O hemograma é uma análise complexa realizada em laboratório, cujo objetivo é calcular o número de células sanguíneas, indicadores de hematócrito e concentração de hemoglobina. O material utilizado é sangue venoso ou capilar. O estudo dos glóbulos vermelhos permite determinar o volume médio das células, o conteúdo de hemoglobina e sua concentração. Normalmente, os médicos avaliam esses parâmetros em relação à norma geralmente aceita de forma abrangente, mas deve-se prestar atenção à interpretação de cada um deles.

O que são glóbulos vermelhos?

Os glóbulos vermelhos são células minúsculas, em forma de disco, elásticas e bicôncavas. Seu tamanho e elasticidade permitem que passem livremente através de capilares estreitos, e o aumento da área de superfície melhora as trocas gasosas. Sua principal função é transportar oxigênio para os tecidos do corpo e retornar dióxido de carbono.

Em 1 mm 3 de sangue nos homens existem aproximadamente 4.500.000 - 5.500.000 glóbulos vermelhos, nas mulheres 4.000.000 - 5.000.000.

Seu número é contado em uma câmara de contagem por meio de analisadores de células sanguíneas. Existe uma chamada regra de três: pelo número de glóbulos vermelhos (RBC na impressão dos resultados da análise), você pode estimar aproximadamente o hematócrito (Ht) e a concentração de hemoglobina (Hb):

RBC 3 = Hb
Hb 3 = Ht

Deve-se lembrar que essa dependência só pode ser utilizada naquelas análises em que as hemácias estejam saudáveis ​​e tenham a estrutura correta.

Conteúdo normal de hemoglobina:

• para homens 13,3-18 ‰;
• para mulheres 11,7-15,8 ‰.

O principal componente dos glóbulos vermelhos é a hemoglobina. É ele quem transfere oxigênio para a mioglobina (substância que armazena O2 nos tecidos). Seu valor pode ser calculado a partir do hematócrito, mas seu valor diagnóstico é limitado. O indicador é usado para avaliar distúrbios no funcionamento do sistema hematopoiético. Como resultado da análise, é designada Hb, medida em gramas por litro (ou seja, em ppm, ‰).

Para completar o quadro, é realizada uma análise de reticulócitos (glóbulos vermelhos imaturos). Eles ainda não têm núcleo celular, mas têm algumas sobras de RNA. Neste estado de “embrião”, flutuam livremente no sangue durante 2 dias, após os quais se transformam em células maduras.

Tabela de valores normais de hemácias:

Este parâmetro indica diretamente a atividade eritropoiética do sistema hematopoiético. Como pode ser visto na tabela, nos homens a norma é maior, o que se deve à maior massa muscular. Infelizmente, a precisão da contagem ao usar um microscópio é baixa, mas esse método está substituindo gradualmente a análise automática, que tem uma precisão significativamente maior.

É necessário levar em consideração não só o número de glóbulos vermelhos no sangue, mas também outros parâmetros

A quantidade de hemoglobina no sangue (derivada pela “regra de três”), o conteúdo de hemoglobina em uma célula (MCH) e seu volume médio (MCV).

• O MCH caracteriza o conteúdo de hemoglobina em cada glóbulo vermelho individual. Este parâmetro é fácil de calcular usando a hemoglobina e o número de glóbulos vermelhos. Os analisadores hematológicos modernos podem determinar este indicador automaticamente. O MCH está correlacionado com os valores de MCV (volume médio de eritrócitos) e MCHC (concentração média de hemoglobina eritrocitária). O MCH é relativamente raramente usado para caracterizar o tipo de anemia;
• VCM – volume celular médio. É o MCV o principal utilizado para caracterizar o tipo de anemia. Novos analisadores hematológicos medem o volume de um único glóbulo vermelho. O valor MCV é o valor médio do volume das células medidas. Os glóbulos vermelhos normalmente têm um tamanho de 80–100 fL (micrômetro cúbico ou femtolitro) e são chamados de normócitos, abaixo de 80 fL são micrócitos e acima de 100 fL são macrócitos. O MCV pode ser calculado pela contagem de células e hematócrito.

MCV=(Ht(%) 10)/(RBC(10^ 12 /l))

Qual é o valor diagnóstico da análise de glóbulos vermelhos?

Os dados desses estudos são utilizados principalmente para o diagnóstico de anemia, sua gravidade e tipo. Mas também são valiosos para além disto: uma alteração em qualquer um dos parâmetros descritos acima pode ser consequência de uma vasta gama de doenças.

Um número aumentado de glóbulos vermelhos tem 2 grupos principais de razões: diminuição do teor de oxigênio no sangue e aumento da formação de eritropoietina. A primeira é típica dos povos montanheses (para eles esta é a norma), aqueles com enfisema e cardiopatias de diversas origens. A segunda é para pacientes com câncer e pessoas que usaram corticoides para tratamento.

Taxas elevadas podem indicar claramente formações no fígado ou nos rins, pois esses órgãos realizam o trabalho de “reciclagem” de células velhas. Em atletas do sexo masculino, a norma pode aumentar com o uso de esteróides anabolizantes, pois seus músculos necessitam de mais oxigênio e o sangue tenta fornecê-lo a eles.

A diminuição é consequência de anemia, hiperidratação e perda aguda de sangue.
A análise do conteúdo médio de hemoglobina em um eritrócito fornece informações sobre a natureza da anemia: ela aumenta nos tipos hipercrômicos e megaloblásticos da doença, bem como naqueles que acompanham a cirrose hepática. Uma diminuição é observada na anemia hipocrômica.

A anemia é descrita como uma diminuição da hemoglobina total. Tais condições são observadas se houver ingestão insuficiente de ferro nos alimentos ou se a necessidade dele for aumentada (gravidez em mulheres, crescimento ativo em crianças e adolescentes). Ao diagnosticá-los, deve-se sempre levar em consideração que a norma é diferente para homens e mulheres, e o indicador muda com a idade. Para diagnosticar anemia, são necessárias análises bioquímicas e hematológicas adicionais.

Os glóbulos vermelhos morrem quando sua casca é danificada, o que é observado quando envenenados por venenos ou sais de metais pesados. Eles recebem danos mecânicos se uma pessoa tiver uma válvula cardíaca artificial.

A taxa de glóbulos vermelhos no sangue de mulheres grávidas pode diminuir. Isto se deve à deficiência de ferro e à grave retenção de água, observada na grande maioria das mulheres.

Para contar os elementos formados, o sangue retirado de um dedo é diluído em misturadores especiais para criar a concentração desejada de células conveniente para a contagem. Uma câmara de contagem especial é preenchida com sangue diluído e o número de elementos formados é contado ao microscópio. Conhecendo o volume da câmara e a diluição do sangue, calcula-se o número de células sanguíneas em 1 μl de sangue total.

Para contar elementos moldados, é usada uma câmara de contagem Goryaev. É uma lâmina de vidro grosso, em cuja parte central existem quatro ranhuras com três áreas estreitas entre elas. A plataforma intermediária é 0,1 mm mais baixa que as laterais e é dividida ao meio por uma ranhura transversal. Em ambos os lados desta ranhura existem grades aplicadas ao vidro. A grade de Goryaev consiste em 225 quadrados grandes, 25 deles são divididos adicionalmente em 16 pequenos. A unidade de referência é um pequeno quadrado. Seu lado é 1/20 mm, a área é 1/20 x 1/20 = 1/400 mm 2. O volume de sangue diluído que cabe acima do pequeno quadrado é 1/400 mm 2 x 1/10 mm = 1/4000 mm 3. Antes do trabalho, você precisa examinar a malha ao microscópio.

Melangers ou misturadores são usados ​​para diluir o sangue. O misturador é um capilar com expansão na parte central. Na área expandida existe uma esfera de vidro para misturar o sangue diluído. Os capilares são marcados com graduações - marcas 0,5 e 1,0. A terceira marca está localizada no misturador: para contagem de glóbulos vermelhos - 101, leucócitos - 11. Para coletar o sangue, um bulbo de borracha é colocado no melangeur, apertando-o e endireitando-o, tanto o sangue quanto as soluções diluidoras são sugados para dentro dele. Para contar os glóbulos vermelhos, o sangue é coletado na melanger até a marca 0,5 e uma solução até a marca 101, enquanto o sangue é diluído 200 vezes. Para contar os leucócitos, o sangue é coletado na melanger até a marca 1 e a solução até a marca 11, enquanto o sangue é diluído 10 vezes.

Ao contar glóbulos vermelhos, uma solução de NaCl a 3% é usada como solução de diluição. Os glóbulos vermelhos diminuem e tornam-se mais visíveis. Na contagem de leucócitos, o sangue é diluído com solução de ácido acético a 5%. Nessas condições, os glóbulos vermelhos são destruídos e apenas os leucócitos (mais precisamente, seus núcleos) permanecem no campo de visão. O ácido acético é corado com azul de metileno e os núcleos dos leucócitos tornam-se mais claramente visíveis.

Normalmente, 1 µl de sangue humano contém uma média de 4,5 a 5 milhões de glóbulos vermelhos (ou 4,5 a 5 em 1 litro).

A câmera é colocada sob um microscópio e a grade é examinada primeiro em baixa e depois em alta ampliação.

Cubra a câmara com uma lamela de vidro, esfregando suas bordas contra o vidro da câmara até aparecerem anéis de arco-íris. Deixando a câmera sob o microscópio, o dedo é picado.

A primeira gota de sangue que sai do dedo é enxugada com um cotonete. A ponta do misturador de hemácias é imersa na segunda gota, mantida verticalmente e o sangue é aspirado até a marca 0,5, garantindo que nenhuma bolha de ar entre no capilar. Limpe a extremidade do capilar com papel de filtro e rapidamente, antes que o sangue coagule, transfira-o para um copo com solução de NaCI, continuando a segurar o misturador na vertical. A solução é levada até a marca 101 (ou seja, o sangue é diluído 200 vezes), após o que o misturador é transferido para a posição horizontal e colocado sobre a mesa.

Para contar glóbulos vermelhos, pegue a batedeira cheia, segure a extremidade inferior com o dedo, retire o bulbo de borracha e, segurando as duas pontas da batedeira com o terceiro e o primeiro dedo, misture o sangue por 1 minuto. Três gotas são liberadas do misturador sobre o algodão e a quarta é aplicada na plataforma intermediária da câmara, na borda da lamínula. Por forças capilares, a própria gota é atraída para dentro da lamela e enche a câmara. O excesso de solução sanguínea flui para o sulco. Se entrar ar na malha ou houver excesso de solução nas plataformas laterais, a câmara deve ser enxaguada com água destilada, seca e enchida novamente. A câmara cheia é colocada sob um microscópio e, se os elementos formados estiverem localizados uniformemente (o que é um indicador de boa mistura do sangue), eles começam a contar. É melhor contar glóbulos vermelhos com ampliação baixa (objetiva x8), mas use uma ocular x15.

Para obter dados mais precisos, é necessário contar o número de glóbulos vermelhos em cinco grandes quadrados localizados em diferentes locais da grade, por exemplo, na diagonal. A contagem é realizada dentro de um pequeno quadrado em fileiras (de cima para baixo). Para evitar a dupla contagem de células situadas na borda entre pequenos quadrados, aplica-se a seguinte regra: “Um determinado quadrado inclui glóbulos vermelhos situados tanto no interior do quadrado como nas suas bordas esquerda e superior; os glóbulos vermelhos situados nas bordas direita e inferior não pertencem a este quadrado.”

Tendo assim contado a soma dos glóbulos vermelhos em cinco quadrados grandes (que são 80 pequenos), é encontrada a média aritmética do número de glóbulos vermelhos num quadrado pequeno. Sabendo que o volume do espaço da câmara acima de um pequeno quadrado é igual a 1/4000 mm 3, multiplique o número encontrado por 4000. Obtém-se o número de glóbulos vermelhos em 1 mm 3 de sangue diluído. Multiplicando pelo valor da diluição (200), obtém-se o número de hemácias em 1 mm 3 de sangue total.

Assim, a fórmula para calcular o número de glóbulos vermelhos é a seguinte:

X = (E 4000 200) /80, onde

X é o número necessário de glóbulos vermelhos em 1 mm 3 (µl) de sangue total, E é a soma dos glóbulos vermelhos em 80 pequenos quadrados.

Como resultado, o número resultante de glóbulos vermelhos é registrado em termos de 1 litro de sangue, ou seja, o número de milhões de glóbulos vermelhos encontrados em 1 mm 3 (μl) é multiplicado por 10 12.

Em humanos e em muitos mamíferos, os glóbulos vermelhos, ou eritrócitos, são células anucleadas e bicôncavas (tabela de cores II). Eles são elásticos, o que os ajuda a passar por capilares estreitos. O diâmetro de um glóbulo vermelho humano é de 7 a 8 mícrons e a espessura é de 2 a 2,5 mícrons. A ausência de núcleo e o formato de uma lente bicôncava (a superfície de uma lente bicôncava é 1,6 vezes maior que a superfície de uma esfera) aumentam a superfície dos glóbulos vermelhos e também garantem uma difusão rápida e uniforme de oxigênio no hemácia.

A superfície total de todos os glóbulos vermelhos humanos é superior a 3.000 m2, o que é 1.500 vezes a superfície do seu corpo.

O número total de glóbulos vermelhos encontrados no sangue humano é enorme. É aproximadamente 10.000 vezes a população do nosso planeta. Se você alinhasse todos os glóbulos vermelhos humanos em uma fileira, obteria uma cadeia com cerca de 180.000 km de comprimento; se colocarmos os glóbulos vermelhos uns sobre os outros, formar-se-ia uma coluna com uma altura superior ao comprimento do equador do globo (50.000-60.000 km).

1 mm 3 de sangue contém de 4.000.000 a 5.000.000 glóbulos vermelhos (para mulheres 4.000.000-4.500.000, para homens 4.500.000 - 5.000.000).

O número de glóbulos vermelhos não é estritamente constante. Pode aumentar significativamente com a falta de oxigênio em grandes altitudes e durante o trabalho muscular. As pessoas que vivem em áreas de alta montanha têm aproximadamente 30% mais glóbulos vermelhos do que os residentes da costa marítima. Não é por acaso que nos primeiros dias de permanência numa zona montanhosa a pessoa sente fraqueza, tonturas e o seu desempenho diminui. Esses fenômenos estão associados ao fornecimento insuficiente de oxigênio ao corpo em condições de ar rarefeito. Porém, depois de algum tempo, o estado da pessoa melhora significativamente, pois o número de glóbulos vermelhos no corpo aumenta e, portanto, o fornecimento de oxigênio melhora. Ao passar de áreas baixas para áreas montanhosas, o número de glóbulos vermelhos no sangue aumenta. Quando a necessidade de oxigênio diminui, o número de glóbulos vermelhos no sangue diminui.

Contagem de glóbulos vermelhos

Os glóbulos vermelhos são contados em câmaras de contagem especiais.

Para contar os elementos formados, o sangue retirado de um dedo é diluído em misturadores especiais para criar a concentração desejada de células conveniente para a contagem. Para diluir o sangue na contagem de glóbulos vermelhos, é usada uma solução hipertônica (3%) de NaCl, na qual os glóbulos vermelhos encolhem.

Misturador(melanger) consiste em um tubo capilar graduado com extensão ovóide (ampola). Uma conta de vidro é colocada na ampola para melhor mistura do sangue (Fig. 5). Estão disponíveis misturadores para contagem de glóbulos vermelhos e brancos. Nos misturadores para glóbulos vermelhos, a esfera dentro da ampola é vermelha e, para glóbulos brancos, é branca. O capilar dos misturadores possui marcas 0,5 e 1,0; indicam metade ou todo o volume do capilar. Acima da expansão ovóide, a marca 101 no misturador RBC significa que a cavidade de expansão (ampolas) tem um volume 100 vezes maior que o volume da cavidade capilar. O misturador de leucócitos possui uma marca I, indicando que a cavidade da ampola é 10 vezes maior que o volume total do capilar. Quando o misturador de glóbulos vermelhos é preenchido com sangue até a marca 1,0 e depois diluído com NaCl a 3% para levar o volume total à marca 101, o sangue será diluído 100 vezes. Ao diluir 200 vezes, coloque sangue no capilar do misturador até a marca 0,5 e adicione o líquido diluidor até a marca 101.

Antes do uso, o misturador deve ser bem lavado e seco soprando ar com uma bomba de jato de água ou um bulbo de borracha. Se o misturador está suficientemente seco é determinado pelo movimento do cordão na ampola: a aderência do cordão nas paredes indica a presença de umidade.

A câmara de contagem é uma lâmina de vidro grosso, em cuja superfície superior existem três plataformas transversais, separadas por reentrâncias (Fig. 6). A plataforma intermediária é 0,1 mm mais baixa que as externas, e quando uma lamínula é colocada nas plataformas laterais, uma câmara de 0,1 mm de profundidade é formada acima da malha da plataforma intermediária. A câmara de Goryaev possui uma ranhura transversal na plataforma intermediária. Em ambos os lados desta ranhura existe uma malha quadrada, cortada por uma divisora ​​especial. O retículo pode ter um padrão diferente dependendo do design da câmera. A grade da câmara de Goryaev tem 225 quadrados grandes, 25 dos quais são divididos em 16 pequenos quadrados cada. Os tamanhos dos pequenos quadrados em uma câmara de qualquer desenho são os mesmos. O lado de um pequeno quadrado é 1/20 mm, portanto sua área é 1/20 × 1/20 = 1/400 (mm 2). Se levarmos em conta que a altura da câmara (a distância da superfície da plataforma intermediária até a lamela) é 1/10 mm, então o volume de sangue acima do pequeno quadrado é igual a: 1/400×1 ⁄10 = 1⁄4000 (mm3).

Experiência 6

Despeje a solução de diluição do sangue (solução de NaCl a 3%) em um copo. Perfure a pele do dedo com uma agulha, limpe a primeira gota de sangue que sai do dedo com um cotonete e, quando aparecer uma gota de sangue de tamanho suficiente no dedo, mergulhe a ponta da batedeira nele . Coloque a ponta do misturador (4 na Fig. 5) na boca e bombeie o sangue até a marca 0,5. Deve-se ter cuidado para garantir que nenhuma bolha de ar entre no capilar. Para isso, a ponta do capilar deve ficar imersa em uma gota de sangue até o final da sucção. Não pressione a torneira contra o dedo para não entupir o orifício da torneira. É preciso tentar evitar que o sangue suba acima da marca indicada na batedeira, mas se isso acontecer, pode-se abaixar com cuidado a ponta do capilar sobre algodão ou papel de filtro, e o nível sanguíneo cairá. Claro, o erro de cálculo aumentará. Em seguida, mergulhe rapidamente a ponta do capilar em líquido de diluição (solução de NaCl a 3%). Sem liberar o sangue do misturador, bombeie a solução diluidora com a boca até a marca 101. O sangue agora será diluído 200 vezes. Ao terminar de coletar o líquido, coloque o misturador na posição horizontal, retire o tubo de borracha, feche o capilar em ambas as extremidades com o polegar e o indicador e misture bem os líquidos na extensão do misturador. Agora abaixe a batedeira horizontalmente sobre a mesa.

Coloque a tampa de vidro firmemente contra as bordas da câmara de contagem para que o vidro não caia quando a câmara tombar. Do misturador, libere 2-3 gotas de líquido em algodão ou papel de filtro e libere a próxima gota da ponta do capilar sob a tampa de vidro para a câmara de contagem. Devido à capilaridade, a mistura de líquidos deve preenchê-la uniformemente e a posição da lamela não deve mudar. Se o vidro “flutuar”, limpe bem a câmara e repita o procedimento de enchimento. Coloque a câmara cheia sob um microscópio.

Em baixa ampliação, conte o número de glóbulos vermelhos em 80 quadrados pequenos, o que corresponde a 5 quadrados grandes, frequentemente representados graficamente. Selecione 5 quadrados grandes diagonalmente em toda a câmara de contagem. Isto é feito para reduzir o erro associado ao enchimento irregular da câmara.

Para facilitar a contagem dos glóbulos vermelhos, desenhe 5 quadrados grandes em um pedaço de papel e divida cada um deles em 16 quadrados pequenos. Depois de contar o número de glóbulos vermelhos em cada pequeno quadrado ao microscópio, escreva esse valor nos quadrados do papel.

Para não cometer erros na contagem e não contar duas vezes os glóbulos vermelhos situados nas bordas entre pequenos quadrados, use a seguinte regra: os glóbulos vermelhos situados tanto dentro do quadrado quanto nas bordas esquerda e superior são considerados pertencentes a um determinado quadrado. Os glóbulos vermelhos situados nas bordas direita e inferior do quadrado não são contados.

O volume de líquido sobre um pequeno quadrado é tomado como ponto de partida para cálculos posteriores. Como é igual a 1/4000 mm 3, o número de glóbulos vermelhos em 1 mm 3 de sangue pode ser calculado multiplicando o número médio de glóbulos vermelhos em um pequeno quadrado por 4.000 e pela quantidade de diluição do sangue.

onde E é o número de glóbulos vermelhos em 1 mm 3 de sangue;

n é o número de glóbulos vermelhos contados em 80 pequenos quadrados;

200 - diluição do sangue.

Quando terminar de contar os glóbulos vermelhos, lave a câmara de contagem e seque-a com gaze limpa.

A importância dos glóbulos vermelhos na manutenção de um ambiente interno constante

A principal função dos glóbulos vermelhos é transportar oxigênio dos pulmões para todas as células do corpo. A hemoglobina encontrada nos glóbulos vermelhos combina facilmente com o oxigênio e o libera facilmente sob certas condições.

O papel dos glóbulos vermelhos também é grande na remoção do dióxido de carbono dos tecidos. Com a participação dos glóbulos vermelhos, o dióxido de carbono formado durante a vida das células é convertido em sais de dióxido de carbono, que circulam constantemente no sangue. Nos capilares dos pulmões, esses sais, novamente com a participação obrigatória dos glóbulos vermelhos, se decompõem para formar dióxido de carbono e água. O dióxido de carbono e parte da água são imediatamente removidos do corpo através do trato respiratório.

Os glóbulos vermelhos mantêm a relativa constância da composição dos gases sanguíneos. Quando sua função é perturbada no ambiente interno do corpo, o conteúdo de dióxido de carbono aumenta acentuadamente e desenvolve-se deficiência de oxigênio, o que tem um efeito prejudicial na atividade de todo o organismo.

Hemoglobina

Os glóbulos vermelhos contêm uma proteína chamada hemoglobina, que dá ao sangue a cor vermelha. A hemoglobina consiste em uma parte proteica - globina- e uma substância não proteica - heme, contendo ferro divalente. Nos capilares dos pulmões, a hemoglobina combina-se com o oxigênio para formar oxihemoglobina.

Nos capilares dos tecidos, a oxiemoglobina se desintegra facilmente para liberar oxigênio e hemoglobina. Isto é facilitado pelo alto teor de dióxido de carbono nos tecidos.

A oxihemoglobina é vermelha brilhante e a hemoglobina é vermelha escura. Isso explica a diferença de cor entre o sangue venoso e o arterial.

A oxiemoglobina tem propriedades de um ácido fraco, o que é importante para manter uma reação sanguínea (pH) constante.

A hemoglobina também pode formar um composto com o dióxido de carbono. Este processo ocorre nos capilares dos tecidos. Nos capilares dos pulmões, onde o teor de dióxido de carbono é muito menor do que nos capilares dos tecidos, a combinação da hemoglobina com o dióxido de carbono é interrompida. Assim, a hemoglobina não transporta apenas oxigênio dos pulmões para os tecidos. Também está envolvido na transferência de dióxido de carbono.

A hemoglobina se liga mais fortemente ao monóxido de carbono (CO). Quando o ar contém 0,1% de monóxido de carbono, mais da metade da hemoglobina no sangue se liga ao monóxido de carbono e, portanto, as células e tecidos não recebem a quantidade necessária de oxigênio. Como resultado da falta de oxigênio, aparecem fraqueza muscular, cãibras, perda de consciência e morte.

Os primeiros socorros para envenenamento por monóxido de carbono consistem em fornecer um fluxo de ar limpo, dar à vítima um chá forte e, em seguida, é necessária intervenção médica.

100 ml de sangue humano contém em média cerca de 16 g de hemoglobina.

A quantidade de hemoglobina é determinada por um método colorimétrico baseado no seguinte princípio: se a solução de teste for levada a uma cor idêntica à solução padrão por diluição, então a concentração de substâncias dissolvidas em ambas as soluções será a mesma, e as quantidades das substâncias serão relacionadas conforme seus volumes. Conhecendo a quantidade de uma substância em uma solução padrão, você pode calcular seu conteúdo na solução teste. Um dispositivo para determinar a quantidade de hemoglobina no sangue é chamado hemômetro.

Hemômetro(Fig. 7) é um tripé cuja parede posterior é feita de vidro leitoso. Três tubos de ensaio do mesmo diâmetro são inseridos em um rack. Os dois tubos externos são selados na parte superior e contêm uma solução padrão de cloridrato de hematina (um composto de hemoglobina com ácido clorídrico). O tubo do meio é graduado e aberto na parte superior. Destina-se ao sangue que está sendo testado. Uma pipeta de 20 mm 3 e uma haste de vidro fina são fixadas ao dispositivo. A solução tomada como padrão contém 16,7 g de hemoglobina por 100 ml. Este conteúdo de hemoglobina é considerado o limite máximo da normalidade e é considerado 100%. Para realizar o estudo, a hemoglobina do sangue teste deve ser convertida em cloridrato de hematina. Essa substância é de cor marrom e sua solução padrão tem cor de chá forte.

Experiência 7

Despeje 0,1 solução normal de ácido clorídrico no tubo intermediário do hemômetro até a marca 10. Colete 20 mm3 de sangue na pipeta especial que acompanha o hemômetro; Depois de limpar a ponta da pipeta com um cotonete (o nível de sangue nela não deve mudar), sopre cuidadosamente o sangue no fundo do tubo de ensaio com ácido clorídrico. Sem retirar a pipeta do tubo de ensaio, lave-o várias vezes com ácido clorídrico. Por fim, encoste a pipeta na lateral do tubo e sopre cuidadosamente o conteúdo. Deixe a solução por 5 a 10 minutos, mexendo com uma vareta de vidro. Este tempo é necessário para a conversão completa da hemoglobina em cloridrato de hematina.

Em seguida, coloque água destilada no tubo de ensaio do meio com uma pipeta até que a cor da solução resultante fique igual à cor do padrão (ao adicionar água, misture a solução com um bastão). Tenha especial cuidado ao adicionar as últimas gotas.

O número localizado ao nível da superfície da solução no tubo de ensaio do meio mostrará o conteúdo de hemoglobina no sangue testado como uma porcentagem em relação à norma, convencionalmente aceita como 100%.

Reação de hemossedimentação (ESR)

Se o sangue for protegido da coagulação e deixado nos tubos capilares por várias horas, os glóbulos vermelhos no sangue começarão a se depositar devido à gravidade. Eles se acomodam a uma certa velocidade. Nas mulheres, a taxa normal de hemossedimentação é de 7 a 12 mm por hora e nos homens é de 3 a 9 mm por hora.

A determinação da velocidade de hemossedimentação tem importante valor diagnóstico na medicina. Com a tuberculose e vários processos inflamatórios no corpo, a taxa de hemossedimentação aumenta.

A reação de hemossedimentação (VHS) é determinada usando um dispositivo Panchenkov (Fig. 8).

O dispositivo é um tripé no qual os tubos capilares são montados na posição vertical. Os capilares são marcados com divisões em milímetros. Além disso, existem mais três marcas em cada capilar: marca K (sangue), marca P (reagente) e marca O, que está no mesmo nível da marca K.

Os eritrócitos são glóbulos vermelhos. Eles têm a forma de um disco bicôncavo.

Funções dos glóbulos vermelhos:

1. Respiratório - transporte de oxigênio e participação no transporte de dióxido de carbono.

2. Adsorção e transporte de nutrientes.

3. Adsorção e transporte de toxinas.

4. Regulação da composição iônica do plasma sanguíneo.

5. Forma as características reológicas do sangue/viscosidade, etc./

Número de glóbulos vermelhos: nos homens 4,5-5,0 milhões por 1 mm3, 4,5-5,0*1012/l; nas mulheres 4,0-4,5 milhões por 1 mm3,4,0-4,5*1012/l.

Eritrocitose - aumento no conteúdo de glóbulos vermelhos. A eritropenia é uma diminuição no conteúdo de glóbulos vermelhos; esta condição também pode ser chamada de “anemia”. São possíveis alterações verdadeiras e falsas no número de glóbulos vermelhos. Mudanças verdadeiras em todo o corpo. Falso - alterações devido a alterações no volume plasmático sanguíneo.

Tamanhos dos glóbulos vermelhos: 6-8 mícrons - normócitos; menos de 6 mícrons - micrócito; 8-10 mícrons - macrócito; mais de 10 mícrons - megalócitos.

Para contar glóbulos vermelhos retire o sangue para o misturador apropriado até a marca 0,5. em seguida, encha a batedeira com solução de cloreto de sódio a 3% até a marca 101. Prenda as pontas do melangeur recheado com 3 e 1 dedos e agite por 1 minuto. Em seguida, sopre 2-3 gotas em um cotonete e aplique 4 gotas na placa intermediária da câmara, na borda da lamínula.

Os glóbulos vermelhos são contados em 5 quadrados grandes, divididos em 16 pequenos. Conte todos os glóbulos vermelhos dentro do quadrado e nos lados superior e esquerdo do quadrado. Com base nos cálculos feitos, calcule o número de glóbulos vermelhos em 1 mm 2 de sangue usando a fórmula:

X é o número de glóbulos vermelhos;

um número de glóbulos vermelhos, contados em 5 quadrados grandes;

200 graus de diluição do sangue.

126. Hemoglobina. As principais funções dos glóbulos vermelhos são determinadas pela presença em sua composição de uma proteína cromoproteica especial - a hemoglobina. O peso molecular da hemoglobina humana é 68.800. A hemoglobina consiste em proteínas (globina) e partes contendo ferro (heme). Existem 4 moléculas heme por 1 molécula de globina. No sangue de uma pessoa saudável, o conteúdo de hemoglobina é de 120-165 g/l (120-150 g/l para mulheres e 130-160 g/l para homens). Nas gestantes, o teor de hemoglobina pode cair para 110 g/l, o que não é uma patologia. O principal objetivo da hemoglobina é o transporte de O2 e CO2. Além disso, a hemoglobina possui propriedades tamponantes, bem como a capacidade de se ligar a algumas substâncias tóxicas. A hemoglobina em humanos e em vários animais tem estruturas diferentes. Isso se aplica à parte proteica - globina, já que o heme em todos os representantes do mundo animal tem a mesma estrutura. O heme consiste em uma molécula de porfirina, no centro da qual existe um íon Fe2+ capaz de se ligar ao O2. A estrutura da parte proteica da hemoglobina humana é heterogênea, devido à qual a parte proteica é dividida em várias frações. A maior parte da hemoglobina de um adulto (95-98%) consiste na fração A (do latim adultus - adulto); de 2 a 3% de toda a hemoglobina está na fração A2; finalmente, nos glóbulos vermelhos de um adulto existe a chamada hemoglobina fetal (do latim feto - feto), ou hemoglobina F, cujo conteúdo normalmente está sujeito a flutuações significativas, embora raramente exceda 1-2%. As hemoglobinas A e A2 são encontradas em quase todos os glóbulos vermelhos, enquanto a hemoglobina F nem sempre está presente neles. A hemoglobina F é encontrada predominantemente no feto. No momento em que a criança nasce, isso representa 70-90%. A hemoglobina F tem maior afinidade pelo O2 do que a hemoglobina A, o que permite que os tecidos fetais não sofram hipóxia, apesar da tensão relativamente baixa de O2 no sangue. A hemoglobina tem a capacidade de formar compostos com O2, CO2 e CO. A hemoglobina que adicionou O2 é chamada de oxiemoglobina (HHbO2); a hemoglobina que liberou O2 é chamada de reduzida ou reduzida (HHb). No sangue arterial predomina o conteúdo de oxiemoglobina, o que lhe confere uma cor escarlate. No sangue venoso, até 35% de toda a hemoglobina é HHb. Além disso, parte da hemoglobina se liga ao CO2 através do grupo amina, formando a carbohemoglobina (HHbCO2), por meio da qual é transferido 10 a 20% de todo o CO2 transportado no sangue.

A hemoglobina é capaz de formar uma ligação bastante forte com o CO. Este composto é denominado carboxihemoglobina (HHCO). A afinidade da hemoglobina pelo CO é muito maior do que pelo O2, portanto a hemoglobina, que está ligada ao CO, é incapaz de se ligar ao O2. No entanto, quando o O2 puro é inalado, a taxa de decomposição da carboxihemoglobina aumenta acentuadamente, o que é usado na prática para tratar o envenenamento por CO.

Agentes oxidantes fortes (ferrocianeto, sal de Bertholet, peróxido de hidrogênio, etc.) alteram a carga de Fe2+ para Fe3+, resultando na formação de hemoglobina oxidada - um forte composto de hemoglobina com O2, chamado metemoglobina. Nesse caso, o transporte de O2 é interrompido, o que leva a graves consequências para o ser humano e até à morte.

Índice de cores

O conteúdo de hemoglobina nos eritrócitos é avaliado pelo chamado índice de cor, valor relativo que caracteriza a saturação de um eritrócito médio com hemoglobina. Fi é a proporção percentual de hemoglobina e glóbulos vermelhos, enquanto 100% (ou unidades) de hemoglobina é convencionalmente considerado 166,7 g/l, e 100% de glóbulos vermelhos é 5*10/l. Se uma pessoa tem um conteúdo de hemoglobina e glóbulos vermelhos de 100%, o índice de cor é 1. Normalmente, Fi varia de 0,75 a 1,0 e muito raramente pode chegar a 1,1. Nesse caso, os glóbulos vermelhos são chamados de normocrômicos. Se Fi for inferior a 0,7, esses glóbulos vermelhos estão subsaturados com hemoglobina e são chamados de hipocrômicos. Quando Fi é maior que 1,1, os glóbulos vermelhos são chamados de hipercrômicos. Nesse caso, o volume do glóbulo vermelho aumenta significativamente, o que permite conter maior concentração de hemoglobina. Como resultado, cria-se a falsa impressão de que os glóbulos vermelhos estão supersaturados com hemoglobina. Hipo e hipercromia ocorrem apenas na anemia. A determinação do índice de cor é importante para a prática clínica, pois permite o diagnóstico diferencial de anemias de diversas etiologias.

127.Leucócitos (glóbulos brancos) representam formações
de vários formatos e tamanhos. Com base na sua estrutura, os leucócitos são divididos em dois grupos: granulares (granulócitos) e não granulares (agranulócitos). Os granulócitos incluem neutrófilos, eosinófilos e basófilos, e os agranulócitos incluem linfócitos e monócitos.
Normalmente, a contagem de glóbulos brancos em adultos varia de 4,5 a
9 mil em 1 mm3, ou 4,5-9 10 em 9 graus/l. Um aumento no número de leucócitos além
normal é chamado de leucocitose, uma diminuição é chamada de leucopenia. Leucocitose fisiológica. Leucopenia
Os seguintes tipos de leucocitose fisiológica são diferenciados.
A leucocitose dietética ocorre após comer. Neste caso o número
os leucócitos aumentam ligeiramente (em média 1-3 mil por microlitro) e raramente ultrapassam a norma fisiológica superior. Na leucocitose induzida por alimentos, um grande número de leucócitos se acumula na submucosa do intestino delgado. Aqui eles desempenham uma função protetora (impedem a entrada de agentes estranhos no sangue e na linfa). A leucocitose nutricional é de natureza redistributiva e é garantida pela entrada de leucócitos na circulação a partir do depósito de sangue.
A leucocitose miogênica é observada após a realização de trabalho muscular pesado. O número de leucócitos pode aumentar de 3 a 5 vezes.
Um grande número de leucócitos se acumula nos músculos durante a atividade física. A leucocitose miogênica é redistributiva e
e de caráter verdadeiro, pois com ela ocorre aumento da hematopoiese da medula óssea.
Leucocitose emocional, bem como leucocitose devido à estimulação dolorosa,
é de natureza redistributiva e raramente atinge valores elevados. A leucocitose ovulatória é caracterizada por um ligeiro aumento no número de leucócitos enquanto reduz o número de eosinófilos.
Durante a gravidez, um grande número de leucócitos se acumula na submucosa do útero. Esta leucocitose é principalmente de natureza local. Seu significado fisiológico não é apenas impedir a entrada de infecções no corpo da mãe, mas também estimular a função contrátil do útero.
Durante o parto, o número de glóbulos brancos aumenta devido ao aumento no número de neutrófilos. O conteúdo dos glóbulos brancos já está no início
o trabalho pode chegar a mais de 30.000 em 1 µl. A leucocitose pós-parto persiste por 3-5 dias e está associada ao fornecimento de leucócitos do depósito de sangue e da reserva de medula óssea.
A leucopenia ocorre apenas em condições patológicas. Leucopenia particularmente grave pode ser observada com danos à medula óssea - leucemia aguda e doença da radiação.
Fórmula de leucócitos
Em condições normais e patológicas, não apenas o número de leucócitos é levado em consideração, mas também sua porcentagem, que é chamada de leucócitos
fórmulas ou leucogramas. No sangue de uma pessoa saudável, podem ser encontrados leucócitos maduros e jovens, mas normalmente eles só podem ser detectados no maior grupo - os neutrófilos. Estes incluem neutooils juvenis e bastonetes. Um aumento no número de neutrófilos jovens e em banda indica rejuvenescimento do sangue e é chamado de mudança na fórmula leucocitária para a esquerda; uma diminuição no número dessas células indica envelhecimento do sangue e é chamada de mudança na fórmula dos leucócitos para a direita.
Fórmula de leucócitos de uma pessoa saudável
Neutrófilos: metamielócitos 0-1%, banda 1-4, segmentados 50-65,
Agranulócitos: basófilos 0-1, eosinófilos 1-4
linfócitos 25-40
Características de tipos individuais de leucócitos
Neutrófilos
Os neutrófilos contêm uma rica gama de substâncias biologicamente ativas, incluindo aquelas capazes de matar bactérias, vírus e células cancerígenas. Os neutrófilos são móveis, penetram facilmente no espaço extravasal do tecido e são altamente ativos. Quando estimulados, os neutrófilos rapidamente
percebem seu material citolítico em relação às células infectadas por vírus e tumorais e podem desencadear nelas programas genéticos de apoptose.
Os neutrófilos realizam um efeito citotóxico (matando) contra células estranhas individuais.
Tendo função fagocítica, os neutrófilos absorvem não apenas
bactérias, mas também produtos de danos nos tecidos.
Basófilos.
A função dos basófilos e mastócitos se deve à presença neles de uma série de
substâncias biologicamente ativas. Estes incluem principalmente a histamina, que dilata os vasos sanguíneos. Os basófilos contêm substâncias anticoagulantes - heparina, sulfatos de condroitina A e C, sulfato de dermatano e sulfato de heparano.

Método de contagem na câmara

O princípio do método de contagem de leucócitos é semelhante ao princípio da contagem de eritrócitos; sua essência é medir com precisão o sangue e diluí-lo em um determinado volume de líquido, seguido da contagem dos elementos celulares em uma câmara de contagem e recálculo do resultado por 1 ml de sangue.

Equipamentos e reagentes:

1. Misturadores ou tubos para contagem de leucócitos.

2. Solução de ácido acético a 3%, à qual são adicionadas algumas gotas de violeta de metila ou azul de metileno.

3. Câmara de contagem.

4. Microscópio.

O misturador para leucócitos difere do misturador para eritrócitos por possuir um lúmen capilar mais amplo e um reservatório menor. Existem 3 marcas no misturador: 0,5, 1,0 e 11. Isso permite diluir o sangue 10 ou 20 vezes (mais frequentemente é diluído 20 vezes).

Progresso do estudo. Ao coletar sangue para contar leucócitos, primeiro remova o sangue restante da pele com um cotonete e, apertando levemente o dedo, solte uma nova gota de sangue. Ao trabalhar com misturadores, o sangue é coletado até a marca 0,5 e depois diluído com uma solução de ácido acético a 3% até a marca 11. Agite vigorosamente por 3 minutos, após os quais 1-2 gotas são drenadas e a câmara de contagem é preenchida. Ao trabalhar com tubos de ensaio para contagem de leucócitos, despeje 0,4 ml de uma solução de ácido acético a 3% e libere nele 0,02 ml de sangue, medido com uma pipeta de um hemômetro Sali. Agite bem os tubos de ensaio, coloque a pipeta no líquido e, após coletar o conteúdo, encha a câmara de contagem. Como há muito menos leucócitos do que glóbulos vermelhos, para maior precisão a contagem é realizada em 100 quadrados grandes (não representados graficamente). Geralmente existem 1-2 leucócitos em um quadrado grande. O número de leucócitos em 1 μl de sangue é calculado de forma semelhante ao cálculo do número de eritrócitos usando a fórmula:

X = (A x 4000 x B)/B,

onde X é o número de leucócitos em 1 μl de sangue; A é o número de leucócitos contados em 1.600 pequenos quadrados; B - número de quadradinhos contados (1600); 4000 é o valor pelo qual multiplicamos para obter o número de células em 1 µl.

128. Hemostasia vascular-plaquetária. Plaquetas características estruturais, quantidade, funções. A hemostasia vascular-plaquetária é reduzida à formação de um tampão plaquetário ou trombo plaquetário. Convencionalmente, é dividido em três etapas: 1) vasoespasmo temporário (primário); 2) formação de tampão plaquetário devido à adesão (fixação à superfície danificada) e agregação (aderência) das plaquetas; 3) retração (contração e compactação) do tampão plaquetário.

Imediatamente após a lesão, observa-se um espasmo primário dos vasos sanguíneos, pelo que o sangramento pode não ocorrer nos primeiros segundos ou ser limitado. O espasmo vascular primário é causado pela liberação de adrenalina e norepinefrina no sangue em resposta à estimulação dolorosa e não dura mais do que 10-15 segundos. Posteriormente, ocorre um espasmo secundário devido à ativação das plaquetas e à liberação de agentes vasoconstritores no sangue - serotonina, TxA2, adrenalina, etc.

Os danos aos vasos sanguíneos são acompanhados pela ativação imediata das plaquetas, que se deve ao aparecimento de altas concentrações de ADP (a partir do colapso dos glóbulos vermelhos e dos vasos lesionados), bem como à exposição do subendotélio, do colágeno e das estruturas fibrilares. Como resultado, os receptores secundários “abrem” e são criadas condições ideais para adesão, agregação e formação de tampões plaquetários.

A adesão se deve à presença no plasma e nas plaquetas de uma proteína especial - o fator de von Willebrand (FW), que possui três centros ativos, dois dos quais se ligam a receptores plaquetários expressos e um a receptores do subendotélio e fibras colágenas. Assim, com a ajuda do FW, a plaqueta fica “suspensa” na superfície lesionada do vaso.

Simultaneamente à adesão, ocorre a agregação plaquetária, realizada com o auxílio do fibrinogênio - proteína contida no plasma e nas plaquetas e que forma pontes de ligação entre elas, o que leva ao aparecimento de um tampão plaquetário.

Um complexo de proteínas e polipeptídeos chamados “integrinas” desempenha um papel importante na adesão e agregação. Estes últimos servem como agentes de ligação entre as plaquetas individuais (quando aderem umas às outras) e as estruturas do vaso danificado. A agregação plaquetária pode ser reversível (após a agregação vem a desagregação, isto é, desintegração dos agregados), o que depende de uma dose insuficiente do agente agregador (ativador).

A partir das plaquetas que sofreram adesão e agregação, os grânulos e os compostos biologicamente ativos que contêm são intensamente secretados - ADP, adrenalina, norepinefrina, fator P4, TxA2, etc. agregação. Simultaneamente à liberação de fatores plaquetários, forma-se trombina, que aumenta acentuadamente a agregação e leva ao aparecimento de uma rede de fibrina na qual eritrócitos e leucócitos individuais ficam presos.

Graças à proteína contrátil trombostenina, as plaquetas são puxadas umas para as outras, o tampão plaquetário se contrai e engrossa, ou seja, ocorre sua retração.

Normalmente, parar o sangramento de pequenos vasos leva de 2 a 4 minutos.

Um papel importante na hemostasia vascular-plaquetária é desempenhado pelos derivados do ácido araquidônico - prostaglandina I2 (PgI2), ou prostaciclina, e TxA2. Mantendo a integridade da cobertura endotelial, a ação do Pgl prevalece sobre o TxA2, pelo que não se observa adesão e agregação plaquetária no leito vascular. Quando o endotélio é danificado no local da lesão, a síntese de Pgl não ocorre e então a influência do TxA2 se manifesta, levando à formação de um tampão plaquetário.

Estrutura plaquetária:(150-300x109/l.)

As placas vermelhas do sangue que não têm núcleo não se dividem. Elas têm várias zonas - zona periférica sol-gel, organelas intracelulares. Na superfície externa da zona periférica existe uma cobertura de até 50 nm de espessura, contendo fatores plasmáticos de coagulação sanguínea, enzimas, receptores necessários para ativação plaquetária, sua adesão (adesão ao subendotélio) e agregação (adesão entre si).

Zona periférica. A membrana contém "fator fosfolipídico de membrana 3" - uma "matriz fosfolipídica" que forma complexos de coagulação ativos com fatores de coagulação plasmáticos. A membrana é rica em ácido araquidônico, a partir do qual a fosfolipase A2 forma ácido araquidônico livre para a síntese de prostaglandinas. A bicamada lipídica da membrana plaquetária contém glicoproteínas 1 (subunidades 1a, 1b, 1c), 2 (subunidades 2a, 2b), 3 (subunidades 3a, 3b), 4, 5, 6, que determinam as funções adesivas e de agregação das plaquetas . Zona sol-gel do hialoplasma adjacente à borda inferior da zona periférica da plaqueta e separa a zona de organelas intracelulares. Nesta zona, ao longo da borda da célula, está localizado o aparelho contrátil da plaqueta - o anel marginal dos microtúbulos em contato com o microfilamento . Zona de grânulos densos e alfa do tipo 1 e 2. Grânulos densos contêm ADP, ATP, cálcio, serotonina, norepinefrina e epinefrina . O cálcio está envolvido na regulação da adesão, contração, secreção de plaquetas, ativação de suas fosfolipases e produção de prostaglandinas na membrana plaquetária necessárias para a formação do tromboxano A 2. Os grânulos alfa tipo 1 contêm e secretam fator plaquetário anti-heparina 4, crescimento plaquetário fator, trombospondina. Os grânulos alfa tipo 2 contêm enzimas lisossomais (hidrolases ácidas). Após adesão ou agregação, a maioria dos grânulos das plaquetas desaparece. Este fenômeno é chamado de “reação de liberação de grânulos”. Ocorre na área de ativação plaquetária por tromboxano A2, ADP, adrenalina, trombina, enzimas proteolíticas, endotoxinas bacterianas e colágeno.