Imunidade- Esta é uma forma de proteger o corpo de corpos estranhos e substâncias portadoras de informações estranhas.

Função do sistema imunológico associado ao reconhecimento do “próprio” (moléculas do próprio corpo) e do “estrangeiro”. Este sistema é responsável pela inativação de substâncias e moléculas estranhas, denominadas antígenos .

Os antígenos são de 2 tipos:

1. Solúvel(proteínas, polissacarídeos, nucleoproteínas);

2. Insolúvel(bactérias, protozoários, células tumorais ou células infectadas por vírus).

Neste caso, as células do sistema imunológico não reconhecem o antígeno inteiro, mas um pequeno domínio molecular conhecido como determinante antigênico ou epítopo .

As reações que ocorrem no corpo em resposta à chegada de um antígeno são convencionalmente divididas em dois tipos:

1 reações do tipo celular;

2. reações do tipo humoral.

Essas reações são realizadas por células imunocompetentes. Ao mesmo tempo, a reação imunidade humoral dirigido contra antígenos solúveis. Termina com a formação de anticorpos, ou seja, substâncias de alto peso molecular que inativam esse antígeno.

Reação imunidade celular ocorre em resposta à chegada de um antígeno insolúvel e termina com a formação de células citotóxicas ou linfócitos T assassinos.

Para notas:

Classificação de células imunocompetentes

Este é um grupo amplo, incluindo linfócitos T e B, macrófagos, mastócitos, com base na função dessas células e as divide nos seguintes grupos:

1. Células apresentadoras de antígenos (APC);

2. Células efetoras;

3. Células auxiliares;

4. Células reguladoras;

5. Células de memória imunológica.

Células apresentadoras de antígenosé um sistema de células que transmite informações sobre o antígeno aos linfócitos T e B. Estes incluem macrófagos e monócitos, células dendríticas de folículos linfóides, certas subpopulações de linfócitos B e células M das placas de Peyer.

Células efetoras Estes são linfócitos T citotóxicos e células plasmáticas. Às vezes, as células NK também estão incluídas neste grupo.

Células auxiliares da imunogênese– incluem granulócitos, mastócitos (basófilos teciduais), células natural killer (células NK);

Células reguladoras– estes incluem auxiliares T (Tx), supressores T e supressores B. Monócitos, macrófagos, granulócitos e mastócitos podem atuar como células reguladoras de reações imunológicas.

Células de memória imunológica- são células que retêm a memória do antígeno depois que ele entra no corpo. Estes incluem: linfócitos de memória T e B (linfócitos de vida longa), bem como células interdigitantes e células dendríticas foliculares.

As principais células das reações imunológicas são linfócitos , que são conhecidos por serem divididos em linfócitos T e B. Sua designação é baseada no local de sua diferenciação: para o linfócito B - medula óssea vermelha, e para linfócitos T – timo. O processo de diferenciação dessas células nesses órgãos é denominado diferenciação independente de antígeno ou em conformidade Linfocitopoiese B e T .

Para notas:

Linfocitopoiese B

Ocorre na zona da medula óssea vermelha de acordo com o seguinte esquema:

HSC → CFU-L → precursor unipotente → linfócito pré-B (linfoblasto) → linfócito B imaturo (pró-linfócito) → linfócito B maduro (linfócito pequeno)

Os linfócitos maduros resultantes são divididos em muitos clones (cerca de 10 9), diferindo na especificidade antigênica de seus receptores Ig. Nesse caso, as células B de um clone apresentam na superfície uma proteína Ig de apenas uma imunoespecificidade. Esses receptores são formados como resultado do rearranjo da região do genoma que codifica fragmentos polipeptídicos de imunoglobulinas.

Linfocitopoiese T

(Diferenciação independente de antígeno)

Acontece de acordo com o seguinte esquema:

HSC → CFU-L → precursor unipotente → linfócito pré-T (linfoblasto) → linfócito pró-T (prolinfócito) → linfócito T maduro (linfócito pequeno)

Essa diferenciação dos linfócitos T ocorre no timo e termina com a formação de receptores TCR na superfície das células T. As células passam por um estágio de seleção positiva e duas proteínas aparecem na superfície do linfócito T (estágio pré-célula T), que distinguem Assassinos T E Células T auxiliares– estes são CD4 e CD8. A diferenciação adicional está associada à preservação de apenas uma proteína nos linfócitos T, respectivamente, CD4 ou CD8.

Reação imunológica do tipo humoral

Estes são os estágios sucessivos da resposta dos linfócitos B a um antígeno solúvel, diferenciação dependente de antígeno. A primeira fase é definida como a fase de reconhecimento do antígeno pela célula apresentadora de antígeno (APC).

Fase I

(Estágio de reconhecimento de antígeno)

1. Endocitose do antígeno APC;

2. Processamento de antígenos, ou seja, clivagem parcial de moléculas antigênicas com preservação de determinantes antigênicos altamente imunes, que apresentam a forma de cadeias peptídicas lineares, com 8 a 11 aminoácidos de comprimento.

3. Formação de um complexo epítopo com uma molécula do complexo principal de histocompatibilidade (MHC) e seu aparecimento na superfície da APC;

4. Apresentação do complexo (epítopo + MHC classe 2) na superfície da APC;

5. Secreção de interleucina 1 APC.

O principal complexo ativo neste circuito de reconhecimento de antígeno é complexo agroindustrial , que tem a capacidade de sintetizar MHC classe 2. Essas moléculas são sintetizadas na zona granular do RE, mas não na forma livre, mas na forma de um complexo com uma cadeia peptídica invariante, cuja função está associada ao transporte do MHC dentro do APC. É ela quem direciona a molécula do MHC para o endossomo contendo epítopo , neste caso a vesícula com MHC se funde com o endossomo e o complexo Epítopo MHC aparece na superfície do complexo agroindustrial.

Assim, o MHC de classe 2 está presente apenas em APCs “profissionais”; todas as outras células detectam moléculas de MHC de classe 1 em sua superfície, o que permite que essas células sejam reconhecidas por linfócitos citotóxicos. Veja a fig. 36

Arroz. 36: Esquema do tipo humoral imunológico

Fase II

Está associada à ativação do linfócito T auxiliar (Tx) pelo complexo MHC classe 2 com o antígeno localizado na superfície da APC. A ativação do Tx é completada pela liberação de linfocinas que regulam a atividade dos linfócitos T e B. Nesse caso, nas condições de desenvolvimento da imunidade humoral, ocorre a liberação de IL - 4, - 5, -6, - 9, -10. As interleucinas ativam os linfócitos B, que entram na fase de proliferação clonal e depois se diferenciam em células plasmáticas.

Fase III

Isso funciona célula plasmática , formado a partir de linfócitos B após estimulação de seus antígenos por T-helper/indutor, anticorpos (imunoglobulinas). Os anticorpos liberados inativam o antígeno, enquanto os anticorpos são caracterizados pela especificidade para antígenos e se ligam apenas ao antígeno para o qual foram produzidos.

Existem várias classes de imunoglobulinas: Ig G (75% no soro sanguíneo), Ig M (10%), Ig A (10%), Ig E (0,004%), Ig D (1%). A base para a diversidade estrutural dos anticorpos é determinada pela sequência de aminoácidos nas regiões variáveis ​​das cadeias pesada e leve.

Para notas:

Reação imunológica do tipo celular

Fase I

(Estágio de reconhecimento de antígeno)

Em sua primeira fase, ou seja, a fase de reconhecimento do antígeno, preserva-se o esquema descrito para a reação imunológica humoral. Também termina com o aparecimento de uma molécula e epítopo de classe 1 do MHC na superfície da APC.

Nesse caso, as moléculas do MHC classe 1 estão localizadas na superfície de todas as células, o que permite que os linfócitos T citotóxicos reconheçam e destruam células tumorais ou células infectadas por um vírus.

Fase II

(Ativação de linfócitos T)

O início desta fase são dois sinais dados ao linfócito T auxiliar:

1. Complexo de um epítopo de antígeno com uma molécula do MHC classe 1. Este complexo é reconhecido por TCR e CD8.

2. Síntese de interleucinas ou suas combinações. Veja a fig. 37

Th1 secreta IL-2 e interferon e também expressa receptores para IL-2 em sua superfície. A ativação de um linfócito T, na ausência de “seu próprio” antígeno MHC-1 na superfície celular, leva-os à transformação blástica e uma subpopulação de linfócitos T imunocompetentes ou T-killers é formada.

Arroz. 37: Esquema de reação imunológica do tipo celular

Fase III

(Interação da célula T assassina com a célula alvo)

1. Contato da célula T assassina com a célula alvo;

2. Aumento da concentração de íons Ca 2+ no linfócito T;

3. Exocitose de grânulos de perforina no espaço intercelular;

Usado com igual sucesso para dois propósitos. Em primeiro lugar, de acordo com o conhecido antígeno(diagnóstico) determinar a presença e o conteúdo quantitativo de anticorpos específicos para um determinado antígeno no soro de teste. Este último é determinado pela titulação do soro. Título o soro imunológico é chamado de diluição máxima, que ainda dá uma reação positiva. Em segundo lugar, com a ajuda do conhecido anticorpos , ou seja, soro imunológico de diagnóstico ou anticorpos monoclonais, determinar a presença de um antígeno microbiano específico no material de teste ou realizar a identificação sorológica do patógeno isolado.

As seguintes reações sorológicas são utilizadas para fins diagnósticos:

1. A reação de aglutinação em suas diversas variantes.

2. Reação de precipitação e suas diversas modificações.

3. Reações de imunofluorescência (RIF) nas versões direta e indireta.

4. Reações envolvendo complemento.

5. Reações que ocorrem com a participação de fagócitos.

6. Reações de análise imunoabsorvente em fase sólida.

7. Reações para neutralizar a atividade biológica de patógenos ou toxinas.

I. Reação de aglutinação

Aglutinação(de lat.agglutinatio - colagem) - colagem (conexão) de partículas corpusculares portadoras de antígeno (células inteiras, partículas de látex, etc.) com moléculas de anticorpos específicos na presença de eletrólitos, que termina com a formação de flocos ou sedimentos ( aglutinar) visível a olho nu. Usando a reação de aglutinação, é determinado apenascompleto anticorpos (divalentes).Incompleto anticorpos (monovalentes, bloqueadores) por estes métodos não detectado, pois, quando se combinam com o antígeno, bloqueiam-no, mas não podem causar agregação do antígeno em grandes conglomerados. Incompleto(bloqueio) são chamados de anticorpos nos quais apenas um centro ativo funciona; o segundo centro ativo não funciona por motivo desconhecido.

Há aglutinações direto , em que os próprios antígenos de uma célula bacteriana ou de qualquer outra célula participam diretamente da interação com anticorpos específicos, por exemplo glóbulos vermelhos; E indireto, ou passiva , em que células bacterianas ou eritrócitos, ou partículas de látex são portadores não de si próprios, mas de antígenos (ou anticorpos) estranhos neles absorvidos, a fim de identificar anticorpos (ou antígenos) específicos para eles. A reação de aglutinação envolve principalmente anticorpos pertencentes às classes IgG e IgM. Ocorre em duas fases: primeiro, ocorre uma interação específica entre o centro ativo dos anticorpos e o determinante do antígeno; esta fase pode ocorrer na ausência de eletrólitos e não é acompanhada por alterações visíveis no sistema reativo. Para a segunda etapa - a formação de um aglutinado - é necessária a presença de eletrólitos, que reduzem a carga elétrica dos complexos antígeno + anticorpo e aceleram o processo de sua colagem. Esta fase termina com a formação de um aglutinado.

As reações de aglutinação são realizadas em vidro ou em tubos de ensaio. As reações de aglutinação (diretas e passivas) em vidro são geralmente utilizadas como método acelerado para detecção de anticorpos específicos no soro do paciente (por exemplo, com brucelose) ou para identificação sorológica do patógeno. A vantagem indiscutível da reação de aglutinação em vidro é a simplicidade de sua implementação e o fato de levar vários minutos ou até segundos, já que ambos os componentes são utilizados de forma concentrada. No entanto, tem apenas um valor qualitativo e é menos sensível que um tubo de ensaio.

Reação de aglutinação detalhada em tubos de ensaio dá resultados mais precisos, pois permite determinar o conteúdo quantitativo de anticorpos no soro (estabelecer seu título) e, se necessário, registrar o fato de aumento do título de anticorpos, que tem valor diagnóstico.

Para estabelecer a reação, um soro diluído de uma certa maneira com uma solução de NaCl a 0,85% e um volume igual (geralmente 0,5 ml) de uma suspensão de um diagnóstico padrão (ou cultura de teste), contendo 1 bilhão de bactérias em 1 ml, são usados. adicionado aos tubos de aglutinação. Os resultados da reacção de aglutinação são registados primeiro após 2 horas de incubação dos tubos a 37 °C e finalmente após 20-24 horas de acordo com dois critérios: a presença e tamanho do precipitado e o grau de transparência do líquido sobrenadante. A avaliação é realizada de acordo com o sistema de quatro cruzes. A reação é necessariamente acompanhada de controle sérico do antígeno.

Deve-se levar em consideração que ao misturar soluções de antígenos e anticorpos homólogos, nem sempre são observadas manifestações visíveis da reação de aglutinação. Um precipitado é formado apenas em proporções ótimas de ambos os componentes da reação. Fora desses limites, com excesso significativo de antígeno ou anticorpos, nenhuma reação é observada. Este fenômeno é denominado " fenômeno prozona" ou um resultado falso negativo. É observado tanto na reação de aglutinação quanto na reação de precipitação. O aparecimento de uma prozona nas reações imunes é explicado pelo fato de os antígenos nelas envolvidos, via de regra, serem polideterminados, e as moléculas de anticorpos IgG possuírem dois centros ativos. Com um excesso de anticorpos, a superfície de cada partícula de antígeno é coberta com moléculas de anticorpo, de modo que não restam grupos determinantes livres, de modo que o segundo centro ativo não ligado dos anticorpos não pode interagir com outra partícula de antígeno e ligá-los entre si. A formação de um aglutinado ou precipitado visível também é suprimida quando há excesso de antígeno, quando não resta um único centro ativo livre dos anticorpos e, portanto, os complexos antígeno + anticorpo + antígeno não podem mais aumentar.

Reação imunológica – Esta é a interação de um antígeno com um anticorpo, que é determinada pela interação específica dos centros ativos do anticorpo (parátopo) com epítopos de antígenos.

Classificação geral das reações imunológicas:

reações sorológicas– reações entre antígenos (Ag) e anticorpos (Ig) em vitro;

reações celulares com a participação de células imunocompetentes;

testes de alergia– detecção de hipersensibilidade.

2.7 Reações sorológicas: objetivos de definição, classificação geral.

Estabelecendo objetivos:

a) para identificação de antígeno:

em material patológico (diagnóstico rápido);

em cultura pura:

identificação sorológica (identificação da espécie);

sorotipagem (determinação do sorovar);

b) para detectar anticorpos (Ig):

presença (reações qualitativas);

quantidades (aumento do título - método “soro pareado”).

Classificação geral reações sorológicas:

a) simples (2 componentes: Ag + Ig):

Reações de aglutinação de AR (com antígeno corpuscular);

Reações de precipitação PR (com antígeno solúvel);

b) complexo (3 componentes: Ag + Ig + C);

c) usando uma etiqueta.

2.8 Opções para reações de aglutinação e precipitação

Reação de aglutinação :

a) com antígeno corpuscular:

lamelar;

volumétrico;

não direto:

aglutinação de látex;

coaglutinação;

reação de hemaglutinação indireta (IRHA) = reação de hemaglutinação passiva (RPHA).

Reação de precipitação:

a) com um antígeno solúvel:

volumétrico (por exemplo, reação de precipitação em anel);

em gel (imunodifusão):

simples (segundo Mancini);

duplo ou contador (de acordo com Ouchterlony);

reação de neutralização de toxina com antitoxina (PH) (por exemplo, reação de floculação);

outras opções:

1. imunoeletroforese;

   imunotransferência.

Reações sorológicas complexas ( 3 componentes: Ag+Ig+C):

a) visível:

imobilização;

adesão imunológica;

lise (incluindo hemólise);

b) invisível:

reação de fixação de complemento (CFR).

2.10 Reações usando uma tag:

RIF – reação de imunofluorescência;

ELISA – ensaio imunoenzimático;

RIA – radioimunoensaio;

IEM – microscopia eletrônica imune.

Resposta imune. KIO. OGM

4 Resposta imune celular

Resposta imune (E SOBRE)- este é um cenário complexo reação do sistema imunológico corpo , induzido por um antígeno e visando sua eliminação .

De acordo com os mecanismos de ação efetora, os IAs são diferenciados:

– humorístico (fornecido pelo sistema imunológico B),

– celular (fornecido pelo sistema imunológico T).

Ao contrário do sistema B de imunidade , qual neutraliza antígeno com a ajuda de anticorpos

–O sistema imunológico T destrói antígenos apresentados nas células, através da interação direta de um subconjunto de células T– células T citotóxicas específicas (=células T CD8 = células T assassinas) com células próprias alteradas ou estranhas;

–Células T reconhecer não o peptídeo antigênico real (epítopo ) , E ele complexo com moléculas MHC I ou MHC II.

As reações KIO são baseadas em:

reações de rejeição de transplantes,

reação alérgica retardada,

imunidade antitumoral,

Estágios KIO:

absorção e processamento de AG

Como apresentação de antígeno As células (APC) no CIO envolvem células dendríticas ou macrófagos.

Em processamento se resume a:

– dividir a molécula original ao nível de peptídeos específicos,

– ativação da síntese de antígenos MHC classe I ou II na APC,

– formação de peptídeo antigênico + complexo MHC classe I ou II e sua expressão na membrana APC.

Apresentação AG:

– complexo peptídeo antigênico + MHC I apresentado para reconhecimento a linfócitos T pré-citotóxicos com fenótipo CD8+;

complexo peptídeo antigênico + MHC II- Células T auxiliares com fenótipo CD4+.

– reconhecimento Receptor de células T (TCR) do complexo peptídeo antígeno + MHC classe I ou II. Nesse caso, um papel importante é desempenhado pelas moléculas de adesão CD28 nos linfócitos T e CD80 (CD86) nas APCs, que desempenham a função de co-receptores;

ativação de linfócitos T – transição do estágio de repouso para o estágio G 1 do ciclo celular. A condição de ativação é a transmissão de um sinal da membrana celular para o núcleo. Como resultado, são formadas várias moléculas de transcrição que ativam os genes das citocinas mais importantes. São sintetizados IL2 e seus receptores - IL2R, interferon gama (γIFN) e IL4.

Proliferação – reprodução de um clone de linfócito T específico para um determinado antígeno ( expansão clonal) sob a influência de IL2. Apenas um clone multiplicado de linfócitos é capaz de desempenhar funções de eliminação de antígenos.

Diferenciação – o processo de especialização das funções celulares dentro de um clone específico:

– sob a influência do γIFN, é ativado o processo de síntese de IL12 pelas células apresentadoras de antígenos, o que afeta as células T auxiliares específicas originais zero (Th0) e, assim, promove sua diferenciação em Th1.

– Th1 produzem γIFN, IL2 e fatores de necrose tumoral alfa e beta, e também controlam o desenvolvimento da resposta imune celular e da hipersensibilidade do tipo retardado.

fase efetora – destruição da célula alvo. A função assassina de linfócitos pré-citotóxicos (assassinos específicos), células assassinas naturais, monócitos, macrófagos e granulócitos é ativada. Os PreCTLs diferenciam-se em CTLs expressando receptores de IL2.

Os CTLs matam bactérias e protozoários intracelulares, células infectadas por vírus, bem como células tumorais e de transplante alogênico.

Cada CTL é capaz de lisar diversas células alvo estranhas.

Este processo é realizado em três etapas:

reconhecimento E contato com células alvo;

golpe letal– perforinas e citolisinas atuam na membrana da célula-alvo e formam poros nela;

lise células-alvo - a água penetra pelos poros formados sob a influência de perforinas e citolisinas, rompendo as células.

Diagrama de uma resposta imune celular

Padrões de desenvolvimento da resposta imune humoral à penetração de antígenos dependentes e independentes do timo.

O processo de apresentação do antígeno ao linfócito depende do tipo de antígeno. Toda hipertensão é dividida em dependente do timo e independente do timo. A maioria dos antígenos é dependente do timo. Apresentação independente do timo o antígeno passa de acordo com o esquema: M––>Vl. Apresentação dependente do timo o antígeno passa de acordo com o esquema: M––> Th2––> Vl.

Timo independente poucos antígenos. Eles são mitógenos fortes. Deve ser polimerizado na natureza e possuir um grande número de epítopos idênticos (por exemplo: lipopolissacarídeos de microrganismos Gr (-) celulares). Na superfície dos linfócitos B existe um grande número de receptores de reconhecimento de antígenos com a mesma especificidade. Esses receptores são móveis. Assim que o lipopolissacarídeo atua sobre eles, ocorre a agregação dos receptores, levando à sua concentração em um local em forma de “tampa” - este é o primeiro sinal para a ativação dos linfócitos B. Os linfócitos B recebem o segundo sinal do macrófago na forma de um mediador, que é a IL1. Depois disso, o linfócito B é ativado e transformado em células blásticas; aumentam de tamanho, dividem-se 6 a 7 vezes e diferenciam-se em plasmócitos que sintetizam imunoglobulina de baixa especificidade IgM.

O antígeno independente do timo induz a proliferação de um clone de células com receptores específicos para o antígeno. A peculiaridade da IA ​​neste caso é a seguinte: 1) não há mudança da síntese de IgM para a síntese de imunoglobulinas da classe G e outras classes; 2) o IO fica mais lento, porque as células de memória não são formadas; 3) a tolerância imunológica ocorre rapidamente.

Antígenos dependentes do timo causa IO, que inclui as seguintes etapas: 1) Apresentação do antígeno ao T-helper; 2) reconhecimento específico do antígeno na superfície do macrófago pela célula T auxiliar através do receptor de reconhecimento do antígeno. O reconhecimento ocorre em combinação com moléculas HLA-DR. Nesta fase, tendo recebido informação antigénica do macrófago, a célula T auxiliar recebe um sinal mediador do macrófago na forma de IL-1. Isso ativa a célula T auxiliar. O T-helper ativado secreta várias linfocinas (IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, fatores mitogênicos e blastogênicos), o que promove a expressão de receptores para IL-2 e IL-2 no superfície dos linfócitos T. 4. Estes são os produtos do próprio T-helper, que o mantêm ativo. Além disso, esses produtos ativam os linfócitos B juntamente com a IL-1, que o linfócito B recebe do macrófago.

Reações de aglutinação
Estas reações envolvem antígenos na forma de partículas (células microbianas, glóbulos vermelhos e outros antígenos corpusculares), que são colados por anticorpos e precipitam.
Para realizar uma reação de aglutinação (RA), são necessários três componentes: 1) antígeno(aglutinogênio); 2) anticorpo(aglutinina) e 3) eletrólito(solução isotônica de cloreto de sódio).
Ag + AT + eletrólito = aglutinar

1. Estabelecimento de aproximado reações de aglutinação (RA) em vidro para identificar bactérias coliformes.

Arroz. 2. RA em vidro.

Aplique gotas em uma lâmina de vidro:

1 -ª gota: - soro aglutinante contra patógenos da disenteria;
2 -ª gota: - soro aglutinante contra patógenos da febre tifóide;
3 -ª gota: - solução salina (controle).
Adicione a cada gota testou cultura pura de bactérias . Mexer.

Observação: resultado positivo - presença de flocos aglutinados,
negativo - sem flocos aglutinar
Conclusão: As bactérias em estudo são os agentes causadores da febre tifóide.

2. Contabilização de resultados RNGA, projetado para detectar a toxina botulínica.

O agente causador do botulismo é Clostridium botulinum produz toxinas de sete sorovares (A, B, C, D, E, F, G), mas os sorovares A, B, E são mais comuns que outros. Todas as toxinas diferem nas propriedades antigênicas e podem ser diferenciadas nas reações soros específicos do tipo. Para tanto, pode-se realizar uma reação de hemaglutinação passiva (indireta) com o soro do paciente, no qual se presume a presença da toxina, e hemácias carregadas com anticorpos de soros antibotulínicos antitóxicos dos tipos A, B, E. Normal o soro serve como controle.

Arroz. 3. Demonstrativo e resultado da RNGA.

Contabilidade guarda-chuva botões ou um anel.

Conclusão: A toxina botulínica tipo E foi detectada no soro do paciente.

Reação de precipitação –É a formação e precipitação de um complexo de antígeno molecular solúvel com anticorpos na forma de uma nuvem chamada precipitado. É formado pela mistura de antígenos e anticorpos em quantidades equivalentes. A reação de precipitação é realizada em tubos de ensaio (reação de precipitação em anel), em géis, meios nutrientes, etc.

3. Configurando e registrando a reação precipitação anelar para determinar a espécie de mancha de sangue.

Encenação . Em um tubo de ensaio estreito nº 1 com diâmetro de 0,5 cm com precipitação não diluída soro contra proteínas do sangue humano na quantidade de 0,3-0,5 ml, mantendo-o em posição inclinada, o mesmo volume de antígeno é lentamente espalhado ao longo da parede com uma pipeta Pasteur ( extrato de mancha de sangue). O soro de precipitação contra proteínas de ovelha é colocado no tubo de ensaio nº 2 e no tubo de ensaio nº 3 - salina(controle) e adicione o antígeno da mesma forma que no primeiro tubo de ensaio. Coloque os tubos de ensaio na vertical, com cuidado para não misturar os líquidos. Quando o precipitinogênio é aplicado adequadamente no soro, a fronteira entre as duas camadas de líquido é claramente definida. A reação é necessariamente acompanhada de controles de soro e antígeno.
Contabilidade . Os resultados da reação são levados em consideração dependendo do tipo de antígeno e anticorpos após 5-10 minutos, 1-2 horas ou após 20-24 horas. positivo reação em um tubo de ensaio, um precipitado aparece na forma de um anel branco na fronteira entre o soro e o extrato em estudo.

Arroz. 4. Reação de precipitação em anel.

4. Determinação da toxigenicidade de Corynebacterium diphtheria em reações de precipitação em ágar.

Esta reação de precipitação há muito utilizada, proposta para determinar a toxicidade de Corynebacterium diphtheria, é realizada em ágar fosfato peptona em uma placa de Petri. Uma tira de papel de filtro estéril umedecida é colocada no meio. soro antitóxico. Após a secagem, as culturas selecionadas são semeadas em placas de 10 mm de diâmetro a uma distância de 1 cm da borda da faixa. Em um copo você pode semear de 3 a 10 safras, uma das quais, a testemunha, deve ser reconhecidamente toxigênica. As colheitas são colocadas em um termostato.

Contabilidade as reações são realizadas após 24-48-72 horas.Se a cultura for toxigênica, linhas de precipitado aparecem a alguma distância da tira de papel, coincidindo com as linhas de precipitado da cultura controle. Eles parecem " gavinhas de flecha", que são claramente visíveis na luz transmitida.

Arroz. 5. Reação de precipitação em ágar.

REAÇÕES IMUNOLÓGICAS PARA DETECÇÃO DE ANTICORPOS ESPECÍFICOS

5. Encenação reação de hemaglutinação indireta (RNGA) identificar o título de anticorpos específicos em um paciente.

Na reação de hemaglutinação passiva (RPHA), os glóbulos vermelhos são usados ​​como transportadores. Os glóbulos vermelhos carregados de antígeno unem-se na presença de anticorpos específicos para esse antígeno e precipitam. Eritrócitos sensibilizados por antígeno são usados ​​em RPGA como diagnóstico de eritrócitos para detecção de anticorpos (sorodiagnóstico).
Encenação . Uma série de diluições seriadas de soro são preparadas nos poços das placas de poliestireno. Adicione 0,5 ml de soro obviamente positivo ao penúltimo poço e 0,5 ml de solução fisiológica (controles) ao último poço. Em seguida, 0,1 ml de diagnóstico de eritrócitos diluído é adicionado a todos os poços, agitado e colocado em termostato por 2 horas.
Contabilidade . Num caso positivo, os glóbulos vermelhos depositam-se no fundo do orifício na forma de uma camada uniforme de células com uma borda dobrada ou irregular (invertida guarda-chuva), na negativa - liquidar na forma botões ou um anel.

Arroz. 6. Resultado RNGA. Título de anticorpos - 1:100.

6. Encenação extensa reação de aglutinação para identificar o título de anticorpos específicos em um paciente.

A AR completa para sorodiagnóstico é feita no soro dos pacientes. Também é diluído em solução isotônica de cloreto de sódio de 1:50 - 1:100 a 1:800 ou 1:1600. Uma vez que títulos séricos mais baixos podem conter aglutininas normais encontradas em pessoas saudáveis ​​ou pacientes com outro diagnóstico ( título diagnóstico). Diagnosticums são usados ​​como antígeno nesta reação - suspensões conhecidas, geralmente de bactérias mortas, com as quais é seguro trabalhar.
Eles põem reação como segue. 1 ml de solução isotônica de cloreto de sódio é primeiro colocado em tubos de aglutinação. Ao primeiro deles adiciona-se 1 ml de soro diluído 1:100 e, após misturar, transfere-se 1 ml para o segundo, do segundo para o terceiro, etc. 1-2 gotas de uma suspensão bacteriana contendo 3 bilhões de corpos microbianos em 1 ml são adicionadas às diluições duplas de soro resultantes (de 1:100 a 1:1600 ou mais). Os tubos são agitados e colocados em termostato a 37°C por 2 horas, depois mantidos em temperatura ambiente por 24 horas.

Contabilidade As reações detalhadas de aglutinação são realizadas avaliando cada tubo de ensaio sequencialmente, começando pelos controles, com agitação suave. Não deve haver aglutinação nos tubos de controle. A intensidade da reação de aglutinação é marcada pelos seguintes sinais: ++++ - aglutinação completa ( aglutinar flocos em um líquido absolutamente transparente); +++ - aglutinação incompleta (flocos em líquido levemente opalescente); ++ - aglutinação parcial(os flocos são bem visíveis, o líquido está ligeiramente turvo); + - aglutinação fraca e duvidosa - o líquido é muito turvo, os flocos nele contidos são pouco distinguíveis; - - ausência de aglutinação (o líquido é uniformemente turvo).
Atrás título soros são tomados sua última criação, em que a intensidade da aglutinação é avaliada com pelo menos dois pontos positivos (++)

Arroz. 7. Reação de aglutinação detalhada.

Os dois principais tipos de respostas imunológicas são reação inata E reação adaptativa (adquirida).Reação inata, que é realizado com a ajuda de neutrófilos, macrófagos, mastócitos e células natural killer, desenvolve-se rapidamente, é inespecífico e mais antigo do ponto de vista evolutivo. Não está associado à formação de células de memória. Adaptativo adquirido a resposta, que depende do reconhecimento inicial dos antígenos pelas células B e T, é muito mais complexa, ocorre mais lentamente, é específica, é acompanhada pela formação de células de memória e é considerada uma aquisição evolutiva mais recente.

A resposta imune ocorre como resultado da interação de linfócitos T e B, células apresentadoras de antígenos e citocinas. Inclui 4 fases: reconhecimento do antígeno, ativação, proliferação e diferenciação celular.

Os mecanismos adaptativos que levam à eliminação de antígenos são divididos em humorístico E imunidade celular. Imunidade humoralé fornecida por anticorpos produzidos por células plasmáticas derivadas de clones de linfócitos B ativados.

Resposta imune celularé formado durante o transplante de órgãos e tecidos, infecção por vírus e crescimento de tumores malignos. A imunidade celular se manifesta em dois tipos principais de reações - citotoxicidade e hipersensibilidade do tipo retardado (DTH). A imunidade celular envolve uma célula citotóxica (Tc), que reage com um antígeno em complexo com proteínas do MHC classe I na membrana plasmática da célula-alvo.

Reações citotóxicas proceda da seguinte forma: uma célula T citotóxica mata uma célula infectada por um vírus se reconhecer, usando seus receptores, fragmentos de proteínas virais associadas a moléculas do MHC classe I na superfície da célula-alvo infectada. A ligação de uma célula citotóxica às células-alvo leva à liberação de proteínas formadoras de poros chamadas perforinas, que polimerizam na membrana plasmática da célula alvo na presença de Ca 2+, transformando-se em canais transmembrana (poros). Através desses poros, outras proteínas secretadas pelo Tc entram na célula-alvo. granzimas. Estes, por sua vez, ativam enzimas intracelulares caspases. Estes últimos incluem sinais para o desenvolvimento de apoptose. A própria célula T assassina está protegida dos efeitos citotóxicos da perforina. O mecanismo de autodefesa é desconhecido.

Reações de hipersensibilidade tardia(HRT). Macrófagos e Tx participam dessas reações. Essas reações se desenvolvem vários dias após a exposição ao antígeno: ocorre compactação e inflamação do tecido como resultado de sua infiltração por linfócitos T e macrófagos. A TRH é causada por células T auxiliares (CD4+), que secretam citocinas (IFN-γ) que ativam macrófagos e induzem inflamação (TNF - fator de necrose tumoral).

Na TRH, o dano tecidual ocorre como resultado dos produtos de macrófagos ativados, como enzimas hidrolíticas, intermediários de oxigênio e citocinas. Na TRH crônica, a fibrose geralmente se desenvolve como resultado da secreção de citocinas e fatores de crescimento de macrófagos.

Medicamentos e cosméticos podem combinar-se com proteínas teciduais, formando um antígeno complexo, com o desenvolvimento da TRH de contato. As doenças infecciosas (brucelose, tularemia, tuberculose, hanseníase, toxoplasmose, muitas micoses, etc.) são acompanhadas pelo desenvolvimento de TRH, portanto, para o diagnóstico, são utilizados testes alérgicos cutâneos com alérgenos patogênicos (por exemplo, a reação de Mantoux).

Resposta imune humoral (produção de anticorpos) se desenvolve no corpo em resposta a antígenos localizados extracelularmente. Envolve macrófagos (células apresentadoras de antígenos), linfócitos Tx e B. Esta resposta é a seguinte.

O antígeno que entra no corpo é absorvido pelo macrófago. O macrófago o decompõe em fragmentos que, em combinação com moléculas do MHC de classe II, aparecem na superfície celular. Este processamento do antígeno por um macrófago é denominado em processamento antígeno.

Para o posterior desenvolvimento da resposta imune ao antígeno, é necessária a participação de células Tx (auxiliares). Mas primeiro, o próprio Tx deve ser ativado. O “reconhecimento” pela célula Tx do complexo “antígeno + molécula MHC classe II” na superfície do macrófago estimula a secreção de interleucina-1 (IL-1) pelo macrófago. Sob a influência da IL-1, a síntese e secreção de IL-2 pelas células Th são ativadas. A liberação de IL-2 pela célula Tx estimula a proliferação de células Tx (auxiliares). Tal processo pode ser considerado como estimulação autócrina, uma vez que a célula responde ao agente que ela mesma sintetiza e secreta. Um aumento na abundância de Th é necessário para a implementação de uma resposta imune ideal.

Tx ativa as células B secretando IL-2. A ativação do linfócito B também ocorre através da interação direta do antígeno com o receptor de imunoglobulina da célula B. O próprio linfócito B processa o antígeno e apresenta seu fragmento em complexo com uma molécula do MHC classe II na superfície celular. Este complexo reconhece Tx já envolvido na reação imune (Figura 11). O reconhecimento pelo receptor da célula Tx do complexo “AG + molécula MHC classe II” na superfície do linfócito B leva à secreção de interleucinas pela célula Tx - IL-2, IL-4, IL-5, IL-6 , γ-IFN (γ-interferon ), sob a influência do qual a célula B se multiplica e se diferencia com a formação de plasmócitos e células B de memória. Assim, a IL-4 inicia a ativação das células B, a IL-5 estimula a proliferação de células B ativadas e a IL-6 provoca a maturação das células B ativadas e sua transformação em células plasmáticas que secretam anticorpos.

O interferon atrai e ativa macrófagos, que começam a fagocitar e destruir mais ativamente os microorganismos invasores.

A transferência de um grande número de antígenos processados ​​pelo macrófago garante a proliferação e diferenciação dos linfócitos B para a formação de plasmócitos que produzem anticorpos específicos para um tipo específico de antígeno (Figura 13).

Resumindo, as respostas celulares e humorais não operam de forma autônoma. Via de regra, ambos os tipos de resposta imunológica são realizados simultaneamente no corpo. O reconhecimento de antígenos de diferentes naturezas pelas células T e B, uma variedade de reações e formas de resposta proporcionam, em geral, uma proteção poderosa do corpo ao longo de sua vida.

Abaixo estão figuras que mostram as interações de células imunocompetentes na imunidade celular e humoral.

Figura 13 - Principais processos que ocorrem durante uma reação imunológica