DNA TYPING (individualização genética molecular de organismos, individualização de DNA), método de estudo de material genético que visa identificar e avaliar as características genéticas individuais de um objeto biológico. O objetivo de tal estudo é estabelecer as semelhanças (ou diferenças) de diferentes organismos para determinar o grau de seu relacionamento.

O método de tipagem de DNA baseia-se na existência de diferenças na estrutura do DNA entre diferentes indivíduos. Isso se aplica às chamadas regiões hipervariáveis ​​que possuem polimorfismo estrutural (possuem diversas formas alélicas). Na sua formação, o papel principal é desempenhado por sequências de nucleotídeos relativamente curtas, chamadas DNA minissatélite e microssatélite, compostas por 15-70 e 2-5 pares de nucleotídeos, respectivamente. Essas sequências estão espalhadas por todo o genoma na forma de blocos (loci) e possuem uma organização em tandem (seguindo-se muitas vezes). O número de repetições em tandem (e, portanto, o comprimento dos próprios loci) varia de 2 a 4 a vários milhares. A presença de elementos repetidos em tais blocos de satélites homólogos determina o polimorfismo estrutural desses loci, que se manifesta, em particular, como o fenômeno do polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (RFLP). Tais fragmentos são formados após clivagem enzimática do DNA com enzimas de restrição (a clivagem não ocorre dentro das repetições devido às peculiaridades de sua composição de nucleotídeos). Nas versões originais de tipagem de DNA, os fragmentos de DNA foram separados por eletroforese em gel de agarose e, em seguida, uma impressão desse gel foi obtida em um filtro de membrana. Este último foi incubado em uma solução contendo sondas especialmente selecionadas - fragmentos de DNA marcados com um radioisótopo. Regiões do DNA em estudo contendo complementares à sonda foram ligadas (hibridizadas) a ela e detectadas por autorradiografia. Assim, no filme radiossensível em forma de conjunto de bandas, foram imediatamente identificados todos os micro e minissatélites de DNA genômico homólogo à sonda utilizada. Por analogia com a análise de uma impressão digital (padrão de linhas papilares), surgiu o termo “impressão digital genética ou genômica”. Cada indivíduo tem sua própria “impressão digital” genômica, caracterizada por um certo número de bandas (até várias dezenas), sua localização na pista e a intensidade do escurecimento de cada banda. Quanto maior o relacionamento, mais coincidências. Todo o padrão revela uma especificidade individual ainda maior do que os padrões papilares e pode, portanto, servir como uma “identificação genética” de identidade. Nos parentes de sangue o número de bandas correspondentes é visivelmente maior; nos gêmeos elas são idênticas.

O desenvolvimento do método de reação em cadeia da polimerase (PCR) (final da década de 1980) tornou possível reproduzir (amplificar) qualquer sequência de DNA, obter dezenas e centenas de milhões de cópias dela e usar quantidades cada vez menores de material biológico para análise genética molecular. . Tornou-se possível comparar o comprimento de loci de DNA de minissatélites inteiros individuais sem submetê-los à digestão enzimática preliminar, isto é, analisar o polimorfismo de comprimento de fragmentos amplificados (AFLP). Após a separação dos produtos de PCR por eletroforese, sua posição no gel é revelada por meio de corantes especiais, marcadores fluorescentes, etc. Também foram desenvolvidos os chamados sistemas de amplificação multiplex que permitem a análise simultânea de AFLP de vários loci ao mesmo tempo (pode haver mais do que dez deles). Neste caso, o perfil de amplificação do DNA criado pela soma dos loci revela-se extremamente polimórfico (é uma combinação de vários elementos polimórficos independentes), mas proporciona uma confiabilidade de análise muito alta.

A variabilidade na estrutura dos genes polimórficos de DNA de mini e microssatélites também pode ser causada por substituições pontuais de nucleotídeos. Tais loci diferem apenas na composição de nucleotídeos. Neste caso, a estrutura primária dos fragmentos amplificados é determinada (ver Sequenciamento). O método de tipagem de DNA mais desenvolvido, baseado no sequenciamento de fragmentos, é a análise do DNA mitocondrial (mtDNA), que se caracteriza por alto nível de polimorfismo, presença de grande número de cópias, ausência de recombinação e herança materna. (o embrião recebe mitocôndrias apenas do ovo). Tudo isso possibilitou a ampla utilização do mtDNA em estudos populacionais e filogenéticos e, em alguns casos, tornou-o a única ferramenta possível para a tipagem do DNA; por exemplo, quando o DNA contido na amostra está altamente degradado e o DNA cromossômico não pode ser amplificado. A herança materna e a ausência de recombinação permitem o uso do mtDNA como um marcador genético de ancestralidade de “rastreamento”. Isto é especialmente importante ao estabelecer parentesco nos casos em que a distância genética que separa os parentes é superior a uma geração. Um exemplo notável do uso do mtDNA para tipagem de DNA foi o trabalho de cientistas russos, britânicos e americanos para identificar os restos mortais da família imperial russa em 1992-98. Mais tarde, a análise do mtDNA foi usada muitas vezes para individualizar restos esqueléticos e mumificados com dezenas, centenas ou mesmo dezenas de milhares de anos.

O método de tipagem de DNA é utilizado na ciência forense para identificar indivíduos e estabelecer relações familiares, bem como em análises médicas e biológicas. Em genética e seleção de animais e plantas de fazenda, este método é utilizado para certificação e seleção de descendentes de animais de raça pura, tipagem de variedades de plantas, determinação de diferenças interespecíficas e intervarietais, e em bacteriologia e epidemiologia prática para a identificação de cepas bacterianas. A tipagem de DNA pode ser usada no estudo das características estruturais e funcionais do aparato genético e dos fenômenos de instabilidade genômica durante o funcionamento normal e a patogênese das células, na genética populacional e evolutiva.

Lit.: Impressões Digitais de DNA: Estado da Ciência. V. a. o., 1993; Ivanov P. L. Identificação genética molecular dos restos mortais da família real // Boletim da Academia Russa de Ciências. 1994. T. 64. Nº 10; também conhecido como. A utilização de sistemas individualizantes baseados no polimorfismo de comprimento de fragmentos amplificados de DNA (AFLP) em exames médicos forenses de identificação pessoal e estabelecimento de parentesco // Exame médico forense. 1999. Nº 4; também conhecido como. Individualização de uma pessoa e identificação pessoal: biologia molecular em exames forenses // Boletim da Academia Russa de Ciências. 2003. T. 73. Nº 12.

Segundo as estatísticas, 80% das pessoas estão infectadas com o papilomavírus humano. Hoje, a medicina conhece mais de 100 tipos de infecção. O perigo da doença depende de qual cepa está presente no sangue. Portanto, a genotipagem do HPV é a principal tarefa diagnóstica, auxiliando na escolha do tratamento adequado. Que tipos de vírus existem e como eles diferem uns dos outros?

O que é papilomavírus e características da infecção

O papilomavírus provoca a degeneração do epitélio - é sob sua influência que surgem neoplasias no corpo. Na aparência, eles diferem significativamente entre si, no entanto, é difícil determinar o tipo de HPV a partir de um exame visual do papiloma.

O vírus do papiloma é uma daquelas infecções para as quais não existem medicamentos especiais. Como parte do tratamento da doença, são prescritos medicamentos que aumentam a imunidade e reduzem o número total de agentes infecciosos. No entanto, o vírus ainda permanece no sangue. Segundo várias fontes, em 20-30% das pessoas infectadas ela desaparece sem tratamento - no período agudo da doença, o corpo enfrenta a infecção por conta própria. Nos 70-80% restantes, o HPV permanece pelo resto da vida. Ao mesmo tempo, na maioria das vezes as pessoas são portadoras da infecção - o vírus não leva ao crescimento de papilomas.

A ativação da doença está associada à deterioração da imunidade. A papilomatose manifesta-se no contexto de doenças prolongadas, durante a gravidez, em pessoas com maus hábitos e noutros casos. Além disso, todos os tipos de HPV se comportam da mesma forma - a taxa de crescimento e o número de papilomas não dependem da cepa.

Tipos de vírus: classificação por perigo

Os tipos de papilomavírus humano costumam ser divididos de acordo com o grau de perigo, pois está comprovado que algumas cepas podem provocar o desenvolvimento de câncer.

• Grupo não oncogênico - 1, 2, 3, 4, 5. Esses papilomas nunca degeneram em neoplasias malignas. Seu DNA não sofre mutação nas células humanas. Portanto, caso essas cepas sejam detectadas na análise, o tratamento poderá não ser realizado. Os dermatologistas recomendam não remover pequenos tumores que não causem desconforto.
• Grupo com baixo grau de oncogenicidade – 6, 11, 42-44. Os tipos 6 e 11 são as cepas mais comuns do vírus, contra as quais até foram desenvolvidas vacinas. Mas, ao mesmo tempo, o perigo é pequeno. A papilomatose por eles causada só pode levar à oncologia se houver uma série de fatores provocadores. Assim, esses tipos representam perigo para pessoas com predisposição ao câncer, após altas doses de radiação e com imunodeficiências. Na maioria das pessoas infectadas, as neoplasias desses tipos de papilomavírus permanecem benignas.
• Grupo com alto grau de oncogenicidade – 16, 18, 31, 33-35, 45, 51-52, 56, 68-70. Os tipos mais perigosos de HPV que, quando ativados, provocam o desenvolvimento de câncer. As neoplasias aparecem, via de regra, nos órgãos genitais, por isso essas infecções são classificadas como anogenitais.

Como o papilomavírus se manifesta: tipos de papilomas

O HPV causa tumores de diferentes formas e tamanhos. Os principais tipos de papilomas são:

• Verrugas planas (vulgares). Os tipos 1 a 4 causam crescimentos nas solas dos pés – crescimentos duros, planos e semelhantes a calos. 10, 26, 27, 29 são verrugas planas medindo 2 a 10 mm. O tipo 27 leva à formação de verrugas de açougueiro - formações salientes da cor da pele que aparecem com mais frequência nas mãos e no rosto.
• Papilomas pontiagudos. Crescimentos alongados que geralmente crescem em grupos e lembram uma crista de galo. A localização dessas neoplasias é diferente e depende da via de infecção. Eles são encontrados na face, afetam as membranas mucosas do trato respiratório e crescem na bexiga. Mas na maioria das vezes essa variedade é encontrada nos órgãos genitais. Eles são causados ​​pelos tipos 6, 11, 16, 18, 33 e vários outros.
• Papilomas filiformes. Eles aparecem em qualquer parte da pele, mas são típicos do pescoço, pálpebras e língua.
• Papulose bowenóide. Uma doença que se manifesta mais frequentemente na genitália externa. Na aparência, são placas compactadas, planas, de cor marrom ou avermelhada. A doença é causada pelos tipos 16, 18, 31-33, 51, 54 do HPV.
• Condiloma de Buschke-Levenshtein. Formação extensa, provocada pelo HPV tipo 16. Algumas fontes também indicam os tipos 6, 11, 18 e 33. Afeta homens e mulheres e, se não for tratada, leva ao carcinoma espinocelular.
• Displasia cervical. Os tipos oncogênicos de HPV em mulheres causam danos à vagina e ao colo do útero. As cepas comuns são 16 e 18 (70% dos casos). A doença também é causada pelos tipos 31, 33, 35, 39, 45 e outros tipos.

Uma cepa de HPV pode provocar diferentes tipos de papilomatose. Portanto, se houver presença de neoplasia e os exames não detectarem uma cepa específica, o diagnóstico continua.

HPV oncogênico e as doenças que eles causam

O papilomavírus humano de tipos oncogênicos é uma infecção perigosa que deve ser mantida sob controle. Essas cepas causam melanoma ou doença de Bowen na pele. Mas na maioria das vezes os médicos associam a atividade dos vírus a neoplasias malignas nos órgãos genitais. O DNA dos papilomavírus se integra às células epiteliais, modifica-as e leva à oncologia.

As cepas 16 e 18 do HPV em mulheres provocam displasia cervical. Os ginecologistas distinguem três estágios da doença; após o último estágio, as células degeneram e o câncer se desenvolve. A doença progride ao longo de 10-20 anos. Ao mesmo tempo, a displasia de grau 1 pode não se desenvolver ou progredir em aproximadamente 30% das mulheres. Em alguns casos, a doença desaparece. Este curso é típico se o HPV se manifestar durante a gravidez. Em 5% das mulheres nos primeiros 3 anos após a infecção, é detectada displasia de 2º e 3º graus. Em 20% dos pacientes com doença em estágio 3, a displasia se transformará em câncer dentro de 5 anos.

Os tipos 16 e 18 são as infecções mais comuns. A 16ª cepa é responsável por 50% de todos os casos de câncer cervical, a 18ª é encontrada em 10% dos pacientes. Além deles, as mulheres com oncologia têm chance de diferenciar os tipos 31, 33, 35, 45, 52, 56.

Na maioria das vezes, os homens permanecem portadores da infecção, mas ainda assim os tipos 16 e 18 provocam carcinoma espinocelular. Na maioria das vezes, uma neoplasia maligna é encontrada no pênis. Prevê-se que o tratamento seja mais eficaz em homens do que em mulheres.

Diagnóstico de HPV: determinação do tipo

Se forem detectados papilomas, principalmente no que diz respeito a erupções cutâneas nos órgãos genitais, é necessário fazer exames. O tipo de HPV encontrado determinará o regime de tratamento. Uma pessoa pode estar infectada com vários tipos de papilomavírus ao mesmo tempo, por isso é melhor fazer testes especiais para detectar várias cepas de uma só vez. Assim, a tipagem de DNA do HPV tipo 27 é considerada uma opção diagnóstica popular. O material levado para pesquisa é a raspagem urogenital. A análise é adequada para mulheres e homens.

Se a papilomatose se formar na pele, o paciente pode fazer um exame de sangue para PCR. O exame histológico do papiloma removido também é recomendado - isso ajudará a detectar a degeneração das células em câncer.

Além disso, recomenda-se que as mulheres se submetam a exames de rastreio do cancro do colo do útero. Normalmente, se não houver sintomas da doença e o HPV não tiver sido detectado antes, eles são realizados uma vez a cada 3-5 anos. Para aquelas que já foram tratadas para papilomatose ou estão em risco de desenvolver câncer cervical, o rastreamento deve ser anual. O exame inclui as seguintes etapas:

• Colposcopia. Exame da vagina e do colo do útero usando um dispositivo de ampliação especial. Ajuda a detectar visualmente a degeneração do epitélio ou verrugas genitais.
• Teste de Papanicolaou (teste de Papanicolaou, esfregaço citológico). Este teste é retirado do canal cervical e ajuda a identificar células alteradas.

• Teste Digene. Um esfregaço é retirado do canal cervical, mas o material é examinado com mais detalhes. O teste proporciona uma determinação diferenciada do DNA do HPV, ou seja, permite identificar um tipo específico de vírus. Além disso, a carga viral é avaliada.

Os testes deram resultado positivo - o que isso significa para o paciente? Na verdade, a presença de um vírus no sangue e mesmo nos estágios iniciais da doença não é motivo para pânico. O grau de perigo depende de vários fatores:

• Tipagem de HPV. O grupo oncogênico é o mais perigoso.
• Estágio da doença. Para a displasia do estágio 1, o tratamento conservador é prescrito, mas o estágio 3 exigirá uma cirurgia de grande porte.
• Nível de carga viral. O número de agentes infecciosos está diretamente relacionado à probabilidade de progressão da doença.
• Doenças que acompanham. No contexto das doenças ginecológicas nas mulheres, o HPV progride rapidamente.

Prevenção do câncer cervical: HPV tipos 16, 18

Na classificação do HPV, a maior ameaça são os vírus com alto risco oncogênico. Mas a presença de infecção no sangue e até mesmo o aparecimento de papilomatose ainda não indicam consequências perigosas. Se a doença já se fez sentir, a melhor prevenção seriam visitas regulares ao ginecologista ou urologista e exames detalhados.

Também é importante manter a imunidade:

• Comer adequadamente.
• Remova os maus hábitos.
• Reduza o número de situações estressantes.
• Cuide da sua saúde - não negligencie as doenças, principalmente as ginecológicas.

A Organização Mundial da Saúde recomenda que meninas de 9 a 13 anos sejam vacinadas. O que são as vacinas contra o papilomavírus humano e como podem ajudar? Existem dois tipos de vacinas - Gardasil, Cervarix. O primeiro é feito para os tipos 6, 11, 16 e 18 do papilomavírus, o segundo - para os tipos 16 e 18. É melhor vacinar-se antes de se tornar sexualmente ativo, mas a vacinação também é recomendada para mulheres jovens com menos de 25 anos de idade.

A imunização reduz o risco de desenvolver câncer cervical. No entanto, isso não significa que uma mulher vacinada não possa realizar exames de rastreio obrigatórios.

DNA do HPV

Os tipos de HPV (papilomavírus humano) se manifestam por danos à pele e às membranas mucosas com vários crescimentos: papilomas e verrugas. Isto é uma consequência da penetração do papilomavírus no corpo. É um erro pensar que o impacto do vírus no corpo humano se limitará apenas às neoplasias externas e internas. Alguns tipos de papilomas podem causar tumores malignos. Portanto, o principal objetivo é permanecer vigilante ao detectar crescimentos incomuns no corpo.

Informações gerais sobre o vírus

Os tipos de HPV eram conhecidos pelos nossos ancestrais nos primeiros séculos da nossa era. Os antigos curandeiros determinaram com precisão que tais crescimentos são transmitidos de uma pessoa doente para uma pessoa saudável através do contato sexual. Os cientistas conseguiram provar que a causa das verrugas e papilomas é um vírus apenas no início do século passado.

Esse vírus pertence ao gênero dos papilomavírus e é transmitido pelo contato com um organismo vivo pela camada superior da pele, onde se multiplica no interior das células e mucosas, causando alterações como verrugas e papilomas.

No ambiente externo, o vírus pode não existir por muito tempo, há exemplos em que o patógeno pode ser “capturado” na sauna ou no balneário, pois se desenvolve em ambiente úmido. Todo o seu ciclo de vida ocorre dentro das células do organismo doador. Pode permanecer nas células da pele por muito tempo, fazendo com que se dividam incorretamente.

O papilomavírus é um dos mais comuns e é transmitido por contato sexual. O número de pessoas infectadas com este vírus cresce a cada ano. Hoje, cerca de 90% da população mundial é portadora do papilomavírus. O principal perigo desse vírus é que, permanecendo por muito tempo no corpo, alguns de seus tipos provocam câncer.

Tipos de vírus

Os tipos de papilomavírus humano estão amplamente representados hoje. A tipagem do HPV tem mais de cem variedades.

Diferentes tipos de tumores causados ​​pelo HPV provocam alterações no organismo que se manifestam externa e internamente. Muitos deles não são perigosos para o ser humano, mas há alguns que, após permanecerem por muito tempo no corpo humano, podem degenerar em tumores malignos.

Dependendo de sua capacidade de causar câncer no corpo, distinguem-se os seguintes tipos de vírus:

• não evoluir para câncer (1-5,10, 28,49);
• raramente causa câncer (6, 11, 13, 32, 34, 40-44, 51, 72);
• percentual médio de transformação do câncer (26, 30, 35, 52, 53, 56, 58, 65);
• alta porcentagem de formação de câncer (16, 18, 31, 33, 39, 45, 50, 59, 61, 62, 64, 68, 70, 73).

O último grupo é especialmente perigoso para as mulheres, pois muitas vezes causa câncer cervical. Os tipos mais perigosos, que causam câncer em 94% dos casos, são 16, 18, 45.

Pessoas que foram diagnosticadas com papilomas dos tipos 56 e 66, que podem levar ao desenvolvimento de um tipo especial de câncer - o carcinoma, devem prestar atenção especial à sua saúde.

Esta classificação está mudando com base em pesquisas científicas. Isso aconteceu com o tipo 58, que passou do último grupo para o penúltimo.

Se uma pessoa for portadora do DNA do vírus do papiloma, ela deve ser observada regularmente por um oncologista, fazer exames e fazer os exames necessários.

Tipos oncogênicos

Com base no fato de que alguns tipos de HPV podem ser perigosos para o câncer, os especialistas os dividiram em vários grupos, mostrando o possível risco de desenvolver um tumor maligno:

• seguro;
• baixo risco;
• com alto risco.

O último grupo é de grande preocupação. Nesse caso, é possível observar papilomas e verrugas genitais que se instalaram nos órgãos reprodutivos de representantes de ambos os sexos. Caso sejam detectados, é obrigatória a visita ao oncologista. O médico irá prescrever uma determinação diferenciada do DNA do HPV e então decidir se deseja remover tais crescimentos.

O teste de HPV em mulheres com câncer cervical mostra a presença dos tipos 16 e 18. Eles são encontrados em duas em cada três mulheres doentes.

Se um exame de sangue mostrar a presença de um tipo oncogênico de papilomavírus humano, isso não significa de forma alguma que um tumor maligno se desenvolverá necessariamente. O HPV em mulheres pode aumentar o risco de desenvolver um tumor. Portanto, com tratamento adequado e oportuno, não há ameaça à saúde.

Sintomas de diagnóstico da doença

A ciência médica hoje está munida de métodos que permitem determinar com precisão que tipo de vírus causou o aparecimento de tumores no corpo do paciente.

Entre eles, os seguintes métodos são frequentemente utilizados:

• Inspeção visual. Uma das manifestações clínicas é a presença de papilomas, condilomas e verrugas no corpo do paciente. Se estiverem presentes nos órgãos reprodutivos e na região anal, são prescritos estudos adicionais.

• Biópsia (colposcopia). Prescrito para problemas com tecido cervical. Para o procedimento são levados para processamento ácido acético e solução de Lugol. Se o DNA do papilomavírus estiver presente, um padrão característico será formado na área infectada.
• Citologia. Análise de esfregaços usando um teste PAP. Além disso, a histologia é realizada.
• PCR (reação em cadeia da polimerase). O bom desse método é que ele detecta a genotipagem do HPV além do próprio vírus. O teste também detecta tipos de HPV de curta duração e autocurativos.

O último estudo deverá incluir amostras de todos os 15 tipos oncogênicos do vírus. Embora dez deles estejam ativos em nosso país.

Sintomas da doença

Na maior parte, o papilomavírus no corpo do portador apresenta-se de forma assintomática. Isto é facilitado pela imunidade, que suprime todas as manifestações.

Quando o sistema imunológico enfraquece, todos os tipos de vírus são imediatamente ativados. Eles se unem e começam a afetar as células da pele. A reprodução normal é interrompida e o processo de divisão das células da pele é acelerado.

Como resultado disso, aparecem vários crescimentos. São eles que, ao exame visual, indicam infecção pelo papilomavírus.

Dependendo do tipo, podem aparecer os seguintes tipos de crescimentos:

1. Verrugas. Crescimentos redondos e densos de até 1 cm de diâmetro, com limites bem definidos, superfície rugosa, de cores diversas. Eles estão localizados em áreas abertas. Não é perigoso para os humanos.
2. Papilomas. Um crescimento suave em um caule da cor da pele com uma superfície áspera. Adora lugares molhados no corpo. Eles se reproduzem muito rapidamente. Alguns tipos são perigosos.
3. Condilomas. Semelhante aos papilomas. Encontrado na área dos órgãos reprodutivos externos e ânus. Eles se multiplicam rapidamente e formam aglomerados inteiros. Perigoso para os humanos.

O vírus é transmitido através do contato sexual. Os sinais podem não aparecer imediatamente, mas mesmo depois de seis meses.

Uma vez no corpo, o vírus passa por quatro estágios:

• curso latente - não há alterações no organismo, a presença do vírus só será evidenciada por análise;
• o aparecimento de sinais clínicos - entre eles crescimentos na pele;
• displasia - o vírus penetra nas células e elas começam a mudar, o tipo de vírus será mostrado por um hemoteste;
• carcinoma - as células sofrem mutação, aparece um tumor maligno.

Possíveis doenças

A tipagem de DNA do HPV tipo 27 causa várias doenças que podem aparecer em uma pessoa após a infecção.

Entre essas doenças estão as seguintes:

1. Diferentes tipos de verrugas. A infecção ocorre por meios domésticos. Crianças e jovens são suscetíveis a isso. O sistema imunológico geralmente lida com isso. As verrugas plantares podem ser curadas com cirurgia.
2. Condiloma acuminado. Afeta os órgãos genitais.
3. Epidermodisplasia. Verrugas planas e rosadas causam câncer de pele.
4. Papilomatose laríngea. Inerente aos recém-nascidos. Torna a respiração difícil.
5. Papulose bowenóide. Característica dos homens, afeta as mucosas.

Tratamento e prevenção

A maioria dos crescimentos desaparece por conta própria dentro de alguns anos. Ao mesmo tempo, o corpo desenvolve imunidade ao tipo de vírus transferido, que permanece por toda a vida. O tratamento desta doença inclui duas etapas: uso de antivirais e remoção cirúrgica.

A terapia medicamentosa inclui os seguintes medicamentos: Ácido Salicílico, Bleomicina, Imiquimod, Retinóides, Epigen, Feresol, Podofilotoxina, Solcoderm.

Crioterapia e terapia a laser são usadas para remoção.

Existe também um grande grupo de medicamentos da medicina tradicional. São celidônia, dente de leão, Kalanchoe, cebola, babosa, limão, absinto, cranberries, etc. A partir deles são preparadas decocções, tinturas, aplicações, fricções, suco, polpa, etc.

Para prevenir a infecção, são utilizadas medidas preventivas, além da vacinação.

As medidas de prevenção incluem:

• garantir uma vida sexual segura;
• visitas regulares ao médico;
• estilo de vida saudável;
• vacinação.

Se você tomar medidas para prevenir a doença, talvez nunca saiba por si mesmo o que é o papilomavírus humano.

Que tipos de HPV existem: características, sintomas e diagnóstico

Hoje, mais de uma centena de variedades do vírus HPV foram estudadas, metade delas causa o desenvolvimento de formações na pele e nas mucosas dos órgãos íntimos humanos. As estatísticas mostram que 80% da população mundial está infectada. Isso significa que as células do corpo contêm HPV com vários graus de oncogenicidade.

A presença do papilomavírus em um paciente pode levar ao desenvolvimento de complicações graves, sendo difícil prever como se comportará este ou aquele tipo de patógeno. Por isso é tão importante conhecer as características de cada genótipo para combater eficazmente esta infecção.

Classificação

Muitos tipos de papilomavírus humano são completamente seguros para seu portador: ocorrem papilomas e verrugas menores, que são eliminados com sucesso por métodos cosméticos.

Outros tipos de papilomas pertencem ao grupo oncogênico e provocam modificação ativa das células, o que leva ao diagnóstico de câncer no portador. A divisão do HPV em tipos permite desenvolver as táticas de tratamento mais corretas, baseadas em testes de identificação de microrganismos.

Uma pessoa pode ser portadora de vários DNAs de HPV, os vírus podem se estabilizar, parar de se reproduzir ou vice-versa - o processo de desenvolvimento das células oncogênicas irá progredir, o que significa que será difícil interromper seu impacto negativo no corpo.

Grupo oncogênico

A genotipagem do HPV é um procedimento importante no diagnóstico da detecção da doença; é uma oportunidade adicional para prever o curso da doença. No total, na medicina prática, o papilomavírus é dividido em três grupos.

1. Os vírus são seguros e não causam o desenvolvimento de câncer, o que significa que não há necessidade de pânico; o principal é não se tornar portador de outras infecções no futuro, fazer exames regularmente para detectar a infecção e não desencadear o quadro do sistema imunológico.
2. Baixa probabilidade de desenvolvimento de células cancerígenas quando o papilomavírus é detectado 6,11,42-44.Em casos raros, podem ocorrer mutações celulares, transformando-se em oncogênicas.
3. O grupo mais perigoso, nas mulheres aumenta o risco de desenvolver um processo de câncer, nos homens - a causa do câncer de bexiga. Estes são HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 59, 68.

Pacientes com papilomavírus 66 e 56 devem prestar maior atenção à sua saúde, na maioria das vezes o transporte da infecção é assintomático e, portanto, a identificação da doença é problemática. Para cada tipo de vírus, é importante monitorar os sinais do HPV, realizar um exame especial e, se necessário, iniciar um tratamento qualificado.

Características de cada tipo de vírus

A classificação dos vírus ajuda a determinar o grau de complexidade da doença que tal infecção pode provocar. As verrugas comuns são causadas por um vírus tipo 2 e são transmitidas através do contato domiciliar com um portador; crianças e adolescentes sofrem com mais frequência.

As defesas do organismo permitem que o sistema imunológico enfrente a infecção, as formações desaparecem sem deixar vestígios, o principal é não ferir a pele no local de desenvolvimento dos papilomas, para não causar infecção secundária.

Quando infectado com HPV 3 e 5, pequenos crescimentos aparecem no rosto e nas palmas das mãos. Essas erupções cutâneas também são chamadas de erupções cutâneas juvenis, o que significa que o corpo pode lidar sozinho com a infecção, sem intervenção medicamentosa.

Quando são detectadas verrugas plantares, podemos afirmar com segurança sobre a presença de papilomavírus tipos 1 e 2 no corpo. As mulheres costumam sofrer com o uso de sapatos estreitos de salto alto. A pele da verruga engrossa com o tempo e os crescimentos se multiplicam por todo o corpo.

As formações do HPV tipo 1 crescem por dentro, causam desconforto ao caminhar, dores e dores, principalmente à noite. O papilomavírus do segundo genótipo se manifesta como crescimentos em mosaico que não causam dor, apenas desconforto estético.

As verrugas genitais nas mulheres estão localizadas nas membranas mucosas dos órgãos genitais e genitais, e nos homens - na cabeça do pênis e no prepúcio. Estes são vírus perigosos dos tipos 6 e 11.

Se for detectado um papilomavírus com baixo risco oncogênico, isso significa que estamos falando do acréscimo de uma infecção do tipo 20, 21, 14, 25, 27. Na maioria das vezes, são formações benignas que não recorrem.

Durante o trabalho de parto da mãe, a criança pode se infectar com papilomatose laríngea, HPV tipo 11. Essa forma da doença é observada em crianças menores de cinco anos, se as formações forem abundantes pode haver risco de asfixia.

Determinando o perigo dos tipos 16 e 18 do HPV

Com a análise do hemoteste, é possível fazer o prognóstico mais preciso do curso da doença, o que significa identificar vários genótipos do vírus de uma só vez, fazer o diagnóstico correto e iniciar o tratamento oportuno.

Se for detectada uma combinação dos tipos 16 e 18, isso indicará a presença de um alto grau de oncogenicidade - será necessário um exame colposcópico.

Graças ao hemoteste do HPV, é possível excluir a possibilidade de recaída com desfecho fatal.

Ao diagnosticar mulheres com câncer cervical, podemos afirmar com certeza que a causa da mutação é o vírus tipo 16. Sob a influência de fatores favoráveis ​​​​(enfraquecimento do sistema imunológico, presença de outras infecções genitais), o papilomavírus inicia seu efeito destrutivo nas células, alterando seu DNA.

Isso significa que o vírus do genótipo 16 afeta o desenvolvimento de uma condição pré-cancerosa, causa displasia cervical e papilomas e condilomas são formados abundantemente por todo o corpo do paciente. Nos homens, essas cepas perigosas do vírus podem causar a doença de Bowen, danos à membrana mucosa do órgão genital.

Graças a uma análise de alta resolução do DNA do HPV (27 tipos), é possível identificar alterações patológicas perigosas no corpo causadas pela presença de vários tipos de papilomavírus.

Na displasia cervical, além dos vírus 16 e 18, existem também os 32, 30, 57, 61 e outros tipos oncogênicos. Se durante o exame os exames confirmarem a presença de apenas um tipo de HPV de alto risco e não houver crescimentos, isso significa que podemos falar em auto-remoção da infecção do corpo.

Outros tipos de marcas na pele

A cepa HPV 49 se manifesta pelo crescimento de formações planas únicas, que podem ser facilmente removidas com um dispositivo a laser. Este genótipo não é oncogênico e não ocorre secundariamente.

A detecção do vírus cepa 57 em uma mulher indica uma condição pré-cancerosa da paciente, se houver crescimentos na face, eles são removidos por meio de fluxo pulsado, após o qual não permanecem vestígios ou tecido cicatricial.

Os crescimentos do HPV tipo 27 em homens e mulheres podem ser removidos com nitrogênio líquido e a ocorrência de infecção secundária é excluída. As cepas numeradas 51, 52, 56 são oncogênicas, o que significa que alterações adicionais na estrutura do DNA podem causar câncer.

Nos homens, o desenvolvimento de oncologia do órgão genital e do ânus. Somente a terapia medicamentosa oportuna pode retardar esses processos e deixar para trás a divisão destrutiva das células do DNA.

O HPV tipo 37 é uma das causas do desenvolvimento do ceratoacantoma, que indica a ocorrência de um tumor benigno na pele, localizado - na face, em áreas abertas do corpo e, em casos excepcionais - em áreas fechadas.

Os exames para detectar o HPV tipo 38 podem indicar o desenvolvimento de melanoma, são tumores malignos que se caracterizam pela agressividade e rápido desenvolvimento, o que significa que os sintomas não podem ser ignorados, pois a doença pode impactar negativamente todos os órgãos e sistemas humanos.

Análise para variedades de HPV

Existem vários métodos laboratoriais que podem determinar com precisão quantas cepas do vírus estão presentes no corpo de um homem e de uma mulher. Para tanto, são utilizados tipos de diagnóstico como reação em cadeia de polímeros e análise de genotipagem. A PCR é realizada para determinar o tipo de vírus, e os resultados deste estudo são apresentados em forma de tabela com lista de tipos de HPV, marcas dos detectados neles e indicação da carga viral.

O material para análise em mulheres é um esfregaço do canal cervical. Durante a gravidez, não é necessário fazer teste de papiloma, pois não há ameaça para a mãe e o feto. Homens com formações suspeitas devem consultar um urologista. Somente essa atenção especial à sua saúde ajudará a evitar consequências graves para as mulheres após a infecção do corpo.

Quando as mulheres devem ser diagnosticadas com HPV?

Não se deve permitir sintomas pronunciados da doença, é importante fazer exames preventivos regulares com um ginecologista uma ou duas vezes por ano e fazer exames para detectar infecção após o primeiro ano de atividade sexual.

Conclusão

Todas as classificações de detecção do HPV no organismo estão passando por mudanças, pois os vírus sofrem mutações, causam complicações, não podem ser tratados, reaparecem após a remoção e o processo de diagnóstico e interpretação dos exames fica mais complicado.

As especificidades de tais neoplasias ainda não foram estudadas com precisão, não se sabe quanto tempo levará para reduzir o risco de perigo após a infecção por cepas oncogênicas e remover completamente o vírus do corpo.

Para pacientes com qualquer tipo de HPV, é necessária uma abordagem terapêutica individual: para interromper com sucesso a propagação do vírus no organismo, é necessário ser examinado regularmente por especialistas especializados, seguir as recomendações e levar um estilo de vida saudável.

O principal perigo do HPV para mulheres e homens é a formação de um tumor maligno, portanto esta classificação do vírus é feita levando-se em consideração o grau de seu perigo oncológico.

Tipos de papilomavírus humano (HPV)

O papilomavírus humano é uma doença bastante comum que afeta quase todas as pessoas na Terra. O perigo não vem tanto das neoplasias em si, mas daquilo em que elas podem evoluir. Sabe-se que alguns tipos de papilomas eventualmente evoluem para tumores malignos - câncer. Mas nem todos os tipos são oncogênicos. Existem 58 variedades do vírus. A tipagem do HPV permite combater o vírus de forma mais eficaz.

Cepas de papilomavírus diferem no grau de perigo para os seres humanos

Como ocorre a infecção pelo HPV?

A peculiaridade do HPV é que, uma vez que entra no corpo, pode não se manifestar por muito tempo, de 2 meses a 10 anos. Mas assim que o sistema imunitário de uma pessoa falha, o vírus torna-se ativo e aparecem sintomas clínicos. Certos fatores podem afetar negativamente o risco de desenvolver papilomavírus.

O tamanho do HPV é tão pequeno que penetra facilmente nas menores lesões da pele e das mucosas. A infecção ocorre de várias maneiras:

1. Sexual – o papilomavírus humano entra na membrana mucosa dos órgãos genitais externos e internos durante a relação sexual com um parceiro doente ou portador da doença.
2. Doméstico - através do uso compartilhado de toalhas, lâminas de barbear, escovas de dente, roupas, roupas de cama, etc.
3. De mãe para filho – ocorre durante o parto. Se a mãe tiver verrugas genitais, quando o feto passar pelo canal do parto, a própria criança poderá ser infectada.
4. A autoinfecção ocorre quando os papilomas já estão presentes no corpo humano, mas ele transfere o vírus para outra parte dele. Se você tem tumores genitais, também pode ter verrugas nas mãos.

Pode não haver um tipo de papiloma no corpo humano, mas vários. Alguns deles podem ser de baixo risco oncogênico, enquanto outros podem ser de alto risco.

Ao se autoinfectar, a pessoa transfere o vírus para diferentes partes do corpo com as próprias mãos.

Que tipos de HPV existem?

Existe uma certa classificação de HPV. Eles são divididos em tipos (83 tipos) e em grupos, dependendo do nível de risco de desenvolver câncer. Cada um desses tipos pode ocorrer em pessoas de qualquer sexo e idade.

Grupo nº 1 – não oncogênico. Pessoas com esse tipo de papiloma podem não se preocupar com o desenvolvimento de um tumor cancerígeno. Este grupo inclui:

• As cepas 1, 2 e 4 provocam o aparecimento de verrugas semelhantes a calosidades na sola dos pés;
• As cepas 3, 10, 28 e 49 causam condilomas planos com superfície amarelada em todo o corpo;
• 5, 8, 12, 14, 15, 17, 19, 20, 36,37, 46, 47 e 50 cepas são hereditárias e neoplasias de formato arbitrário aparecem nos braços, pescoço e tórax;
• As cepas 26, 27, 29 e 57 são formadas na parte externa da palma e dos dedos e se parecem com tubérculos achatados e cinzentos;
• Cepa 7 – “verrugas de carne”, externamente semelhantes a feridas abertas com a carne voltada para fora.

Grupo nº 2 – baixo nível de risco. Embora pequena, existe a possibilidade de que sob a influência de alguns fatores se desenvolva o processo de formação de um tumor maligno. O grupo inclui os seguintes tipos:

• As cepas 6 e 11 são as cepas de HPV mais comuns, localizadas nas axilas e sob a prega mamária;
• dos 42 aos 44 anos formam protuberâncias compactadas no colo do útero, levando à sua erosão;
• 53 a 55 têm formato de gorro em haste fina, formam-se nas dobras da pele, principalmente em pessoas obesas, e se danificadas, sangram muito.

Grupo nº 3 – nível de risco médio. O desenvolvimento do câncer pode ser desencadeado por estresse ou diminuição da imunidade. Este grupo inclui cepas com os seguintes números:

• 31 cepas são o tipo sexualmente transmissível mais comum. Forma crescimentos na membrana mucosa dos órgãos genitais internos e do trato urinário;
• 33, 35 e 52 – causa verrugas com superfície escura e escamosa nas mãos;
• 58 se manifesta como neoplasias na genitália externa e na região da virilha. Parecem nódulos.

Grupo nº 4 – alto nível de risco. Quase todos esses tipos eventualmente progridem para o estágio de desenvolvimento de tumores malignos. Estes incluem 16, 36, 18, 45 e 51 cepas.

As propriedades dos papilomas de uma cepa específica os classificam como uma manifestação perigosa ou não perigosa do vírus. É de grande importância qual cepa é diagnosticada em uma pessoa, pois disso depende sua vida e saúde futuras.

As cepas de vírus 18, 16, 45 e 31 são as mais perigosas

Os tipos mais perigosos de HPV

As cepas mais perigosas são representantes do quarto grupo, com alto risco de câncer. O processo de tratamento de uma doença causada por um vírus depende da genotipagem.

O HPV 51 é uma condição pré-cancerosa. É mais perigoso devido à sua tendência de transformar células saudáveis ​​em células cancerígenas. Esta cepa produz condilomas planos ou tuberosos. 80% das mulheres com câncer de colo do útero, vulva e homens com câncer de pênis e ânus são portadores desse tipo de papilomatose.

Os tipos 52, 59 e 83 do HPV, assim como a cepa anterior, são perigosos para a saúde humana, mas afetam principalmente as mulheres. Causa a formação de papilomas pontiagudos na vagina e no colo do útero. Pertencem aos tipos de alta natureza cancerígena, porque. levar ao câncer.

O HPV 56 causa verrugas genitais no ânus e no reto. Durante as idas ao banheiro, os condilomas são feridos, causando sangramento.

Os HPV 16 e 18 estão entre as cepas mais perigosas, pois dentro do corpo humano as verrugas genitais crescem muito rapidamente, afetando o DNA das células e fazendo com que elas se dividam de forma caótica. Se a papilomatose também for acompanhada de infecção, os condilomas crescem juntos em grandes neoplasias que se parecem com inflorescências de couve-flor. Isso provoca o desenvolvimento de displasia cervical, que é uma condição pré-cancerosa. A infecção por essas cepas do vírus em homens também não passa despercebida. Formam-se protuberâncias ou placas vermelhas no pênis, que eventualmente endurecem e perdem a sensibilidade. Isso nada mais é do que a doença de Bowen, que pode evoluir rapidamente para câncer de pênis.

Os HPV 33 e 31 são tipos de papilomatose muito perigosos; podem causar papulose bowenóide em homens e neoplasia cervical em mulheres. O câncer intraepitelial é a própria presença de neoplasia na mulher. Esta é uma alteração nas células epiteliais que leva à formação de úlceras.

As cepas 33 e 31 do HPV causam câncer

Como os tipos de HPV são diagnosticados?

Para determinar a presença do papilomavírus humano, bem como entender quais tipos estão contidos no corpo do paciente, é necessário fazer um diagnóstico. Os métodos diagnósticos modernos são capazes não apenas de calcular os estágios da doença, mas também de compreender que tipo ou vários tipos estão presentes no corpo, mesmo que estejam em estado “adormecido”.

Você pode determinar seu tipo de HPV das seguintes maneiras:

1. Teste de DNA para HPV. Este método é muito eficaz na determinação do tipo de papilomavírus humano nas manifestações genitais. Ao remover condilomas dos órgãos genitais internos e externos das mulheres, parte do biomaterial é retirada para biópsia. Os resultados dos exames são avaliados por um oncologista e o tratamento é prescrito com base no seu diagnóstico.
2. PCR – reação em cadeia da polimerase. O método mais novo e eficaz para determinar o tipo e estágio do papilomavírus. Graças ao estudo do biomaterial quanto à presença de sinais do papilomavírus humano, é possível detectar o patógeno mesmo na concentração mais insignificante. O resultado é obtido mesmo que ainda não haja sintomas clínicos e o vírus esteja em “hibernação”. A única desvantagem desta análise é o seu alto custo.

Realizar o diagnóstico precocemente permite ao paciente com diversos tipos de HPV prevenir o desenvolvimento de tumores cancerígenos. Além disso, fazer um diagnóstico com base nos resultados do estudo permite iniciar o tratamento em tempo hábil e obter bons resultados.

Um teste de DNA ajudará a determinar o tipo de vírus

Tratamento de diferentes tipos de HPV

A maioria dos tipos de HPV não representa uma ameaça à vida e à saúde humana e seu tratamento limita-se ao uso de medicamentos que melhoram o funcionamento do sistema imunológico. Recomenda-se uma alimentação balanceada e tomar probióticos, pois... a imunidade está diretamente relacionada ao estado dos intestinos.

Se o tipo de HPV for altamente oncogênico, será necessária a remoção completa dos papilomas por cirurgia e medicamentos que inibam o vírus do papiloma humano. É importante estar atento às defesas do organismo, pois as cepas oncogênicas do vírus as afetam principalmente.

A sequência de nucleotídeos do genoma completo de cada pessoa é única. Esta propriedade pode ser usada para identificação. No entanto, actualmente, a sequenciação completa do genoma ainda é demasiado dispendiosa e demorada para ser utilizada rotineiramente. identificação humana. Felizmente, nem tudo é tão ruim... Não apenas a sequência de nucleotídeos do genoma completo do DNA de uma pessoa tem características individualizantes, mas também seu genótipo para um certo número bastante grande de seções altamente polimórficas (loci) do genoma.

Atualmente para identificação Em humanos, os chamados loci STR são usados ​​quase universalmente. A abreviatura STR vem da frase em inglês Short Tandem Repeat - literalmente: repetição curta em tandem. Loci deste tipo são cadeias que consistem em pequenas sequências idênticas (monômeros) ou “repetições”, com 2 a 6 nucleotídeos de comprimento. Os alelos desses loci diferem no número dessas repetições. Os loci STR têm as seguintes vantagens:

• Um grande número de alelos, o que ajuda a reduzir a probabilidade de coincidências aleatórias de genótipos de pessoas diferentes.
• Um grande número de loci STR conhecidos e sua distribuição relativamente uniforme em todos os cromossomos humanos.
• A capacidade de usar métodos modernos para digitar amostras de forma rápida, precisa e econômica nesses locais.

O padrão internacional de facto tornou-se o sistema CODIS(Sistema de Índice de DNA Combinado), consistindo de 13 loci STR autossômicos (D3S1358, THO1, D21S11, D18S51, D5S818, D13S317, D7S820, D16S539, CSF1PO, vWA, D8S1179, TPOX, FGA). Os loci deste sistema são selecionados de tal forma que a frequência de qualquer genótipo segundo eles é tão pequena que em toda a Terra não pode haver duas pessoas que tenham o mesmo genótipo segundo o conjunto de loci do sistema CODIS.

Nos laboratórios modernos, a genotipagem é realizada de forma automática por meio de sistemas de hardware e software, o que permite unificar o procedimento de tipagem e praticamente eliminar a influência do fator humano.

Na Fig. A Figura 1 mostra um exemplo de apresentação dos resultados da tipagem humana utilizando o complexo de hardware e software 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems). A digitação é realizada utilizando o sistema de locus identificador AmpFlSTR (Applied Biosystems), que contém todos os loci do sistema CODIS, loci STR adicionais D2S1338 e D19S433, bem como o locus AMELOGENIN, que determina o sexo da amostra.

Arroz. 1. Apresentação dos resultados da tipagem humana utilizando o complexo de hardware e software 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems).

O perfil genético resultante é apresentado em forma de tabela (Tabela 1):

Tabela 1. Exemplo de resultados de tipagem humana (o genótipo corresponde ao apresentado na Fig. 1).

Por que uma pessoa comum pode precisar análise de identificação?

Podem surgir situações em que seja necessário estabelecer a origem do material biológico de uma determinada pessoa. Isto pode ser necessário, por exemplo, para eliminar erros no diagnóstico do cancro. Muitas vezes, pessoas com diagnóstico de câncer chegam ao nosso Centro com a solicitação de verificar se seu material biológico foi realmente utilizado no exame histológico. Muitas vezes, os resultados da análise de identificação indicam que as amostras histológicas apresentadas não pertencem à pessoa que se inscreveu, mas sim a outra pessoa.

Preço:

*excluindo coleta de materiais

Prazo de conclusão (dias úteis)

Prazo de entrega**

O dia todo de acordo com o horário de trabalho do centro médico

Metodologia

não detectado

Material

raspagem urogenital

** O cronograma de entrega e as condições de preparação são relevantes apenas para esta análise. Caso necessite realizar vários testes, recomendamos que esclareça o cronograma e condições ligando para a central de atendimento.

*** Observe que o tempo das análises pode ser aumentado por razões técnicas relacionadas às características do biomaterial (amostras hemolisadas, quilosas, presença de coágulos, etc.), o que requer rearranjos e, em alguns casos, reamostragens do material.

Nomenclatura

Papilomavírus humano, HPV, papilomavírus humano, HPV

Descrição

O HPV é a infecção sexualmente transmissível mais comum. Afeta principalmente o epitélio, estimula seu crescimento e leva à formação de condilomas, verrugas e erosões. Mais de 100 tipos de papilomavírus são conhecidos. É possível que uma pessoa seja portadora de vários tipos do vírus ao mesmo tempo.

Alguns tipos de vírus (oncogênicos), quando integrados ao genoma das células epiteliais (integração), podem causar sua degeneração maligna, levando ao câncer. O transporte do HPV tipos 16 e 18 é considerado o mais perigoso, pois tem grande probabilidade de levar ao desenvolvimento de câncer cervical em mulheres.

Método de transferência

Contato (para contatos genital-genital, genital-oral, genital-anal), vertical (de mãe para filho), domiciliar.

Período de incubação

Varia de várias semanas a vários anos.

Recursos de teste

A análise da infecção pelo método da reação em cadeia da polimerase (PCR) permite uma determinação sensível e específica da presença do patógeno, além de determinar seus tipos.

Os resultados obtidos no estudo da estrutura e organização do DNA genômico de animais, plantas e microrganismos deixaram uma marca profunda na metodologia de sua sistematização. O problema de atribuir adequadamente um organismo específico a um grupo específico não é puramente acadêmico. Baseada em critérios precisos, a sistemática dos organismos vivos, que determina a relação evolutiva entre eles, é, além de puramente teórica, de grande interesse prático. Em particular, o conhecimento da origem das diversas estirpes de microrganismos patogénicos que causam infecções hospitalares permitiria o desenvolvimento de medidas de protecção eficazes contra a sua propagação.

Recentemente, foram descobertos marcadores genéticos na forma de sequências específicas de DNA, que permitem identificar relações relacionadas entre indivíduos da mesma espécie por meio de estudos intra e interpopulacionais. Este tipo de pesquisa sobre populações humanas é especialmente importante do ponto de vista prático. Atualmente, os métodos de genética molecular permitem identificar indivíduos em pesquisas forenses, bem como solucionar o problema de determinação da paternidade em casos polêmicos.

Tipagem genética ou de DNAé a determinação das características do genótipo de um organismo por meio da análise do DNA de seu genoma. Em outras palavras, no processo de tipagem do DNA, as características da estrutura primária do DNA do organismo em estudo são determinadas em loci genéticos específicos. Aparentemente não existem loci genéticos absolutamente conservados. Mudanças mutacionais no genoma acumulam-se continuamente ao longo do desenvolvimento filogenético (histórico, evolutivo) da espécie. Mas o mesmo tipo de mudanças está ocorrendo constantemente nos genomas de indivíduos pertencentes à mesma ou a diferentes populações. Naturalmente, os mais fáceis de detectar diferenças entre espécies nas sequências de nucleotídeos das regiões do genoma estudadas, uma vez que essas diferenças costumam ser significativas, e são elas que determinam a distância evolutiva entre as espécies (suas divergência).

Assim, cada espécie de organismo possui um grande número de diferenças intraespecíficas na estrutura primária do DNA de loci genéticos individuais. Loci genéticos que desempenham a mesma função (contendo o mesmo gene ou vários genes), mas diferem na estrutura primária do DNA, são chamados polimórfico, e o próprio fenômeno da existência de loci polimórficos em uma população é denominado polimorfismo genético.

1. Tipagem de DNA de microrganismos

Os dois métodos mais utilizados para tipagem de DNA de microrganismos patogênicos são atualmente baseados no método PCR. No primeiro caso, são utilizados um ou vários primers curtos de estrutura primária arbitrária, com 6 a 15 nucleotídeos de comprimento, que, devido ao seu pequeno tamanho, possuem baixa especificidade para loci genéticos específicos e são capazes de hibridizar com muitos sítios de DNA genômico. . No segundo caso, são utilizados primers oligonucleotídicos específicos, com 20 a 27 nucleotídeos de comprimento, cujas sequências flanqueiam a sequência de nucleotídeos em estudo no genoma bacteriano.

Arroz. II.35. Esquema para tipagem de DNA de microrganismos usando PCR e primers de estrutura arbitrária

A– diferenças específicas das estirpes devido à localização diferente das secções de ADN que interagem com os iniciadores. O DNA das cepas 2 e 3 carece de uma região que está presente no DNA da cepa 1, o que leva ao desaparecimento da banda correspondente do produto de PCR no eletroferograma; b– resultados da amplificação de DNA contendo sítios de ligação para primers de localização constante. O DNA das cepas 2 e 3 contém deleções de diferentes comprimentos entre os sítios de ligação do primer. Alternativamente, o ADN das estirpes 1 e 2 pode conter inserções que não estão presentes no ADN da estirpe 3. Isto reflecte-se nos comprimentos dos produtos de PCR separados por electroforese. A, B – locais de ligação de primers no DNA

Tipagem genética de microrganismos utilizando primers de estrutura primária arbitrária. A utilização de primers oligonucleotídicos curtos de estrutura arbitrária baseia-se no fato de que em genomas grandes existem múltiplos locais de pouso para eles e, conseqüentemente, início da PCR. Quanto mais curtos forem esses primers, maior deverá existir o número de locais de pouso para eles. Uma limitação para a participação adicional de tais iniciadores na PCR será a distância entre os dois locais de aterrissagem para iniciadores direcionados de forma oposta. Quanto mais longo for o produto de PCR que deve ser formado como resultado do funcionamento de tais primers, menos confiável será o funcionamento de todo o sistema de tipagem. Na prática, o comprimento dos produtos de PCR formados com primers arbitrários está na faixa de 0,2–2,0 kb.

Dependendo da localização no DNA dos locais de pouso para um par de primers curtos, dois tipos de produtos de PCR podem ser formados. No primeiro caso, as diferenças nos comprimentos dos produtos de PCR são devidas à presença no DNA dos microrganismos tipificados de um número diferente de sítios de ligação para um ou ambos os iniciadores (Fig. II.35, A). No segundo caso, tais diferenças são determinadas pelos comprimentos dos segmentos de DNA ( amplicons), concluído entre pares de locais de pouso de primers com seu número inalterado em loci genéticos específicos (ver Fig. II.35, b). Na prática, ambas as possibilidades podem ser realizadas simultaneamente. Durante a tipagem genética de eucariontes usando esses métodos, às vezes até 100 amplicons são imediatamente funcionais, enquanto em bactérias esse número chega a apenas 20.

Apesar do facto de na abordagem discutida as sequências iniciadoras serem escolhidas aleatoriamente, o padrão de amplificação resultante é geralmente específico da espécie e da estirpe. Além disso, o número de sítios de ligação no mesmo DNA para iniciadores do mesmo comprimento, mas com estruturas primárias diferentes, pode variar significativamente. Na Fig. II.35 mostra essas propriedades de vinte iniciadores de 10 nucleotídeos testados em DNA humano, de feijão e de S. aureus. Pode-se observar que o uso do primer AGGGGTCTTG, por exemplo, leva à amplificação de 8 amplicons em DNA humano, 3 amplicons em DNA de soja e não detecta um único amplicon em DNA de S. aureus, enquanto ao usar o primer AATCGGGCTG é possível detectar até 40 amplicons em DNA humano e soja e até 20 amplicons em DNA bacteriano. Assim, quando se utiliza o método discutido na tipagem de ADN, o passo mais importante é a selecção de iniciadores ou suas combinações para determinar de forma mais eficaz se um organismo pertence a uma determinada espécie, estirpe ou linhagem.

Tipagem genética de microrganismos usando impressões digitais genômicas. Outra abordagem à tipagem genética utilizando PCR examina o polimorfismo de loci específicos para os quais a estrutura primária é pelo menos parcialmente conhecida. São sintetizados iniciadores oligonucleotídicos específicos, cujos locais de ligação flanqueiam a sequência de DNA em estudo com um comprimento de 1,5–2,5 kb. Após a PCR, as características da estrutura primária dos produtos de PCR são determinadas por meio de análise de restrição. A posição dos locais de restrição na sequência de nucleotídeos analisada pode ser específica da espécie ou da cepa e servir como um marcador genético preciso de um microrganismo específico.

Usando este método, que é essencialmente uma variação do método para determinar RFLP discutido acima, são identificadas cepas de patógenos fenotipicamente semelhantes, estreitamente relacionadas, a estrutura genética das populações de microrganismos e os mecanismos de sua variabilidade adaptativa são estudados.