possuem sistemas rigorosos de controle de qualidade interno e externo, o que torna sua operação mais confiável.
Apesar de todas as vantagens, mesmo os analisadores hematológicos mais modernos apresentam algumas limitações relacionadas à avaliação morfológica precisa de células patológicas (por exemplo, na leucemia) e não são capazes de substituir completamente a microscopia óptica.
Controle de qualidade de estudos de composição celular sanguínea em analisadores hematológicos automáticos
Procedimento de controle de qualidade
Estabelecer requisitos uniformes para a qualidade analítica dos métodos quantitativos;
Implementação seriada de procedimentos de controle de qualidade em laboratório utilizando materiais de controle (controle de qualidade operacional);
Participação regular em programas externos de avaliação de qualidade (GOST R 53133.1-2008).
O controle de qualidade laboratorial é um sistema de monitoramento rotineiro da precisão dos resultados obtidos em um analisador hematológico para manter a estabilidade do sistema analítico, identificar e eliminar erros aleatórios e sistemáticos inaceitáveis e consiste na comparação dos resultados do estudo de amostras com os resultados do estudo do material de controle e medindo a magnitude do desvio.
É realizado de acordo com as instruções do dispositivo e as instruções dos materiais de controle utilizados e os requisitos da norma GOST R 53133.2-2008.
O controle de qualidade em laboratório deve ser:
Sistemático, cotidiano, realizado de acordo com regras uniformes, ou seja, a análise das amostras de controle deve ser incluída no curso normal do trabalho do laboratório;
Cobrir todas as áreas de medição (valores patológicos normais, altos e baixos);
Realizado em condições laboratoriais reais (iguais às amostras normais de pacientes, ou seja, pelo mesmo pessoal e nas mesmas condições);
Objetivo (é aconselhável “criptografar” o material de controle para que o performer não saiba onde está a experiência e onde está o controle).
O princípio do controle interno é bastante simples: periodicamente (em cada série) é necessário medir o mesmo material de controle, e os resultados dessas medições são registrados em um cartão de controle.
Um sistema de controle de qualidade interno bem organizado permite identificar efetivamente erros associados a:
fatores variáveis externos (reagentes, calibradores, consumíveis);
fatores internos variáveis (organização de “reagentes caseiros” no laboratório, treinamento de pessoal, manutenção de instrumentos, documentação, reação do pessoal a problemas emergentes).
O valor MCHC pode servir como controle para a medição correta da concentração de hemoglobina.Na maioria das vezes, um aumento no MCHC indica erros cometidos durante a medição da amostra (erros na determinação da hemoglobina ou MCV). Nessas situações, os resultados mais precisos na determinação da concentração de hemoglobina pelo método do cianeto de hemiglobina podem ser obtidos em um fotômetro adicionando 20 μl do soro do paciente a uma amostra em branco. Assim, este parâmetro também pode ser utilizado como indicador de erros cometidos nas etapas analíticas ou pré-analíticas do trabalho.
Requisitos para a qualidade dos estudos de composição celular sanguínea
Para avaliar a qualidade dos estudos, são calculadas as seguintes estatísticas:
indicadores:
Média aritmética ou média aritmética (X):
- avaliação preliminar da precisão (com base em 10 medições em uma série) - CV 10;
Estimativa preliminar do deslocamento relativo – B 10 ;
Avaliação final da precisão (20 medições) CV 20 ;
A estimativa final do deslocamento relativo é B 20.
A Tabela 11 apresenta os erros intralaboratoriais em estudos hematológicos recomendados pelo GOST R 53133.1─2008 (Apêndice A). Estes TLVs são calculados como um compromisso entre os coeficientes dos limites de erro baseados na variação biológica e o desempenho real de precisão alcançado pela maioria dos laboratórios de diagnóstico clínico no país, conforme medido pelo sistema externo de avaliação da qualidade.
Tabela 12
Limites operacionais de valores permitidos
| Tipo de estudo | | |
|||
| ÀS 10 | CV 10 | B20 | CV 20 | B1 |
|
| Hemoglobina total no sangue | ± 5 | 4 | ± 4 | 4 | ± 9 |
| glóbulos vermelhos | ± 7 | 4 | ± 6 | 4 | ± 11 |
A Tabela 13 apresenta os VPMs calculados com base nos dados de variação biológica disponíveis na literatura. Eles podem ser considerados padrões desejáveis.
Tabela 13
Limites de tolerância operacional calculados a partir de dados de variação biológica
| Tipo de estudo | Limites operacionais de valores permitidos |
||||
| para a série de instalações de controle de qualidade intralaboratorial, coeficiente de variação, % | para o resultado de uma única medição, deslocamento relativo, % |
||||
| ÀS 10 | CV 10 | B20 | CV 20 | B1 |
|
| Contagem de glóbulos vermelhos no sangue | ±2,7 | 2,2 | ± 2,4 | 2,0 | ±4,9 |
| Glóbulos vermelhos, volume celular médio | ± 1,6 | 0,9 | ± 1,5 | 0,8 | ± 2,5 |
| Hemoglobina, concentração no sangue | ±2,7 | 1,9 | ± 2,4 | 1,8 | ± 4,5 |
| Hemoglobina, concentração média em eritrócitos (MCHC) | ± 1,3 | 1,2 | ± 1,2 | 1,1 | ± 2,5 |
| Hemoglobina, conteúdo médio em um glóbulo vermelho (MSN) | ± 1,9 | 1,1 | ± 1,7 | 1,0 | ±2,9 |
| Hematócrito | ±2,6 | 1,9 | ± 2,4 | 1,8 | ± 4,5 |
| Contagem de leucócitos no sangue | ± 9,0 | 7,5 | ± 8,0 | 6,9 | ± 16,3 |
| Contagem de linfócitos no sangue | ± 10,6 | 7,1 | ± 9,7 | 6,5 | ± 17,6 |
| Contagem de monócitos no sangue | ± 18,7 | 12,2 | ± 17,1 | 11,2 | ± 30,7 |
| Neutrófilos, hemograma | ± 14,1 | 11,0 | ± 12,7 | 10,1 | ± 24,9 |
| Plaquetas, hemograma | ± 8,7 | 6,2 | ± 7,9 | 5,7 | ± 14,8 |
| Plaquetas, volume médio | ± 3,6 | 2,9 | ± 3,2 | 2,7 | ± 6,5 |
| Reticulócitos, hemograma | ± 11,2 | 7,5 | ± 10,2 | 6,9 | ± 18,5 |
Conteúdo de hemoglobina, taxa de hemossedimentação (VHS), número de eritrócitos e leucócitos em 1 μl de sangue, fórmula leucocitária (porcentagem de vários grupos de leucócitos), bem como um indicador de cor (um coeficiente que indica o grau de saturação dos eritrócitos com hemoglobina) compõem os dados de um exame de sangue clínico geral.
O sangue para análise é coletado pela manhã (não necessariamente antes do café da manhã), mas em condições ambulatoriais, o sangue deve ser coletado após um descanso de 10 a 15 minutos.
Para o estudo, o sangue é retirado do dedo anular da mão esquerda após tratamento minucioso com álcool. Na superfície lateral da parte carnuda da primeira falange é feita uma punção com agulha escarificadora estéril, e o plano da agulha deve ser posicionado perpendicularmente ao padrão da pele do dedo - neste caso, a ferida fica aberta e o sangue é liberado por um longo tempo.
Determinação da concentração de hemoglobina
Dentre os métodos de determinação da hemoglobina, os mais utilizados são os métodos baseados na colorimetria, ou seja, determinação da intensidade da cor.
O mais simples deles é a determinação da hemoglobina por colorimetria visual em hemômetro Sali, que é um suporte de madeira com tubo de ensaio central graduado, em cujas laterais há tubos de vidro selados com padrão de cor (ácido clorídrico hematina em glicerina) .
Uma solução de ácido clorídrico a 0,1% é primeiro despejada no tubo de ensaio central até a marca correspondente a 2 ou 3 g%, depois adicione cuidadosamente (exatamente!) 0,02 ml de sangue retirado de um dedo com uma pipeta especial acoplada ao hemômetro. A pipeta é lavada com a camada superficial de ácido e, após misturar o sangue e o ácido com um bastão de vidro, é deixada por 5 minutos para formar a hematina de ácido clorídrico. Em seguida, adicionando água destilada e mexendo constantemente com um bastão, a cor do líquido no tubo de ensaio central corresponde completamente aos padrões. A concentração de hemoglobina corresponde ao nível da solução ao longo do menisco inferior. A concentração de hemoglobina pode ser expressa em g% de hemoglobina ou em unidades arbitrárias. 16,67 g de hemoglobina equivalem a 100 unidades.
A concentração de hemoglobina no sangue em mulheres varia de 11,7 a 15,8 g/o ou de 117 a 158 g/l, em homens - de 13,3 a 18 g% ou de 133 a 180 g/l.
Tirando sangue para contar os elementos formados
Para contar os elementos formados, o sangue é diluído em misturadores (melangers) ou tubos de ensaio, que recentemente se tornou mais utilizado.
Para contar glóbulos vermelhos, o sangue é diluído 200 vezes com solução de cloreto de sódio a 3%; se usarmos uma pipeta hemômetro com volume de 0,02 ml para tirar sangue, devemos levar 4 ml de solução de cloreto de sódio.
Para contar os leucócitos, o sangue é diluído 20 vezes, portanto, são tomados 0,02 ml de sangue e 0,38 ml de uma solução de ácido acético a 3% tingida com azul de metileno, necessária para causar a destruição das hemácias.
O sangue deve ser coletado com grande precisão, pois em volumes tão pequenos a entrada de uma bolha de ar ou sangue residual na parte externa da pipeta aumenta o erro de determinação.
Antes de encher a câmara, você precisa limpar o vidro fosco da câmara para que apareçam anéis de arco-íris.
Antes de encher a câmara, o sangue diluído é bem misturado, à medida que as células se depositam nas paredes do tubo de ensaio ou da ampola misturadora, após o que uma gota de sangue é colocada sob o vidro fosco da câmara e deixada sozinha por 1 minuto para o células se estabelecerem.
A contagem dos elementos formados é realizada com baixa ampliação do microscópio (objetiva 8X, ocular 15X ou 10X) em um campo de visão escurecido.
Os glóbulos vermelhos são contados em 5 quadrados grandes (16x5 = 80 quadrados pequenos) localizados em diferentes partes da câmara; você pode pegar quadrados localizados na diagonal.
São contados os glóbulos vermelhos que estão dentro do quadrado e os dos lados superior e esquerdo; os glóbulos vermelhos situados na parte inferior e direita não são contados, pois já pertencem a outros quadrados.
Contando o número de glóbulos vermelhos (A) em 5 quadrados grandes, encontre a média aritmética do número de glóbulos vermelhos num pequeno quadrado A/80, ou seja, em 1/4000 µl. Portanto, para encontrar o número de glóbulos vermelhos em 1 μl, devemos multiplicar o número obtido na divisão por 4.000 e por 200 (diluição).
Assim obtemos a seguinte fórmula:
X=A*4000*200/80,
onde X é o número de glóbulos vermelhos em 1 μl e A é o número de glóbulos vermelhos em 5 quadrados grandes.
Se contássemos os glóbulos vermelhos em 5 quadrados grandes e diluíssemos o sangue 200 vezes, o multiplicador total do número A seria 10.000.
O conteúdo normal de glóbulos vermelhos no sangue das mulheres é 4-5 * 10 6, dos homens - 4,5-5,5 * 10 6.
Os leucócitos são contados em 100 quadrados grandes, não divididos em pequenos, o que corresponde a 1.600 pequenos. Assim, o número de leucócitos encontrados em 100 quadrados é dividido por 1.600, multiplicado por 4.000 e multiplicado por 20 (diluição). Neste caso, para obter o resultado, basta multiplicar o número de leucócitos contados por 50. O conteúdo normal de leucócitos no sangue é 5 * 10 3 - 8 * 10 3 em 1 μl.
Índice de cor do sangue. O índice de cor do sangue é um número que mostra a saturação média de hemoglobina de um glóbulo vermelho individual de um determinado sangue em comparação com a saturação de um glóbulo vermelho individual de sangue normal.
O conteúdo normal de hemoglobina é considerado 100 unidades e o número normal de glóbulos vermelhos é 5.000.000.
O valor do índice de cores de pessoas saudáveis varia de 0,9 a 1,1.
Exame de esfregaço de sangue periférico. Nos esfregaços de sangue, estuda-se a morfologia das hemácias e calcula-se a fórmula leucocitária, ou seja, a relação percentual entre os diferentes tipos de leucócitos.
Para que o estudo tenha sucesso, o preparo, a fixação e a coloração dos esfregaços de sangue devem ser realizados com muito cuidado.
Para preparar um esfregaço, toque uma gota de sangue no local da punção no dedo com a superfície de um vidro limpo e sem gordura a uma distância de 0,5 cm da borda da lâmina e, em seguida, coloque uma lamela de vidro em um ângulo de 45° em relação à lâmina e leve a primeira até a gota de sangue para que ela se espalhe pela borda posterior da lamínula e com um leve movimento, sem pressão brusca, faça um esfregaço. O esfregaço deve terminar em “vassoura” na lâmina. O esfregaço é seco ao ar; quando seco, um esfregaço bom e fino tem uma cor amarela.
Com um lápis simples e apontado, o nome do paciente e a data do estudo são escritos no meio do esfregaço, após o qual os esfregaços são fixados em álcool metílico por pelo menos 5 minutos e corados pelo método Romanovsky-Giemsa.
A tinta consiste em uma mistura de corantes ácidos (eosina) e básicos (Azur II). Este método de coloração permite diferenciar as células. A primeira etapa do trabalho com um esfregaço é avaliar a morfologia dos glóbulos vermelhos. Para fazer isso, escolha um local fino onde as células fiquem separadas, e não na forma de colunas de moedas. Os eritrócitos normais são células anucleadas, coradas de rosa, redondas, aproximadamente do mesmo diâmetro - 7,5 mícrons, os eritrócitos têm formato de disco bicôncavo, portanto, no esfregaço apresentam clareamento no centro e periferia de cor mais intensa.
(módulo direto4)
Preparando uma gota grossa
Para testar o sangue para a malária por Plasmodium, é feita uma gota espessa. O sangue é retirado da maneira usual da carne do dedo. Uma gota de sangue que sai do local da injeção é tocada na superfície de uma lâmina de vidro. 2-3 gotas aplicadas separadamente são espalhadas no canto de outro copo. O esfregaço seco é derramado (sem fixação) com tinta Romanovsky por 30-40 minutos, depois a gota pintada é cuidadosamente enxaguada com água e a preparação é seca na posição vertical.
Dados de análise de amostra
Um número aumentado de glóbulos vermelhos e hemoglobina no sangue pode ocorrer com uma doença dos elementos vermelhos do sangue - eritremia, então o número de glóbulos vermelhos atinge 9-106 ou mais.
Um aumento no conteúdo de eritrócitos no sangue pode ocorrer secundariamente, ou seja, quando não há doença da folha vermelha da hematopoiese, e o número de eritrócitos aumenta em decorrência de doenças de outros órgãos e sistemas (com pneumosclerose difusa descompensada, pulmonar enfisema, alguns tipos de defeitos cardíacos congênitos, esclerose vascular do sistema arterial pulmonar, defeitos cardíacos direitos, insuficiência circulatória de terceiro grau, etc.). Este sintoma é chamado de eritrocitose.
Glóbulos vermelhos morfologicamente alterados aparecem na anemia hipercrômica (megaloblástica). Nesse caso, são encontrados no sangue grandes glóbulos vermelhos com alto teor de hemoglobina (macrócitos), glóbulos vermelhos embrionários (megaloblastos), que geralmente não são encontrados no sangue periférico. A morfologia dos eritrócitos também muda na anemia hipocrômica: aparecem pequenos eritrócitos (micrócitos) com formato alterado (poiquilócitos) e eritrócitos com baixo teor de hemoglobina (eritrócitos hipocrômicos).
Contagem de leucócitos
Ao calcular a fórmula leucocitária, é necessário determinar as características estruturais do citoplasma e dos núcleos das células. A pertença de uma célula a um grupo ou outro é determinada com base na totalidade de todas as características do citoplasma e do núcleo.
Ao calcular a fórmula, você deve seguir o mesmo método de mover o vidro sob o microscópio. O método mais utilizado é a microscopia em 4 locais do esfregaço. Sabe-se que os leucócitos estão distribuídos de forma desigual no esfregaço: há menos linfócitos nas bordas do que no meio e há mais monócitos no final do esfregaço do que no início. Portanto, ao calcular a fórmula leucocitária, é melhor mover-se ao longo de uma linha tracejada, contando todas as células encontradas.
Uma contagem de células de 200 é o mínimo prático para estudos clínicos de rotina.
Os leucócitos do sangue periférico, dependendo da presença ou ausência de granularidade no citoplasma, são divididos em granulócitos (neutrófilos, eosinófilos, basófilos) e agranulócitos (monócitos e linfócitos).
Neutrófilos. O tamanho da célula é de 10 a 12 mícrons. O citoplasma das células é rosa pálido com granularidade roxa fina e abundante. Normalmente, neutrófilos em banda (2-4%) e segmentados (60-65%) são encontrados no sangue.
Eosinófilos. As células têm o mesmo tamanho dos neutrófilos, às vezes um pouco maiores, o citoplasma é preenchido com grandes grânulos vermelho-amarelados, o núcleo geralmente possui dois segmentos do mesmo tamanho. Os eosinófilos são normais 2-4%.
Basófilos. Este é o menor granulócito em tamanho. O núcleo é irregular, multilobado, ocupa quase toda a célula, o citoplasma rosa claro contém grandes grânulos roxos escuros. Os grânulos de basófilos dissolvem-se em água e, por vezes, como resultado da lavagem durante a coloração da preparação, células incolores permanecem no lugar dos grânulos. Os basófilos normais são 0,1%.
Linfócitos. O tamanho da célula varia de 7 a 10 mícrons. O miolo tem estrutura compacta, redonda ou em forma de feijão. O citoplasma das células é azul claro com uma zona transparente ao redor do núcleo (perinuclear), às vezes grãos azurófilos individuais de cor vermelho-violeta são encontrados no citoplasma. O sangue periférico normalmente contém 20-35% de linfócitos.
Monócitos. O tamanho da célula varia de 12 a 20 mícrons. O núcleo costuma ter o formato de ferradura, às vezes de formato irregular. O citoplasma é mais extenso que o dos linfócitos, de cor azul acinzentada com granularidade fina, delicada e avermelhada.
Os monócitos são normalmente 6-8%.
Um nível aumentado de leucócitos no sangue é chamado de leucocitose, e um nível diminuído é chamado de leucopenia.
Coloração e contagem de reticulócitos
Os reticulócitos são glóbulos vermelhos jovens com uma retina azul fina ou granularidade no citoplasma. Essas células caracterizam a atividade da hematopoiese vermelha.
Para determinar a contagem de reticulócitos, é utilizado o método de coloração supravital (intravital). Esfregaços de tinta azul cresil brilhante são feitos nas lâminas em álcool absoluto e, em seguida, um esfregaço de sangue é feito no vidro revestido com tinta da maneira usual e colocado em câmara úmida por 3-5 minutos, após o qual é seco e microscopiado com lente de imersão. Normalmente existem 8-10 reticulócitos por 1000 glóbulos vermelhos, seu número é geralmente expresso em porcentagem (0,8-1%) ou em ppm (8-10%o) em relação aos glóbulos vermelhos.
Os reticulócitos são células que caracterizam o aumento da produção de glóbulos vermelhos na medula óssea.
Aparecem em grande porcentagem no sangue periférico com anemia hipocrômica (“anemia perniciosa”), com anemia hemolítica e outras doenças. Um conteúdo reduzido de reticulócitos e seu desaparecimento completo no sangue periférico são observados durante a exacerbação da anemia hipercrômica.
Para evitar a agregação (aglutinação) das plaquetas sanguíneas, é feita uma punção na pele através de uma gota de solução de sulfato de magnésio a 14% aplicada no dedo. O sangue é misturado ao magnésio e são preparados esfregaços finos em lâminas de vidro, que são fixados e corados segundo Romanovsky por 2 horas.
O número de plaquetas sanguíneas por 1000 glóbulos vermelhos é determinado e, conhecendo o número de glóbulos vermelhos em 1 μl, calcula-se o número de plaquetas em 1 μl de sangue. A contagem normal de plaquetas varia de 250.000 a 400.000.
Um aumento no conteúdo de plaquetas no sangue é detectado na eritremia, nas doenças do baço e em algumas formas de doenças malignas (por exemplo, o pâncreas). Uma baixa contagem de plaquetas ocorre com anemia.
Determinação da ESR
A velocidade de hemossedimentação é determinada em sangue misturado na proporção de 4:1 com citrato de sódio.
A reação é realizada no aparelho Panchenkov. O capilar de Panchenkov é lavado com citrato de sódio, depois o citrato é levado até a marca 50, onde está escrita a letra P (reagente), e é soprado em um tubo de ensaio Vidalev. Usando o mesmo capilar, o sangue é coletado duas vezes até a marca K (sangue) e misturado com citrato. O mesmo capilar é preenchido com sangue misturado com citrato até a divisão 0 e colocado verticalmente em um tripé por uma hora. Após uma hora, o tamanho da coluna de plasma formada acima dos eritrócitos sedimentados é anotado em milímetros, que é uma medida da taxa de hemossedimentação.
Normalmente, a VHS nos homens é de 10 mm/h, nas mulheres é de 14 mm/h.
A taxa de hemossedimentação aumenta em doenças inflamatórias, agudas e crônicas, em tumores malignos e outras doenças.
Teste de compatibilidade do fator Rh
2-3 ml do sangue do receptor são colocados em um tubo de ensaio sem citrato, após a coagulação do sangue, o coágulo é circulado com uma vareta de vidro e o sangue é centrifugado. Duas gotas de soro deste tubo de ensaio são aplicadas em uma placa de Petri, meia gota de sangue do doador é adicionada, misturada e a placa é colocada em banho-maria (42-45°). Após 10 minutos, o copo é removido e examinado à luz com movimentos suaves. O aparecimento de aglutinação indicará a inadmissibilidade da transfusão deste sangue.
As vantagens dos métodos automatizados para determinação da fórmula leucocitária são a rapidez e a reprodutibilidade. No entanto, como já mencionado, nenhum dos métodos automatizados é capaz de distinguir os granulócitos neutrófilos como um tipo separado de leucócitos. Não está claro quão importante é essa deficiência. A determinação automatizada da fórmula leucocitária é atualmente um método de triagem: se forem obtidos resultados completamente normais, dificilmente vale a pena calcular manualmente a fórmula usando um microscópio ou, em qualquer caso, é improvável que valha a pena repeti-la. Porém, com a ajuda
Os métodos automatizados não conseguem detectar doenças raras e variantes morfológicas. Para identificar tais anormalidades, é necessário examinar um esfregaço de sangue periférico.
Esfregaço de sangue periférico
O exame de esfregaço de sangue periférico continua sendo uma parte importante dos testes hematológicos. O médico deve observar que faz sentido começar a estudar o esfregaço após receber os resultados de um exame de sangue automatizado. O tempo gasto no estudo do esfregaço é necessário para obter informações adicionais e não para duplicar dados da análise automatizada. Em geral, os exames de sangue automatizados são muito mais eficazes do que os métodos manuais na determinação de valores médios e características quantitativas convencionais: índices de glóbulos vermelhos, contagem de células, tamanho de plaquetas e porcentagem de linfócitos e granulócitos. No entanto, um analisador automatizado não é confiável, na melhor das hipóteses, e muitas vezes completamente inadequado para identificar anormalidades raras: células eritróides nucleadas, granulócitos imaturos e fragmentos de eritrócitos.
glóbulos vermelhos
A detecção de glóbulos vermelhos em forma de moeda pode ser a primeira pista para identificar doenças linfocíticas ou plasmocitárias. Fragmentos de glóbulos vermelhos podem ser detectados se representarem pelo menos 0,5% de todas as células. Aproximadamente no mesmo nível de seu conteúdo, desvios também são detectados no histograma de eritrócitos. Assim, ambos os métodos se complementam. Anormalidades de formato podem indicar doenças específicas, como hemoglobinopatias em forma de foice, enquanto células em forma de lágrima indicam infiltração tumoral da medula óssea ou mielofibrose. Os glóbulos vermelhos direcionados e os glóbulos vermelhos rebolos são anormalidades menos específicas. A anormalidade morfológica mais comum é descrita como “anisocitose moderada, poiquilocitose moderada”. Infelizmente, esta anomalia é tão inespecífica que sua detecção é inútil até mesmo para decidir a presença de uma doença hematológica.
A policromasia deve ser quantificada e os médicos devem estar cientes de que graus variados de policromasia indicam graus variados de estimulação da medula óssea. A granularidade basofílica é mais uma evidência da presença de RNA residual; pode ocorrer com qualquer forma de estimulação do germe eritróide. Os glóbulos vermelhos nucleados devem ser procurados com cuidado, pois sua presença indica estimulação eritroide significativa, insuficiência esplênica ou infiltração da medula óssea por células tumorais.
N. Puletti
A produção de esfregaços de sangue é tecnicamente simples e rápida. Para obter o máximo de informações, a avaliação das células sanguíneas deve ser sistematizada.
Preparação e coloração de esfregaços de sangue
Ao coletar material de um animal idealmente calmo e com diâmetro médio de dilatação da veia, o sangue deve fluir rapidamente para um tubo contendo um anticoagulante. O EDTA (etilenodiaminotetraacetato) é mais frequentemente utilizado porque este anticoagulante permite uma melhor preservação das células sanguíneas em estudo. Porém, para prevenir vários tipos de degradação morfológica das células, o intervalo de tempo entre a coleta de sangue fresco e bem homogeneizado e a preparação do medicamento deve ser o mais curto possível (J.W. Harvey, 2001; D. Walker, 2008).
A coloração clássica difere da coloração rápida. Recentemente, métodos de tingimento rápido como o Diff-Quick® tornaram-se vantajosos por serem resistentes às variações de pH das soluções e à formação de depósitos de corantes. No entanto, eles são menos eficazes na detecção de policromatófilos e não coram bem os grânulos de basófilos e mastócitos (JW Harvey, 2001; D. Walker, 2008). Para obter um padrão visual específico dos reticulócitos, é necessária a coloração com novo azul de metileno (NBM). Num tubo de ensaio de plástico, uma gota de sangue é misturada com duas gotas de NBM. O tubo de ensaio é deixado em temperatura ambiente por 10 minutos. Após a mistura, uma pequena gota é colocada em uma lâmina de vidro e espalhada da mesma forma que no esfregaço de sangue. A lâmina é então rapidamente seca ao ar e examinada sob um microscópio de alta ampliação (×50–×100).
Exame sistemático de esfregaços de sangue
Ao avaliar um esfregaço de sangue, é muito importante guiar-se por um esquema de pesquisa uniforme.
Um esfregaço de sangue, feito em uma camada fina (monocelular) com extremidade arredondada, engrossa em direção à base. As células sanguíneas são avaliadas em uma camada fina, porque uma camada espessa contém pouca informação. Em baixa ampliação (10× ou 20×), a borda do esfregaço, principalmente a extremidade arredondada, é geralmente examinada em busca de agregados plaquetários ou células atípicas largas (linfoblastos ou células dendríticas) (Figura 4). Agregados plaquetários após sua ativação são formados in vitro. Este fenômeno às vezes ocorre como resultado de coleta de sangue difícil, que, por exemplo, é mais frequentemente observada em gatos (E. Duan Lassen, G. Weiser, 2006; SL Stockhman, MA Skott, 2008; D. Walker, 2008).
 |
Foto 4. Microscopia de esfregaço de sangue de um cão saudável (×1000). Coágulos de plaquetas |
O exame de esfregaço de sangue é um método bastante comum que permite o diagnóstico rápido de muitas doenças comuns em cães e gatos. As principais condições para a utilização eficaz deste método diagnóstico são a adesão estrita à técnica de preparo do esfregaço e a pesquisa sistemática de acordo com o algoritmo de pesquisa.
Disposições básicas
Após a coleta, o sangue deve ser rapidamente colocado em um tubo com anticoagulante para preservar a qualidade das células.
A nova coloração com azul de metileno permite a identificação de reticulócitos.
A avaliação é realizada sobre uma fina camada de esfregaço de sangue com leitura ao microscópio ao nível de suas tranças.
O exame sistemático de esfregaço de sangue refere-se ao algoritmo APEL.
SVM nº 5/2010
