O câncer de mama é uma doença perigosa, ocupando estatisticamente o primeiro lugar entre as doenças cancerosas em mulheres. O risco de desenvolver esta doença aumenta em todas as mulheres com mais de 40 anos e pode ser devido a vários outros fatores. As causas mais prováveis ​​do câncer de mama incluem obesidade, predisposição genética ou hereditária, início precoce da menstruação e conclusão tardia, terapia hormonal ou radioterapia.

Além disso, o risco de morbidade aumenta em mulheres nulíparas e mulheres que já tiveram câncer. Os homens também podem ter câncer de mama.

Tipos e métodos de diagnóstico

A primeira etapa do diagnóstico do câncer de mama é um exame de rotina realizado por um mamologista. Mulheres com mais de 40 anos devem realizar esses exames pelo menos uma vez a cada dois anos. O médico realiza exame visual, palpação e mamografia das glândulas mamárias. Os sinais visuais do desenvolvimento da doença podem incluir:

informações gerais

A radiografia da mama (mamografia) permite determinar a presença, tamanho e localização do tumor. Para aumentar a precisão dos resultados obtidos, é utilizada a tecnologia de introdução de um agente de contraste. Se um tumor já foi detectado, então é utilizado o método de pneumocistografia - remoção do fluido tumoral e introdução de ar na cavidade. Se a presença de um tumor não for especificada, então a ductografia é usada - a introdução de um agente de contraste nos dutos de leite.

Esses métodos permitem visualizar a presença de formações no tecido mamário.

Se a presença de um tumor também se tornar evidente na mamografia, o paciente é encaminhado para um conjunto de medidas diagnósticas:

Usando um ultrassom, o médico pode distinguir um tumor de um cisto e esclarecer a localização da formação. Depois disso, uma amostra de tecido é retirada para biópsia. Uma biópsia permite descobrir o tipo de tumor: benigno ou maligno, e também determinar se o tumor é dependente de hormônios. Essas informações permitem ao médico decidir a estratégia de tratamento, mas nem sempre permitem determinar o estágio. Muitas vezes, mesmo com todas as medidas diagnósticas necessárias, só pode ser determinado após a cirurgia.

Mecanismo de estudos histológicos

Uma biópsia de tecido é realizada antes e depois da cirurgia. O procedimento é realizado após esclarecida a localização da formação.

A biópsia é o processo de retirada de um pedaço de tecido, e seu estudo é denominado “exame histológico” ou simplesmente “histologia”.

Um profissional médico usa uma agulha especial para remover uma pequena quantidade de tecido do tumor, ou um tumor que já foi removido do corpo do paciente é enviado para exame histológico. Em seguida, o fragmento de tecido é especialmente corado e processado para aumentar o contraste e facilitar o estudo. Um especialista examina o corte ao microscópio e dá uma opinião sobre a qualidade da formação do tumor. Muito neste estudo depende da atenção e qualificação do técnico de laboratório que dá a conclusão.

Um estudo semelhante é a imunohistoquímica. Em geral, também pode ser chamada de “histologia”, porque o método é baseado no estudo de tecidos, mas a imunohistoquímica é um método de análise mais avançado. Neste estudo, o tecido também é corado com reagentes especiais, que não só melhoram o contraste visual, mas também se combinam (“marcar”) com anticorpos de forma especial, o que permite esclarecer mais características do tumor. Neste caso, a reação ocorre muito mais rapidamente, o que permite obter rapidamente os resultados da análise.

A imunohistoquímica permite não só esclarecer o tipo de tumor, mas também planejar uma estratégia de tratamento do paciente baseada na identificação da sensibilidade do tecido tumoral a diversos tipos de efeitos terapêuticos. Além disso, este estudo é o mais automatizado possível, o que permite minimizar a probabilidade de erro diagnóstico devido ao fator humano.

Existem também medidas diagnósticas modernas que permitem detectar a presença de um tumor no corpo: trata-se de um exame de sangue espectral, análise imunológica (bioquímica), teste FISH de tecido tumoral. Um exame de sangue genético permite que qualquer mulher verifique se ela tem ou não os pré-requisitos para o câncer de mama. A tomografia computadorizada e a ressonância magnética permitem determinar com precisão a localização do tumor e monitorar a dinâmica de seu desenvolvimento, avaliando a estrutura do tumor.

Como detectar o câncer usando um exame de sangue?

Um exame de sangue geralmente é prescrito por um médico após um exame de ultrassom. Há situações em que uma paciente, por iniciativa própria, doa sangue para marcadores de janela ou análise genética para identificar predisposição ao câncer de mama. Em alguns casos, um exame de sangue geral pode ser um motivo para entrar em contato com uma clínica oncológica (juntamente com a palpação de um nódulo ou sinais visuais de câncer).

Análise bioquímica

O sangue como material de pesquisa permite a realização das seguintes medidas diagnósticas:

Ao mesmo tempo, apenas as duas primeiras análises podem ser chamadas de métodos especializados de determinação do câncer, sendo a segunda mais uma medida preventiva do que operacional. Dois outros exames de sangue são realizados principalmente antes da cirurgia para determinar a condição do corpo e a extensão do processo. Porém, como já mencionado, se for sentido um caroço no peito e um exame de sangue geral mostrar mais de dois coeficientes diagnósticos negativos, esse é um motivo para consultar um especialista. Coeficientes negativos são indicadores fora da norma em determinados parâmetros da composição sanguínea.

Um exame bioquímico de sangue pode detectar a presença de anticorpos contra células tumorais. Esses corpos são chamados de marcadores tumorais. O número e tipo de marcadores tumorais dependem da especificidade (localização) do tumor cancerígeno e do estágio de seu desenvolvimento. Os marcadores tumorais incluem:

No caso do cancro da mama, o médico assistente estará principalmente interessado na presença do marcador tumoral CA-15-3, uma vez que a sua presença no sangue indica claramente cancro da mama. A decodificação do resultado leva em média um dia. A análise bioquímica é realizada várias vezes durante o curso da doença. O sangue para isso é retirado de uma veia na primeira metade do dia com o estômago vazio. Duas semanas antes do exame, o paciente deixa de tomar todos os medicamentos (a confirmar com o médico assistente). Dois dias antes de doar sangue, você não deve ingerir bebidas alcoólicas, alimentos gordurosos ou fritos.

Uma hora antes do procedimento não se deve fumar e é aconselhável diminuir o estresse emocional. O sangue geralmente não é doado para análise bioquímica imediatamente após a radiação e o tratamento fisioterapêutico.

Determinação de fatores genéticos

Antes de falar em exames genéticos de sangue, vale ressaltar a diferença entre os conceitos de “genético” e “hereditário”. O fator genético do câncer é um conceito mais amplo que implica não apenas a presença de parentes com câncer de mama, mas também uma mutação genética específica que aumenta o risco desta doença.

A hereditariedade implica um risco potencial de câncer de mama com base na história familiar. Ao mesmo tempo, não só as mulheres, mas também os homens podem receber o gene mutante, mas seu portador não necessariamente adoecerá.

Qualquer mulher pode fazer testes genéticos. Isto é especialmente recomendado para aqueles cujos parentes diretos tiveram câncer de mama. Antes de doar sangue para análise, o paciente deve conversar com um especialista na área de genética, que explicará as nuances da decifração dos resultados. Nenhuma preparação especial é necessária do paciente antes de doar sangue.

Se você receber um resultado positivo para a mutação do gene BRCA, mas na ausência de outros sintomas alarmantes, não há necessidade de pânico. Mulheres com mutações nesses genes podem ser aconselhadas a realizar autoexames e exames físicos regulares como medidas preventivas. Depois dos 40 anos, faz sentido pensar em remover os ovários e os seios; às vezes, recomenda-se que mulheres mais jovens que não planejam ter filhos no futuro tomem anticoncepcionais. A decisão sobre essas medidas recai inteiramente sobre os ombros da própria mulher e requer uma abordagem cuidadosa e consulta com os médicos.

Os mais recentes métodos de diagnóstico

Um exame de sangue espectral revela a presença de tumores no corpo com probabilidade de até 93%. Trata-se de um método diagnóstico relativamente barato, que se baseia na irradiação do soro sanguíneo com espectro infravermelho e na análise de sua composição molecular.

A conclusão do exame de sangue espectral é dada de acordo com o princípio da “presença-ausência” e visa identificar a maioria dos tipos de tumores malignos. Este teste também pode determinar o estágio de desenvolvimento do câncer de mama. Os resultados são decifrados em laboratório e não requerem parecer médico adicional.

Para doar sangue para análise espectral é necessário interromper o uso dos medicamentos 2 meses antes do procedimento. Devem decorrer pelo menos 3 meses a partir do momento da radiografia ou outra irradiação, bem como da quimioterapia. Além disso, a mulher não deve estar grávida ou menstruada no momento da coleta de sangue. A coleta de sangue ocorre com o estômago vazio na primeira metade do dia. Um exame de sangue espectral leva em média 12 dias úteis.

Um dos mais novos métodos para diagnosticar o câncer é o chamado “teste do peixe” (FISH, hibridização fluorescente). Sua eficácia ainda está em discussão; a principal questão de sua viabilidade é o caro procedimento de pesquisa. A essência do método é marcar fragmentos celulares com uma composição fluorescente e posterior exame microscópico das células. Com base em quais partes do material genético os fragmentos marcados estão associados, pode-se entender se o paciente tem predisposição ao câncer e quais métodos de tratamento serão relevantes em um determinado caso.

O teste FISH não requer células totalmente maduras, por isso é muito mais rápido de realizar do que outros testes laboratoriais. Além disso, o método FISH permite observar com mais clareza os danos genéticos, o que é impossível de fazer com outros tipos de análise. O teste FISH é mais frequentemente usado para detectar o câncer de mama, mas também funciona para detectar vários outros tipos de câncer.

As desvantagens do teste FISH incluem, além do alto custo, a incapacidade de trabalhar em algumas regiões cromossômicas devido à especificidade dos marcadores. Além disso, o teste FISH ignora alguns tipos de mutações e quebras no código genético, o que pode ser uma omissão importante no diagnóstico. Estudos comparativos do FISH com o teste IHC mais barato não mostraram nenhuma vantagem significativa na determinação da suscetibilidade das células cancerígenas ao Herceptin. No entanto, o teste FISH é atualmente o mais rápido entre os métodos de alta precisão para o diagnóstico de câncer.

O método de coloração FISH (hibridização in situ fluorescente) foi desenvolvido no Laboratório Nacional Livermore (EUA) em 1986. Este é um método fundamentalmente novo para estudar cromossomos - um método de detecção fluorescente de DNA por hibridização in situ com sondas moleculares específicas. O método baseia-se na capacidade do DNA cromossômico de se ligar, sob certas condições, a fragmentos de DNA (sondas de DNA), que incluem sequências de nucleotídeos complementares ao DNA cromossômico. As sondas de DNA são pré-marcadas com substâncias especiais (por exemplo, biotina ou digoxigenina). Sondas de DNA marcadas são aplicadas a preparações citogenéticas de cromossomos em metáfase preparados para hibridização. Após a hibridação, as preparações são tratadas com corantes fluorescentes especiais conjugados com substâncias que podem se ligar seletivamente à biotina ou à digoxigenina. Cada cromossomo tem uma cor específica. A hibridização também pode ser realizada com sondas marcadas radioativamente. A análise citogenética é realizada sob microscópio fluorescente sob luz ultravioleta.

O método FISH é usado para detectar pequenas deleções e translocações. As trocas cromossômicas (translocações e dicêntricas) entre cromossomos de cores diferentes são facilmente definidas como estruturas multicoloridas.

Fim do trabalho -

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Não. Nome completo Genótipo Ivanov AA Petrov Aa

Genótipo observado e frequências alélicas
Genótipos, alelos Número de casos Frequência (em frações) AA 1/5 = 0,2 Aa

Frequências observadas e esperadas de genótipos e alelos
Número observado de casos Frequência observada Frequência esperada de AA (p2)

Genótipo observado e frequências alélicas
Não. Capacidade de enrolar a língua em um tubo Genótipos eu posso (sim) A_

O teste FISH é um dos métodos mais modernos de análise do conjunto cromossômico. A própria abreviatura “FISH” vem do nome inglês da técnica - hibridização fluorescente in situ. Este teste permite estudar o material genético de uma célula com alta precisão (incluindo genes específicos e seus segmentos).

Esse método é utilizado hoje para diagnosticar certos tipos de tumores cancerígenos, uma vez que a degeneração maligna de uma célula é causada por alterações em seu genoma. Assim, tendo detectado anormalidades características nos genes, é possível classificar esta célula como cancerosa com alta certeza. Além disso, o teste FISH é utilizado para confirmar um diagnóstico já estabelecido, bem como para obter dados adicionais sobre a possibilidade de utilização de quimioterápicos específicos com a finalidade de realizar quimioterapia para câncer de mama e esclarecer o prognóstico da doença.

Um bom exemplo da utilização do teste FISH é quando ele é utilizado em pacientes com câncer de mama. Com esta técnica, o tecido da biópsia é examinado em busca de cópias de um gene chamado HER-2. Se este gene estiver presente, significa que existe um grande número de receptores HER2 localizados na superfície das células. Eles são sensíveis a sinais que estimulam o desenvolvimento e a proliferação de elementos tumorais. Nesse caso, abre-se a oportunidade para o uso eficaz do trastuzumabe - esse medicamento bloqueia a atividade dos receptores HER2 e, portanto, inibe o crescimento do tumor.

Como é realizado o teste FISH?

Durante o exame, uma substância corante especial contendo rótulos fluorescentes é introduzida no biomaterial obtido do paciente. Sua estrutura química é tal que são capazes de se ligar exclusivamente a regiões claramente definidas do conjunto cromossômico da célula. A amostra de tecido corado é então colocada sob um microscópio de fluorescência. Se um pesquisador detecta trechos de cromossomos com marcas luminosas fixadas, então este é um indicador de desvios que indicam a presença de alterações genômicas relacionadas ao tipo oncológico.

Esses desvios na estrutura dos cromossomos são de vários tipos:
translocação – movimento de parte do material cromossômico para uma nova posição dentro do mesmo ou de outro cromossomo;
inversão – rotação de uma parte de um cromossomo em 1800 sem separação de seu corpo principal;
deleção – perda de qualquer região cromossômica;
duplicação é a cópia de parte de um cromossomo, o que leva ao aumento do número de cópias do mesmo gene contido em uma célula.

Cada um desses distúrbios carrega certos sinais e informações diagnósticas. Por exemplo, as translocações podem indicar a presença de leucemia, linfomas ou sarcomas, e a presença de duplicações genéticas ajuda a prescrever a terapia mais eficaz.

Qual é a vantagem do teste FISH?

Comparado às análises tradicionais do material genético das células, o teste FISH é muito mais sensível. Ele permite detectar até mesmo as menores alterações no genoma que não podem ser detectadas por outros métodos.

Outra vantagem do teste FISH é que ele pode ser utilizado em material obtido recentemente do paciente. Para a análise citogenética padrão, é necessário primeiro cultivar uma cultura celular, ou seja, permitir que as células do paciente se multipliquem em laboratório. Este processo leva cerca de 2 semanas, e outra semana é gasta na realização de um teste regular, enquanto o resultado de um teste FISH será obtido em apenas alguns dias.

O desenvolvimento constante da ciência médica está gradualmente a levar a uma redução no custo do teste FISH e à sua inclusão cada vez mais generalizada na prática diária dos oncologistas.

Os métodos invasivos de diagnóstico pré-natal permitem não apenas olhar para o futuro e prever com segurança se o feto enfrentará doenças associadas a malformações intrauterinas, mas também descobrir a natureza e as causas das patologias congênitas.

No entanto, qualquer informação só é valiosa se for oportuna. Quando se trata do estado de desenvolvimento fetal, a rapidez na obtenção dos resultados dos exames torna-se de vital importância.

Portanto, o método FISH, que permite avaliar a presença das anomalias de desenvolvimento mais comuns em um embrião no menor tempo possível, é muito procurado no diagnóstico genético.

FISH é uma abreviatura que decifra a essência da tecnologia de detecção de anomalias cromossômicas - hibridização fluorescente in situ - hibridização fluorescente em ambiente “doméstico”.

Esta técnica, proposta no final dos anos 70 do século passado por J. Goll e M.-L. Pardew, baseia-se na possibilidade de restaurar a sequência de fragmentos de ácidos nucleicos (DNA ou RNA) após sua desnaturação.

Os autores desenvolveram um método que permite, por meio da hibridização in situ de sondas de DNA marcadas (sondas) criadas artificialmente e de material citogenético levado para análise, identificar desvios quantitativos e qualitativos dos cromossomos de interesse.

No final do século passado, após o uso bem-sucedido de corantes fluorescentes para coloração de sondas de DNA, o método FISH recebeu seu nome e desde então tem sido intensamente aprimorado e variado.

As modernas técnicas de análise FISH se esforçam para garantir que seja possível obter as informações mais completas para a análise do material genético selecionado em um procedimento de hibridização.

O fato é que, uma vez após a hibridização, apenas um número limitado de cromossomos do mesmo material citogenético pode ser avaliado. A capacidade de re-hibridizar cadeias de DNA diminui de tempos em tempos.

Portanto, no momento, no diagnóstico genético, o método de hibridização in situ é mais frequentemente usado para responder rapidamente a perguntas sobre as aneuploidias existentes e mais comuns nos cromossomos 21, 13, 18, bem como nos cromossomos sexuais X, Y.

Quaisquer amostras de tecido ou células são adequadas para análise de FISH.

No diagnóstico pré-natal, podem ser amostras de sangue, ejaculação ou.

A rapidez na obtenção dos resultados é garantida pelo fato de as células obtidas a partir do material retirado para análise não necessitarem ser cultivadas em meio nutriente, conseguindo sua divisão no número necessário, como acontece com o método clássico de cariótipo.

O material selecionado passa por preparação especial para obtenção de uma suspensão concentrada de células puras. Em seguida, é realizado o processo de desnaturação da amostra de DNA e do DNA nativo da amostra em estudo para um estado de fita simples e o processo de hibridização, durante o qual as sondas de DNA coloridas são incubadas com o DNA da amostra.

Assim, são visualizados os cromossomos desejados (coloridos) na célula, avaliado seu número, a estrutura das estruturas genéticas, etc. A ocular de um microscópio fluorescente especial permite examinar as cadeias brilhantes de DNA.

Atualmente, o método FISH é amplamente utilizado para fins diagnósticos para identificação de doenças genéticas, aberrações cromossômicas em medicina reprodutiva, oncologia, hematologia, dosimetria biológica, etc.

Como é usado o diagnóstico FISH do feto?

No campo da medicina reprodutiva, o método FISH, como um dos métodos de diagnóstico citogenético molecular, é utilizado em todas as etapas.

• um casal.

Para determinar o cariótipo dos futuros pais, é realizado uma vez, pois o genoma humano permanece inalterado ao longo da vida.

O cariótipo de um casal antes de conceber um filho ajudará a identificar se os pais são portadores de patologias genéticas hereditárias, inclusive ocultas. Bem como o estado geral do genoma da futura mãe e do pai, que pode afetar o sucesso da concepção de um bebê e da gravidez até o fim.

O diagnóstico pelo método FISH, neste caso, muitas vezes atua como um exame adicional ao cariótipo clássico, ao identificar patologias cromossômicas no material de teste (sangue venoso dos pais), caso haja suspeita de mosaicismo.

Exames adicionais usando o método FISH confirmarão ou refutarão de forma confiável a presença de uma suspeita de anomalia nas células do futuro pai.

• Estudo da ejaculação.

Indicado para dificuldades de reprodução em casal devido ao “fator masculino”. A análise de espermatozoides pelo método FISH permitirá avaliar o nível de espermatozoides anormais no conjunto cromossômico, bem como determinar se um homem é portador de doenças genéticas ligadas ao sexo.

Se o casal posteriormente recorrer à concepção por fertilização in vitro, a análise FISH da ejaculação permitirá a seleção do espermatozóide da mais alta qualidade para fertilizar o óvulo.

• Com fertilização in vitro.

Para diagnóstico genético pré-implantacional (PGD). Com base nos resultados dos estudos do cariótipo dos pais, são determinadas possíveis aberrações cromossômicas e genéticas que podem ser transmitidas ao embrião.

Graças às capacidades de diagnóstico FISH, um estudo da saúde genética dos embriões resultantes pode ser realizado em questão de horas antes da transferência para a cavidade uterina para garantir a gravidez de um feto saudável.

Além disso, as capacidades do PGD permitem determinar o sexo dos embriões e, portanto, “ordenar” o sexo do nascituro, se necessário.

• Durante a gravidez.

No diagnóstico pré-natal: a análise de células fetais obtidas por amostragem de vilosidades coriônicas, amniocentese ou cordocentese pelo método FISH costuma ser oferecida pelos centros médicos, além do estudo genético clássico de células fetais (cariótipo).

Este método é indispensável quando é necessário obter rapidamente uma resposta sobre a presença dos defeitos cromossômicos mais comuns no feto: trissomia nos cromossomos 21, 18, 13, aberrações nos cromossomos X e Y, às vezes também aneuploidias nos cromossomos 14 (ou 17), 15, 16.

Vantagens da análise FISH

A realização de análises genéticas pelo método FISH, embora ainda hoje seja um método auxiliar no diagnóstico de patologias cromossômicas, a viabilidade de sua implementação é determinada por vantagens inegáveis:

• a velocidade de obtenção dos resultados dos cromossomos testados é de algumas horas - não mais que 72.

Isto pode ser importante se o destino da gravidez depender do diagnóstico de geneticistas;

• alta sensibilidade e confiabilidade do método FISH - uma análise bem-sucedida é possível em uma quantidade insignificante de biomaterial - uma célula é suficiente, o erro dos resultados não é superior a 0,5%.

Isto pode ser importante quando o número de células na amostra original é limitado, por exemplo, quando a sua divisão é fraca.

• a possibilidade de realizar diagnósticos pelo método FISH em qualquer fase da gravidez (a partir da 7ª semana) e utilizando qualquer amostra biológica: fragmentos de córion, líquido amniótico, sangue fetal, etc.

Onde posso fazer um diagnóstico pelo método FISH?

Em Moscou, o método FISH para diagnóstico pré-natal de anomalias cromossômicas fetais é usado nos seguintes centros médicos:

Via de regra, as clínicas oferecem serviços de diagnóstico FISH como parte do cariótipo fetal completo por meio de intervenção invasiva por uma taxa adicional. E, via de regra, os futuros pais concordam em pagar a mais, porque graças ao método FISH, em apenas alguns dias você poderá descobrir o que há de mais importante sobre o seu bebê.

Em todos os casos, sem exceção, a formação e o crescimento estão associados à atividade do gene do tipo HER2. É ele o responsável por quanta proteína será alocada ao corpo feminino para o desenvolvimento do tecido mamário. Quando as primeiras células saudáveis ​​degeneram em células malignas, os receptores genéticos recebem informações de que é necessária divisão adicional do material celular.

O gene inicia um programa para desenvolver tecido adicional dentro da mama, embora na realidade esse material celular seja utilizado pelo tumor para seu crescimento e desenvolvimento. Assim, o carcinoma, em essência, engana o corpo e o obriga a alimentar o câncer às custas dos seus próprios recursos.

A tarefa da análise do cancro da mama em peixes é precisamente identificar o mau funcionamento do gene HER2 e tomar medidas de resposta adequadas em termos de prescrição de tratamento médico adequado.

Se você não realizar um teste de câncer de mama em peixes em tempo hábil, mesmo que certos medicamentos sejam usados ​​​​durante o tratamento, isso pode fazer com que o tumor continue a se desenvolver de forma agressiva e engolindo cada vez mais tecido mamário. Estas são as chamadas consequências da terapia prescrita incorretamente devido à falta de dados objetivos sobre o funcionamento do gene HER2.

Durante a análise do peixe, o médico injeta no sangue do paciente substâncias especiais que contêm elementos corantes que podem visualizar o quadro de anomalias cromossômicas. Assim, o médico consegue ver claramente e posteriormente estudar as anomalias genéticas no genoma da mulher que levaram ao desenvolvimento do câncer de mama.

Se forem confirmadas anormalidades no gene HER2, o tratamento apropriado será prescrito. Caso contrário, o médico, por meio de outros exames, determina uma razão diferente para o desenvolvimento do câncer de mama.

Outra vantagem importante da análise de peixes é que dentro de alguns dias o paciente recebe um relatório abrangente sobre a predisposição genética para o desenvolvimento de uma determinada doença cancerígena. Com a ajuda destes exames médicos, é possível diagnosticar simultaneamente a patologia não só da glândula mamária, mas também de todos os órgãos da cavidade abdominal.

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